酪氨酸酶的提取及其催化活性研究
酶的提取及其活性影响
青 岛 科 技 大 学本 科 毕 业 设 计（科 技 论 文）题目 __________________________________ __________________________________指导教师__________________________ 辅导教师__________________________ 学生姓名__________________________ 学生学号______________________________________________院（部）____________________________专业________________班 ______年 ___月 ___日酪氨酸酶的提取及其催化活性研究 影响唾液淀粉酶活性的因素化学 应用化学 112 2014 11 14酶的提取及其催化活性研究摘要绝大多数酶的化学本质是蛋白质，本文从酶活性的定义出发，论述了酶的种类、特性以及影响酶活性的因素，酶在人们的生产、生活中均有广泛应用，探讨酶的特性对研究酶的人工合成有积极意义，通过与酶促反应速率的影响因素的比较，阐释影响酶活性的因素,来帮助我们正确理解酶活性以及理解酶活性的影响因素。
The chemical nature of most enzymes are proteins, from the definition of enzyme activity of enzyme, discusses the types, characteristics and factors affecting enzyme activity, enzyme are widely used in people's production and life, has a positive meaning to explore the properties of the enzyme to study enzymatic synthetic, through influence and enzymatic reaction the rate of factor comparison, explains the factors affecting enzyme activity, to help us to correctly understand the enzyme activity and enzyme activity factor influence understanding.关键词：酶；活性；影响因素1.综述1.1酶的简介酶（enzyme）是由生物细胞合成的、对特定底物（substrate）起高效催化作用的蛋白质，是生物催化剂。
酶的种类,活性及影响因素
【摘要】：酶广泛存在与生物体中，对生命的生化反应至关重要
，本实验主要探究不同浓度下催化活性的不同，以及温度，pH值，抑 制剂对于酶活性的影响。
【关键词】：酪氨酸酶，唾液淀粉酶，活性，pH，温度
，抑制剂
【酶的特性综述】
酶是一种具有生物活性的蛋白质，有单纯酶和结合酶 两种。单纯酶只含蛋白质，不含其它物质，其催化活性 仅由蛋白质的结构决定。结合酶则由单纯蛋白质和辅基 组成，辅基是结合酶催化活性中不可缺少的部分。 (1)酶的催化效力远远超过化学催化剂(高108～109倍)。 (2)酶催化剂具有高效化学选择性，能从混合物中选择特 定异构体进行催化反应。 (3)酶催化剂对反应条件要求苛刻，如pH值、温度都各有 特定的界限，超出界限即可引起酶蛋白的变性与分解。
根据实验数据所画图及求出的活度来看，分别加入0.1ml、0.2ml、0.3ml、 0.4ml的活性是不一样，按照实验推测，应该是逐渐上升的，但是从实验结果 反应的情况上来看，并不是如此，而是上升之后下降，原因在于酶提取液提 取之后保存方法不得当，并没有冰浴，所以导致酶失活，从而导致活性下降 的情况
酶活性影响因素的研究
结论
