激光共聚焦显微镜操作手册最终版

徐珏2011.12.3 17:59 于苏州宝石御景园

目录

标准探测模式（DU4）图像拍摄流程 (1)

一、软件开启 (1)

二、基本设置 (2)

[A1 Setting]界面主要功能区域简介 (2)

[Setting]界面功能简介 (4)

[Filter and Dye]功能区简介 (6)

串色现象解释及Line模式图解 (6)

Line模式图解 (7)

[scan setting]功能区简介 (7)

三、获得图像 (8)

[Acquisition]功能区简介 (10)

放大方式选择按钮简介 (13)

图片扫描参数调用简介 (17)

JP2格式图片转化为JPG/TIFF格式图片的操作 (18)

各通道荧光图像自由叠加的介绍 (18)

数据分析 (21)

一、ROI区域分析 (21)

二、LUTs调节图像荧光亮度 (23)

三、去背景 (25)

四、标尺添加 (26)

六、长度面积等常规测量 (28)

七、细胞计数 (28)

[Binary Toolbar]界面简介 (32)

光谱扫描模式（SD模式） (34)

一、SD模式基本设置 (34)

[Detector]标签页功能简介 (35)

[Binng/Skip]标签页简介 (36)

二、图像获得 (37)

三、数据分析 (39)

[Spectrum Profile]视窗简介 (40)

四、光谱拆分 (40)

虚拟滤光扫描模式（VF模式） (47)

一、VF模式基本设置 (47)

[Detector]设置标签页简介 (48)

[Gating Setting]标签页简介 (48)

二、获得图像 (48)

时间序列拍摄 (49)

[Capture Timelapse]视窗简介 (49)

[ND]界面简介 (51)

[Time Measurement]界面简介 (53)

[Capture Z-series]视窗简介 (55)

拼大图拍摄 (60)

光活化序列拍摄 (61)

[Photo Acquition]功能区简介 (62)

[Sequential Stimulation]界面简介 (63)

常见细胞类型和细胞器形状 (65)

常用荧光染料及应用领域 (68)

标准探测模式（DU4）图像拍摄流程

一、软件开启

1、双击桌面NIS-Element图标。

2、出现对话框后，选择[Nikon A1/C1 Confocal]，点击OK按钮。

3、出现NIS启动窗口，软件与硬件通讯开始建立，此过程将持续5-10秒或者更长，请耐

心等待。通讯建立后，自动出现NIS-Element操作主界面。

二、基本设置

4、鼠标右击操作主界面空白处，在[Acquisition Controls]中选择[A1 Settings]，出现激光模式设置界面（A1 setting）。

[A1 Setting]界面主要功能区域简介：

5、根据实验情况设置光路，点击[Filter and Dye]功能区中的[Setting]按钮，打开详细的光路设置界面（Setting）。

[Setting]界面功能简介：

6、点击[OK]按钮回到[A1 Setting]界面，由于[Setting]界面中光路设置的调整，[Filter and Dye]和[Acqusition]功能区会做出相应的改变。下图为标准探测模式（DU4）的通道界面。

[Filter and Dye]功能区简介：

串色现象解释及Line模式图解：

串色：目前的光路设置为一个激光激发样品产生的发射光只对应一个接收通道，则当同时有两种及以上激光激发样品时，如一种或多种激光激发的发射光在多个通道均可检测到，将导致测试结果的不正确。

Line模式图解：

一个方格为一个像素点，一行为扫描的一条线。

7、在[A1 Setting]界面的[scan setting]功能区设置扫描参数，扫描参数在扫描过程中也应根据情况进行调整。

[scan setting]功能区简介：

三、获得图像

8、点击[Acquire]功能区[Live]按钮，开始扫描，主界面出现扫描图像[Live]视窗，视窗中功能键介绍见数据分析章节。

鼠标滚轮前后滑动，调整焦距以找到荧光强度最大的焦平面，得到亮度最高的扫描图像。

图像在标准探测模式（DU4）下获得，注意下方通道标签和[Filter and Dye]功能区探测器类型和色彩的一一对应关系。[All]标签页为所有通道图像全部叠加到一起后的图像；色彩标签页为所对应探测器通道的图像。

[TD]标签页为激光明场图像；[Custom]标签为自定义标签，鼠标右击custom标签，点击属性，可选择两个或几个所需要通道进行叠加得到所需要的图像；右击色彩通道标签，选择属性，还可改变通道色彩。

9、扫描图像亮度调节。

荧光亮度应处在一个合适的范围，既不能太低使画面显得模糊，也不能太高使画面曝光过度，同时希望背景干净，随机噪声少；因此需要对图像的荧光亮度进行调整。在Live状态下，[Acquisition]功能区通过调整PMT探测器增益（HV）,激光发射功率（Laser）和针孔（pinhole）大小改变扫描图像亮度。[scan setting]功能区也应配合调节，但必须在Frozen 状态下进行，否则会对扫描头造成严重损害！

[Acquisition]功能区简介：