HIV实验室质量控制记录表
HIV-SOP文件全资料
HIV抗体检测标准操作程序（SOP）xxxxxxx艾滋病筛查实验室2010年3月1日dfg1.目的：为HIV实验室技术人员统一样品采集、登记和处理操作程序，保证样品采集、处理质量，特制定本程序。
2.适用围：适用于HIV实验室技术人员。
3.规性引用文件：《全国艾滋病检测技术规》（2004年版）。
4.相关器材设备：无菌注射器、一次性试管、镊子、无菌棉签、止血带、碘伏、记号笔等。
5.安全防护器材与措施：一次性乳胶手套、隔离衣、口罩、帽子；样品采集前首先穿好一次性隔离衣，戴好口罩、帽子，最后戴好乳胶手套，如果采集已知HIV感染者或艾滋病病人血液和体液时应戴双层手套，最后进行样品的采集工作。
采集标本时应注意安全，避免直接接触血液。
6.操作步骤：6.1样品的采集和处理艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。
常用样品的采集方法如下：6.1.1血清样品采集：首先用记号笔在一次性试管上标记好或编号，然后用注射器抽出3-5ml 静脉血，室温下自然放置1-2小时，待血液凝固和血块收缩后再用3000rpm离心15分钟，吸出血清备用。
6.1.2抗凝血样品采集：用加有EDTA抗凝剂的真空采血管或用消毒注射器抽取静脉血，转移至加有EDTA抗凝剂的试管，反复轻摇，使EDTA抗凝剂与血清充分混匀。
根据要求及时上送省艾滋病确认实验室或分离血浆和血细胞备用。
如需进行病毒RNA测定，应在4-8小时以分离血浆。
6.2 样品的保存6.2.1 根据检测要求不同样品分别保存：用于抗体检测的血清或血浆样品应存放于-20℃以下，短期（1周）进行检测的样品可存放于2-8℃。
6.2.2用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃以下，进行病毒 RNA检测的样品如长期（3个月以上）保存应置于-80℃。
6.3 样品的运送6.3.1实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。
样品应置于带盖的试管，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者、种类和采集时间。
艾滋病实验室质量管理与控制
〔3〕、冰箱和孵育箱
每天检查和记录冰箱温度，每个工作日检查记录
孵育箱温度，并做好记录。使用经过计量部门 当质控已方案并恰当地执行时，要求可靠的平均值和标准差用于计算质控限，将假失控概率降到最低。
②在加样时刮擦已包被抗原的微孔；
校准合格的温度计测量冰箱和孵育箱的实际温 CD4＋T淋巴细胞测定仪，病毒载量测定仪，离心机，全自动蛋白印迹仪，生物平安柜，高压灭菌器等，每次使用前检查仪器是否处于
实验过程中发现异常情况，应随时进展处理，可根据使 用情况更换必要的部件。
〔2〕、移液器
定期〔每年至少1次〕校准，发现异常情况 应随时进展校准。标定方法包括有色溶 液光谱分析法、称量校准法、同位素计 数法以及使用配套校准盒等。校准多道 移液器时，必须保证每一个加样头都能 够连续、准确地加样。移液器的精细度 应在厂家说明书规定的范围内。
〔2〕、仪器设备条件 配备艾滋病病毒抗体筛查试验所需设备，至少 包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、水浴箱 〔或温箱〕、离心机、加样器〔仪〕、消毒与 污物处理设备、实验室恒温设备、平安防护用 品和生物平安柜。
艾滋病检测点
〔1〕、建筑条件 需有艾滋病检测区域或专用实验台，能开展简 便、快速检测。
〔2〕、设备条件 需配备快速试验所必须的物品，包括普通冰箱、 消毒与污物处理设备、一次性消耗品、平安防 护用品。
• 实验室在使用新方法前，须对技术人员进展培训，获 得资格前方可开展相应工作。
• 检测人员应分为检验人、复核人、签发人。复核人、 签发人应具备对检测过程进展分析和解决问题的能力。
3、环境条件或检测区域应分为清洁区、半污染区和 污染区，应符合二级生物平安实验室〔BSL-2〕 要求。
艾滋病实验室质量管理与控制
HIV初筛实验室现场抽查记录表3
质控图分析占3分。
人员情况：
姓名
职务/职称
从事血清学检测
年限
HIV检测培训
级别和时间
常用筛查试剂：
检测方法
生产厂家
规格
批号
现存量
陪同检查人：检查人：
艾滋病筛查实验室现场检查评分表
检查项目
标准
评分要求
检查情况
得分