（1）酶是一种活性蛋白质，因此，一切对蛋白质有影响的因 素都影响酶的活性。酶与底物作用的活性，受温度、pH值、 酶液浓度、底物浓度、酶的激活剂或抑制剂等许多因素的影 响。 （2）提取物在放置过程中变黑，是由于他们的组织中都含酪 氨酸和酪氨酸酶，酶存在于组织内部，当内部物质暴露于空 气中，在氧的参与下将发生反应，生成黑色素。 （3）酶的催化作用，只有在一定温度下才能体现出来。酶在 低温下活性暂时被抑制，高温时会永久失活。
酪氨酸酶简介
香樟果实酪氨酸酶的分离、纯化和性质分析的开题报告
香樟果实酪氨酸酶的分离、纯化和性质分析的开题
报告
一、研究背景
香樟属植物广泛分布于世界各地，是生产香气剂、树脂等重要原料。
香樟果实是香樟植物中的一种重要器官，含有丰富的化学成分。
其中的
酪氨酸酶是一种重要的酶类，在浸提香樟果实中起着关键作用。
因此，
对香樟果实中的酪氨酸酶进行研究，可以有效提高香樟果实的提取效率，为香樟制品生产提供技术支持。
二、研究内容：
本研究旨在对香樟果实中的酪氨酸酶进行分离、纯化、鉴定及性质
分析。
具体包括以下几个方面：
1. 香樟果实样品的采集及制备：通过采集香樟果实样品，并对其进
行初步处理，去除杂质和污染物，获得纯净的香樟果实样品。
2. 酪氨酸酶的鉴定及初步分离：通过对香樟果实样品进行酪氨酸酶
鉴定和初步分离，获得高纯度的酪氨酸酶样品。
3. 酪氨酸酶的纯化：通过离子交换、凝胶过滤、亲和层析等多种纯
化方法，获得高纯度的酪氨酸酶样品。
4. 酪氨酸酶的活性测定及性质分析：通过测定酪氨酸酶的催化能力、温度敏感性、热稳定性、酸碱性等活性特征，并分析酶的分子量、结构
等性质信息，探讨酶的结构与功能之间的关系。
三、研究意义
本研究对于提高香樟果实的提取效率和制品的品质有着重要的实际
应用价值。
同时，还可以为酶的结构与功能之间的关系研究以及相关领
域的研究提供参考和借鉴。
酪氨酸酶的催化作用
酪氨酸酶的催化作用[原理]酪氨酸酶是一种以铜为辅基的结合蛋白酶，这种氧化酶可直接作用于底物多巴生成多巴醌，然后经过一系列的反应，最终生成黑色素。
在多巴转变为多巴醌的反应中，酪氨酸酶使多巴中的氢原子的两个电子传递给分子氧，使后者转变为氧离子，游离在溶液中的两个质子与氧离子化合生成水。
其催化的主要反应及电子传递过程如下：酪氨酸是甲状腺素、肾上腺素和黑色素的前体。
人类皮肤、毛发和眼睛虹膜的黑色素是酪氨酸在酪氨酸羟化酶催化作用下生成了3,4-二羟苯丙氨酸（简称多巴，DOPA ），后者在酪氨酸酶的作用下生成多巴醌，而后经过一系列中间反应，最后聚合成黑色素。
白化病（albunism ）是一种表现为皮肤、毛发和虹膜变白，因为缺乏酪氨酸酶而不能合成黑色素的先天性代谢缺陷性疾病。
酪氨酸酶也广泛分布于植物界，例如新鲜蘑菇、马铃薯（外层含量尤多）和谷物等。
[试剂]1．酪氨酸溶液 0.1g 酪氨酸溶于100ml 0.1%碳酸钠溶液中。
2．马铃薯抽提液 切碎马铃薯约6g 置于研钵中，加少量净砂，研成匀浆，再加蒸馏水l0ml 充分研磨；最后通过棉花过滤，即可获得含有酪氨酸酶的马铃薯抽提液。
3．煮沸过的马铃薯滤液 取2ml 试剂2于试管内，在酒精灯上加热至沸以破坏酶的活性。
4．液体石蜡[主要器材]研钵、恒温水浴箱CHCOOH NH 2 酪氨酸 2[操作步骤]取试管3支按表10进行操作表10试剂（滴） 1 2 3煮沸过的马铃薯液20 ——马铃薯抽提液—20 20酪氨酸液20 20 20充分混匀各管液体石蜡—— 5置35℃~40℃水浴约30分钟，观察并记录各管颜色，试解释所得的结果。
[注意事项]1．煮沸马铃薯液时，小心勿使液体溅出。
2．加液体石蜡时宜斜执试管，沿管壁缓缓加入，不要产生气泡；加入的液体石蜡必需完全覆盖液面，以隔绝空气。
2013-14学年第一学期应用化学专业实验讲义
1、完成一篇关于酶的特性（或活性）的综述，要求：1）不少于2000字；2）手写或电子稿都可；3）要求至少有3篇中文文献；2、已酪氨酸酶的提取及其催化活性研究和影响酶的活性的因素的实验数据为依据，撰写一篇科技论文；3、将上述的科技论文做成ppt；10.1开学后第一周内以班级形式上交，手写版或打印版交到117，电子版发到chenlei1972@应用化学专业实验讲义苯丙乳液的制备一、实验目的：1、掌握用乳液聚合法制备高分子材料的一般原理和合成方法；2、了解目标乳合物的设计原理。
二、实验原理（概述）：乳液聚合是以水为连续相（分散剂），在表面活性剂（乳化剂）存在下，使聚合反应发生在由乳化剂形成的乳胶粒内部（即表面活性剂形成的胶束作为微反应器），制备高分子材料的一种方法。
目前，因为在世界范围内采用乳液聚合法制备大量的、各种类型的乳液聚合物和聚合物乳液产品，因此乳液聚合被广泛应用于各个技术领域，成为不可缺少的材料或工作物质。
特别是人们环境保护意识的加强，乳液聚合技术已成为制备“环境友好材料”的主要方法。
在工业生产中有多种用途：（1）用乳液聚合法可大量生产合成橡胶如丁苯橡胶、丁腈橡胶、氯丁橡胶、聚丙烯酸酯橡胶等。
（2）用乳液聚合法生产合成塑料、合成树脂。
如聚氯乙烯树脂、ABS树脂、聚四氯乙烯树脂、聚丙烯酸树脂等。
（3）用乳液聚合生产各种用途的聚合物乳液，如各种粘合剂（聚醋酸乙烯脂乳液—白胶等）、涂料（如建筑涂料、金属涂料、木制器涂装涂料等）。
乳液聚合技术较本体聚合、溶液聚合、悬浮聚合相比较，有许多重要特点、优点，既可制备高分子量的聚合物，又有高的聚合反应速率。
反应体系易散热，有利于聚合反应的控制。
生产设备和工艺简单，操作方便，灵活性大，代表了环境保护技术的发展方向，很多场合下，聚合物乳液可直接利用。
因此，近年来乳液聚合技术发展很快，特别是在聚合技术上派生、发展了多种新技术、新方法。
乳液聚合体系主要有四大组分：单体、分散介层（水）、乳化剂、引发剂，其次还有用了pH调节并改善乳液流动性的电解层，pH调节用的中和剂等。
酪氨酸酶的粗提取,分离纯化、纯度鉴定及活性测定
课程：实验日期：2012年月日专业班级：组别交报告日期：2102年月日姓名：学号报告退发：（订正、重做）同组者：教师审批签字：实验名称：酪氨酸酶的粗提取、分离纯化、纯度鉴定及活性测定实验目的：1.自行查阅资料，选取原材料，设计合理的酪氨酸酶提取、分离、纯化鉴定以及活性测定的方案；2.按照实验方案，自主进行实验并对实验方案进行评价和改进；3.通过酪氨酸酶的分离过程，了解并熟悉生物工程下游分离工程的一些常规操作；4.对实验结果进行总结，分析和汇总展示，培养分析问题和自我展示的能力。
实验原理：酪氨酸酶是一种含铜的氧化还原酶，广泛存在于动植物和微生物体内。
与生物体黑色素的合成直接相关。
近年来，有学者已经从各种植物中提取得到酪氨酸酶，如马铃薯，蘑菇，香蕉，苹果，桑叶以及香樟等。
相关资料显示，L-多巴和邻苯二酚测定体系都说明香蕉，马铃薯及蘑菇中酪氨酸酶的活性较高。
因此，本实验选取香蕉为实验原材料，通过简单的提取分离以及纯化，初步得到了酪氨酸酶的样品（溶液），并用邻苯二酚为底物对其活性做了定性鉴定。
酪氨酸酶的粗提取包括研磨（匀浆），过滤，离心，盐析和透析等过程。
盐析蛋白质在高离子强度的溶液中溶解度降低、发生沉淀的现象。
随着溶液中离子强度的增大，蛋白质表面的双电层厚度降低，静电排斥作用减弱。
同时由于盐的水化作用使蛋白质表面的疏水区附近的水化层脱离蛋白质，暴露出来，增大了蛋白质表面的疏水相互作用，容易发生凝集，进而沉淀。
盐析的方法有K s盐析法和β盐析法，前者是改变体系的离子强度，而后者的则通过改变温度和pH实现。
由于蛋白质对离子强度的变化十分敏感，所以常采用K s盐析法。
常用的盐有硫酸铵等。
通过查阅资料，本实验中采用饱和度为55%的硫酸铵进行酪氨酸酶的盐析沉淀。
透析是一种膜分离的方法，利用的是浓度引起的自由扩散，在透析袋内盛放盐析后酪氨酸酶的溶解液，放入缓冲液内透析，目的是除去盐析过程带入的离子。
透析袋在使用前一般需要进行预处理。
苹果中酪氨酸酶的提取及其催化活性研究
１ 实 验 部 分
１ １ 实验仪器 与试剂 ． 仪 器 ： ｉ ７ ０ Ｂ可 见分 光 光 度计 （ 尼柯 仪 器 有 限 公 司 ）Ｃ ｒ ０ ～ ｓ ｌ ｓｅ ｔ ｐ ｏｏ ｔｒ Ｕｎｃ ２ ２ ｏ 尤 ， ａｙ ３ ０ＵＶ Ｖｉｉ ｅ ｐ ｃｒ ｈ ｔｍｅｅ ｂ ｏ