1、人员（10分）
①至少有3名从事HIV检测的专业技术人员（岗位责任书）（3分）
2、建筑设施
（10分）
①实验室污染区、半污染区和清洁区三区划分明确、功能合理(6分）
实验室区域划分清晰3分，区域功能合理3分。
(2)符合二级生物安全实验室相关规定（4分）
洗手池位置合理1分，
自动闭门装置1分，
门上可视窗1分，
纱窗与通风1分。
3、仪器设备
（10分）
①生物安全柜
仪器设备各占1分。
②高压灭菌器五Biblioteka 督查结论：□优秀（≥95分）；
□合格（60-95分），2个月内实验室改进后需重新督查；
□不合格（＜60分），需重新申请评审验收。
检查组成员（签字）：
日期：
艾滋病筛查实验室现场检查评分表
被检查单位（盖章）：检查时间：得分:
检查项目
标准
评分要求
检查情况
扣分
1、人员
（10分）
①至少有3名从事HIV检测的专业技术人员（岗位责任书）（3分）
③洗眼装置
④酶标仪
⑤洗板机
⑥加样器
⑦水浴箱
⑧实验室恒温设备
⑨离心机
⑩冰箱
4、实验室安全防护
（10分）
防护用品（工作服、口罩、手套和鞋）（4分）
艾滋病实验室样本登记表
附件1 初筛实验室HIV抗体检测标本登记表1附件2 河北省初筛中心实验室HIV抗体检测接收标本登记表2附件3HIV抗体检测试验记录编号实验步骤：1.样品、试剂、酶标板条室温平衡分钟。
2.取条板条，放在板架上，撕去板条上的封条。
3.在所有板孔中加入100µL的样品稀释液，包括要做质控的板孔。
4.在确定的板孔中加入50µL的标本或质控。
设3个阴性对照和1个HIV1阳性对照、1个HIV2阳性对照。
在加入标本之后加入质控，并填写加样顺序表(见下表)。
5.在微板上盖上贴膜，洗板前撕去贴膜，37℃孵育60分钟。
6.在进行孵育的过程中，准备以下试剂：（1）洗液（1:25）：浓磷酸盐缓冲液ml，加蒸馏水ml 。
（2）TMB底物液（1:1）：TMB ml，尿过氧化物ml。
（临用前配制）（3）1M硫酸：取浓硫酸（98%浓硫酸相当于18M），加蒸馏水ml。
7.磷酸盐缓冲液浸泡板孔60秒，洗板机洗板，洗6次。
8.每孔加入100µL TMB底物液，不要混匀或振荡，弃去多余的TMB底物液。
9.室温℃环境中孵育30分钟，闭光显色。
10.每孔加入100µL 1M硫酸，终止反应。
11.在450nm和620nm双波长读取每孔的吸光度，并打印结果。
ABCDEFGH结果分析：呈阳性反应，需复检；其余均为阴性反应。
河北省性病艾滋病预防监测中心HIV抗体检测试验记录编号实验步骤：1．样品、试剂、酶标板条室温平衡30分钟。
2．将酶联反应板从密封袋中取出，取下条板条，放在板架上。
按顺序编号，设一个空白对照孔，两个阳性对照孔，两个阴性对照孔。
3．每孔加入50µl样品稀释液，取阳性对照和阴性对照分别充分混匀后各50µl加入对照孔中，空白对照孔只加样品稀释液，其余每个孔加待检血清50µl，（要先加样品，后加对照）轻轻振荡，充分混匀。
并填写加样顺序表(见表)。
4．用不干胶封片封盖反应板，置37℃温育30分钟。
HIV初筛实验室常用表格
附表1 HIV抗体筛查报告REPORT OF HIV ANTIBODY SCREENING TESTING 秘密SECRET 编号NO．PRINTED BY CHINESE CENTER FOR DISEASECONTROL AND PREVENTION 中国疾病预防控制中心制订附表2HIV抗体复检化验单秘密编号中国疾病预防控制中心制订附表3 HIV抗体确认检测报告单REPORT OF HIV ANTIBODY CONFIRMATORY TESTING 秘密SECRET 编号NO．PRINTED BY CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION中国疾病预防控制中心制订附表4HIV感染流行病学监测疫情报告单REPORT OF HIV SEROEPIDEMIOLOGY SURVEILLANCE 秘密SECRET 报告单编号NO．第页共页附表5HIV抗体替代策略检测报告单REPORT OF HIV ANTIBODY ALTERNATIVE STRATEGY TESTING 秘密SECRET 编号NO．PRINTED BY CHINESE CENTER FOR DISEASE中国疾病预防控制中心制订CONTROL AND PREVENTION附表6HIV抗体检测数季报表__________年季度填报单位：E-mail：__________________ No.单位（盖章）：填表人(签字)：报告日期：年月日附表7艾滋病职业暴露个案登记表填表单位______________________ 填表人______________________ 审核人______________________ 填表时间______________________ 联系电话______________________附表8艾滋病防治工作人员职业暴露事故汇总表填表日期：填表单位：填表人：审核人：。