１ ５ 酶 的 活性 测 量 ．
取 ２ ５ｍＬ上 述提取液 用 ｐ ． Ｈ＝７ ２的缓 冲溶 液稀释 至 １ ． ０ｍＬ比色管中 ， 摇匀． ０ １ 取 ． ｍＬ稀 释过的提取 液于 １ ０ｍＬ比色管 中 ， 入 ２ ９ｍＬ ｐ 加 ． Ｈ一６ ０的缓 冲溶液 ， 加入 ２ｍＬ邻苯二 酚溶 液 ， ． 再 同时 开始计时 ， 用分 光光度计在 ４ １ｎ 处测定 吸光度 ． １ ｍ 开始 ６ｍｉ ｎ内每分钟读一 个数 ， 以后 隔 ２ｍｉ ｎ读一个数 ， 直至吸光度 变化
反应式 如下 ：
ＨＯ
Ｏ 酶 ，
Ｈ０
因此可 以测定邻 苯 二酚转 化为邻 苯 醌 的速 率 而测定 酶 的活性． 用 吸光度 对时 间作 图 ， （ 从所 得 的直线 斜 率求 出酶 的活性 ）一 般定 义在 优化 的条件 下 ， ５ ． ２ Ｃ时在 １ｍｉ ｎ内转化 １ ｍｏ Ｌ底 物所 需要 的量 为酶 的活 性 单位． 酶的活性计 算公 式 ： 为加入 的酶体积 ． 进 一步计算 出所用 原料 中的酶 的活性 ： 口一 Ａ ｋＶ × １ Ａ／ｔ ０
第 ４期
李好 样 等 ： 果 中酪 氨 酸 酶 的提 取 及 其 催化 活 性 式中 ： 为原料 中酶 的活性 ， 为原料 所得的酶溶 液的 总体积 ， 为原料 总质量． Ａ 。
酪氨酸酶提取及活性研究
荧光光谱法
总结词
荧光光谱法是一种利用荧光物质与酪氨酸酶相互作用产生的荧光信号变化来研究酶活性 的方法。
详细描述
荧光光谱法通过测量荧光信号的强度和波长变化，可以分析荧光物质与酪氨酸酶的结合 情况以及酶的催化过程。该方法具有高灵敏度和选择性，适用于生物体系中的酪氨酸酶
活性研究。
紫外可见光谱法
总结词
紫外可见光谱法是通过测定酪氨酸酶在紫外可见光区的吸收光谱来研究酶活性的方法。
有机溶剂萃取法
• 有机溶剂萃取法：利用有机溶剂将目标物质从水相中萃取 出来。常用乙醚、氯仿等。
离子交换法
• 离子交换法：利用离子交换剂将目标物质与溶液中的其他离子进行交换，从而实现分离。常用DEAE-纤维素 、CM-纤维素等。
$item2_c{单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了最终呈现发布的良好效果单击此处添加正文单击此处 添加正文，文字是您思想的提炼，为了最终呈现发布的良好效果单击此处添加正文单击此处添加正文，文字是 一二三四五六七八九十一二三四五六七八九十一二三四五六七八九十一二三四五六七八九十一二三四五六七八 九十单击此处添加正文单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了最终呈现发布的良好效果单击此处添加 正文单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，为了最终呈现发布的良好效果单击此处添加正文单击5*48}
药物研发
基于酪氨酸酶的催化机制，开发具有治疗作 用的新型药物或药物前体。
生物工程
利用酪氨酸酶在酶工程领域进行蛋白质改造 和优化，提高酶的催化效率和稳定性。
感谢您的观看
THAபைடு நூலகம்KS
在食品工业领域的应用
• 酪氨酸酶在食品工业中主要用于生产 食品添加剂和调味品。例如，它可以 催化产生茶多酚和咖啡色素等天然色 素，为食品提供丰富的色泽。此外， 酪氨酸酶还可用于生产香精和调味剂， 提高食品的口感和风味。
酪氨酸酶的提取及其催化活性研究
实验：酪氨酸酶的提取及其催化活性研究一、前言：生物酶的基本知识酶（enzyme）是由生物细胞合成的、对特定底物（substrate）起高效催化作用的蛋白质，是生物催化剂。
生物体内所有的化学反应几乎都是在酶的催化作用下进行的。
只要有生命活动的地方就有酶的作用，生命不能离开酶的存在。
在酶的催化下，机体内物质的新陈代谢有条不紊地进行着；同时又在许多因素的影响下，酶对代谢发挥着巧妙的调节作用。
生物体的许多疾病与酶的异常密切相关；许多药物也可通过对酶的作用来达到治疗的目的。