HIV实验室标准操作规程(SOP文件)
目录LAB/SOP/01……………进口680型酶标仪仪器操作指南LAB/SOP/02……………进口680型酶标仪软件操作帮助LAB/SOP/03……………进口1575型洗板机简易操作流程LAB/SOP/04……………电热恒温箱使用规程LAB/SOP/05……………离心机使用规程LAB/SOP/06……………生物平安柜使用规程LAB/SOP/07……………消毒剂的配制LAB/SOP/08……………废弃物品的消毒处理LAB/SOP/09……………工作区的消毒LAB/SOP/10……………实验室平安制度LAB/SOP/11……………实验室带入物品的平安要求LAB/SOP/12……………实验室带出物品平安要求LAB/SOP/13……………实验室人员的管理和健康监护LAB/SOP/14……………样品的运送和发放LAB/SOP/15……………事故紧急处理LAB/SOP/16……………潜在性感染材料的接收LAB/SOP/17……………实验室平安操作要求LAB/SOP/18……………实验标准操作程序1LAB/SOP/19……………实验标准操作程序2LAB/SOP/20……………实验室记录的标准操作程序LAB/SOP/21……………保证数据完整性标准操作LAB/SOP/22……………用、、E-mail报告结果的标准操作程序LAB/SOP/23……………手提式电热压力蒸汽消毒器的标准操作程序LAB/SOP/24……………样品的采集、登记、处理、保存和运输编号：LAB/SOP/24样品的采集、登记、处理、保存和运输1 样品的采集和处理艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。
唾液或尿液有时也可作为测试样品。
1.1 血清样品采集和处理1.1.1 用一次性注射器〔或真空采血管〕抽取一定量静脉血，室温下自然放置1～2h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min，吸出血清备用。
1.1.2 如用滤纸片采样，那么手指或耳垂局部严格按常规进行消毒，在刺破皮肤后，迅速把滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其它物体外表造成污染。
HIV检测点的质量管理与控制
检测人 复核人 签发人
不能一人同 时承担多个
角色！
二、环境条件
须有HIV抗体检测区域或专用实验台，能 开展简便、快速的检测。
检 测 点
须配备快速试验所必须的物品，包括冰箱、 消毒与污染物处理设备、一次性耗材、安 全防护用品等。
HIV
三、样品的采集和保存
尽 免量
避
溶血
内源性HRP
假
细菌污染
阳
性
抗凝不完全
注：血清置4℃冰箱5天内完成检测
四、检测方法和试剂选择
试剂
必须是HIV-1/2混合型,并且经国家食品药品监督管理 局注册批准、批检合格、在有效期内，经临床质量评 估敏感性和特异性高。
更换试剂批号时应进行平行实验。
检测方法
使用快速检测的方法，常用：金标、硒标。
五、设备维护与校准
加样器 温度计 高压锅
实验室安全防护、清理及消毒
SOP应包括 的内容
标题和编号 编写和修订日期 编写和修订人员姓名 方法、目的和应用范围
检测设备 试剂及有效期 安全防护相关步骤 结果的解释和报告
附录
每年修订 一次
2.实验原始记录
测定方法
试剂厂家 试剂批号
原始记录表
试剂效期
操作人员姓名 复核人员姓名
检测日期
3.结果报告Leabharlann 质量控制一、实验室质量控制的定义
定义
为达到质量要求所采取的作业技 术和活动。
二、快速法抗体检测的质量控制
1、室内质量控制的质控品
试剂内部对照
判断试验有效性，但不能作为室内质控品。
室内质控品
监控检测的重复性。可只设弱阳性质控，以试剂盒临界值的 2~3倍为宜。
HIV抗体检测与质量控制
快速检测（RT）及其它检测试验
酶联免疫吸附试验（ELISA）
HIV抗体检测试剂（第三代）：检测HIV-1/2抗
体
HIV抗原抗体联合检测试剂（第四代）：可同时
检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体
用酶标仪测定结果
有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定
ELISA试验中可能出现的问题和原因分析
问题 可能的原因（非试剂盒本身的原因） 1.加样本及试剂量不准 2.加样过快，孔间发生污染 3.加错样本 测定的重复性差 4.加样本和试剂时，加在孔壁上部非包被区 5.温育时间、洗板、显色时间不一致 6.酶标仪滤光片问题
ELISA试验中可能出现的问题和原因分析
问题 可能的原因（非试剂盒本身的原因） 1.漏加酶结合物 白板（阳性对照 2.洗液配制问题，量筒不干净含酶抑制物 不显色） 3.漏加显色剂A或B 4.终止液当显色剂使用 1.洗板不干净 全部板孔都有显 2.加底物的吸头被酶污染 色 3.洗板液受酶污染
病毒特点
HIV病毒主要攻击人体的辅助T淋巴细胞系统； 一旦侵入机体细胞，病毒会和细胞整合在一起 终生难以消除；病毒基因变化多样；广泛存在 于感染者的血液、精液、阴道分泌物、唾液、 尿液、乳汁、脑脊液、有神经症状的脑组织液 ，其中以血液、精液、阴道分泌物中浓度最高 ；对外界环境的抵抗力较弱，对乙肝病毒有效 的消毒方法对艾滋病病毒消毒也有效；感染者 潜伏期长、死亡率高；艾滋病病毒的基因组比 已知任何一种病毒基因都复杂。
体外生存
人类免疫缺陷病毒在人体外生存能力极 差，不耐高温，抵抗力较低，离开人体 不易生存，常温下只可生存数小时至数 天。 HIV对热敏感。在56℃条件下30分钟即 失去活性，但在室温保存7天，仍保持活 性。
艾滋病病毒(HIV)初筛实验室室内质量控制标准操作程序
艾滋病病毒(HIV）初筛实验室室内质量控制标准操作程序【目的】保证ELISA检测结果准确可靠，充分发挥其方法学的优点.【该SOP变动程序】本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：科主任、专业主管。
【方法】【分析前质控】一、人员培训实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识：1、检验项目的基本原理（ELISA原理)。
2、临床意义。
3、熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点。
4、熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）。
5、熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。
6、需参加有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗.二、室内质控血清的制备：1、收集阳性血清（无明显溶血、黄胆、脂肪血和污染血清,到一定量（够本室使用3-6个月的量）。
2、传染性病毒阳性需经56℃、30分钟灭活后使用。
3、过滤，除纤维沉淀物。
4、稀释，用正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀释。
5、测定值,与定值参考品进行对比、求值，一般定在Cut Off值附近的阳性值。
6、分装小瓶（每日用量），加盖、贴签,—20℃冻存备用。
【试剂盒选择】必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格,并贴有防伪标签的产品.【试剂盒评价】试剂评价需要有权威的血清考核盘(Panel）进行检测，价格昂贵，操作繁琐，一般实验室不易开展，可以通过以下信息，了解试剂质量。
1、根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告,了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂。
2、通过询问试剂包被物的组成,如原料来源（基因工程或合成多肽),片段的组合（按比例混合或化学合成），片段的长短等判断试剂的优劣。
3、参考室间质评报告中对试剂的评价结果，了解不同试剂的质控成绩.4、根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣.【仪器质控】为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP)，所要控制的仪器包括移液器(加样枪),水浴箱(温箱)，洗板机和酶标仪。
HIV实验室生物安全和质量控制
艾滋病实验室生物安全一、HIV的生物危害•第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。
人类免疫缺陷病毒（HIV）属第二类病原微生物，是高致病性病原微生物。
HIV相关检测的生物安全级别•HIV抗体检测（包括筛查和确证实验）、抗原检测和相关的免疫学检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。
• HIV分离培养、浓缩、中和试验、细胞培养及研究工作及其它需要应用活病毒的研究工作，应在Ⅲ级生物安全实验室（BSL-3）中进行。
• HIV核酸提取和检测均应在符合Ⅱ级生物安全实验室（BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。
• HIV病毒株应保存在符合Ⅲ级生物安全实验室（BSL-3）要求的艾滋病实验室；HIV阳性样品，包括全血、血清、血桨和其他组织（液）、核酸提取物应保存在符合BSL-2要求的艾滋病实验室。
二、生物安全保证措施1.建立安全制度实验室的安全工作制度或安全标准操作程序（S-SOP）。
意外事故处理预案，主要是生物安全意外事故。
内容包括应急处理、登记和报告、调查和处理。
信息安全及保密制度：与HIV/AIDS检测相关的所有资料均应严格保密，包括送检单、检测记录、样品登记、报告单及工作人员年度检测结果等，不得对无关人员透露检测结果。
•培训和管理实验室应进行全员安全培训并强化―普遍性防护原则‖安全意识，所有的血液、未固定的组织和组织液样品，均应视为有潜在的传染性，都应以安全的方式进行操作。
所有管理和检测人员都应接受省级以上艾滋病检测实验室主持的安全培训，包括上岗前培训和复训，并接受管理人员的监督。
必须对新上岗人员进行安全教育和培训，使他们清楚实验室工作的潜在危险，通过考核等方式确认他们具备安全操作的能力后方可单独工作。
必须对新调入人员、外来合作、进修和学习的人员进行生物安全培训，经实验室主任批准后，方可进入实验室。
生物安全培训和监督应有客观详实的记录。
实验室主任应详细了解所有工作人员的教育和培训背景、特长、性格特点等。
HIV实验室管理及质量控制
HIV实验室管理及质量控制HIV实验室管理及质量控制引言HIV（人类免疫缺陷）是一种引起艾滋病的，全球范围内仍然是一个严重的公共卫生问题。
对HIV感染的及时诊断和准确监测对于预防和控制艾滋病的传播至关重要。
为了保证HIV实验室的准确性和可靠性，良好的实验室管理和质量控制是必不可少的。
HIV实验室管理设备和设施HIV实验室应当配备必要的设备和设施，以确保诊断和监测工作的顺利进行。
这些设备包括PCR仪器、酶联免疫吸附试验（ELISA）读板仪和显微镜等。
此外，实验室还应当提供充足的工作空间和储存空间，以确保样本的安全和防止交叉污染。
实验室设备和设施的维护和维修也是实验室管理的重要组成部分。
人员培训HIV实验室的工作人员应当接受系统的培训，熟悉操作流程和标准操作规程（SOP），并具备良好的实验室实践技能。
培训内容应涵盖HIV感染的基础知识、安全操作规范、质量控制和质量保证等方面。
定期的培训和持续教育有助于实验室人员不断更新知识和技能。
样本管理良好的样本管理是HIV实验室管理的重要环节。
样本的准确标识和追踪可以确保结果的可靠性和完整性。
实验室应制定严格的样本接收、存储和处理标准，确保样本在整个分析过程中的可追溯性。
数据管理HIV实验室应建立健全的数据管理系统，保护样本和患者的隐私。
数据的记录、存储和传输应满足相关的法规和政策要求。
实验室应定期备份数据，并确保数据的安全性和完整性。
HIV实验室质量控制质量控制计划HIV实验室应制定和实施质量控制计划，确保实验室工作的准确性和可靠性。
质量控制计划应包括以下内容：- 内部质量控制：实验室应每天进行内部质量控制，使用已知浓度的阳性和阴性对照品，检测系统的稳定性和准确性。
- 外部质量评估：实验室应参加外部质量评估计划，与其他实验室进行比对，评估实验室的表现并及时采取措施纠正任何偏差。
- 质量事故报告和分析：实验室应建立质量事故报告和分析机制，及时发现和解决质量问题，防止类似问题的再次发生。