随着酶学研究的深入，必将对人类社会产生深远影响和作出巨大贡献。
酶与一般非生物催化剂相比，具有以下几个特点：1、酶的主要成分是蛋白质。
它具有表现活性和专一性所必需的空间结构，以提供反应中心。
由于蛋白质遇高温、强酸、强碱、重金属盐或紫外线等容易变性而失活，所以酶促反应都是在比较温和的条件下进行的，如人体中的各种酶促反应，一般都为37℃）和pH约为7的条件下进行。
2、酶促反应所需的活化能较低。
如使1mol蔗糖水解所需活化能高达1.34MJ，用H+离子作催化剂时活化能降至87.9 KJ，若用蔗糖酶催化时只需39.4 KJ。
3、酶的催化效率非常高。
酶的催化效率通常比非催化反应高108 ~1020倍，比一般非生物催化剂高107~1013倍。
如存在于血液中能催化H2CO3分子分解的碳酸酐酶，它的催化效率非常高，每一分子每分钟可以催化数万个H2CO3分子分解。
正是因为血液中有这样高效率的酶，才能及时完成排放CO2的任务，维持血液的正常生理pH值。
4、酶具有高度的专一性。
酶对所作用的底物有严格的选择性，每一种酶只能对某一类物质甚至只对某一种物质起催化作用，这是一般非生物陈化剂所无法比拟的。
影响酶作用的因素有酶的浓度、底物浓度、pH值、温度和抑制剂等。
在酶浓度恒定的情况下，增加底物的浓度，可以提高酶促反应的初速度。
当底物浓度增至某一限度后，反应初速度就不再随底物的浓度而变化，而是逐渐趋近某一极限值，这个极限值称为最大速度(V max)。
酶活性及酪氨酸酶
酶催化活性及其影响因素的研究学院:化学与分子工程学院班级:应用化学108班姓名:王文移05 宁家彬06****:***酶催化活性及影响其活性因素的研究作者：王文移 宁家彬[摘要]：酶广泛存在与生物体中，对生命的生化反应至关重要，本实验主要探究不同浓度下催化活性的不同，以及温度，pH 值，抑制剂对于酶活性的影响。
[关键词]：酪氨酸酶，唾液淀粉酶，活性，pH ，温度，抑制剂Enzyme is widespread and in living organisms, biochemical reactions vital to life, this experiment mainly explore different catalytic activity of differentconcentrations, as well as temperature, pH value, effect of inhibitor for the enzyme activity.[引言]认识生物体中酶的存在和催化作用，了解生物体系中在酶存在下的合成或分解与普通的有机合成的不同和相同之处，认识一些生物化学过程的特殊性，是当今对酶的研究不可或缺的话题。
通过本次实验能够掌握生物活性物质的提取和保存方法，学会使用仪器分析手段研究催化反应特别是生物化学体系中催化过程的基本思想和方法。
酪氨酸酶是一种氧化还原酶,它广泛存在于动植物和微生物中。
土豆的提取液中含有酪氨酸酶。
人唾液中的淀粉酶为a-淀粉酶，在唾液腺细胞内合成。
酶的活性会受到很多因素的影响，如温度、PH 值、底物浓度以及激活剂抑制剂的影响。
本实验目的在于测定各个因素对于酶活性的影响。
1.实验原理本实验采用唾液淀粉酶及酪氨酸酶来进行反应，主要观察淀粉与试剂的反应颜色，多巴的吸光度。
本实验从土豆中提取酪氨酸酶，并测定其催化活性。
当土豆、苹果、香焦等的受损面接触空气后会产生深棕色的现象是人们都见过的，这是这类物质含有酪氨酸和酪氨酸酶，酶存在于物质内部，当暴露在空气中后，在氧气的参与下，会发生一系列反应。
【word】马铃薯中酪氨酸酶的提取及其活性的研究
马铃薯中酪氨酸酶的提取及其活性的研究第25卷,第6期2008年11月光谱实验室ChineseJournalofSpectroscopyLaboratoryV o1.25,No.6November,2008马铃薯中酪氨酸酶的提取及其活性的研究李好样吕海燕董金龙①(太原师范学院化学系太原市黄陵路19号030031)摘要采用缓冲溶液法提取马铃薯中的酪氨酸酶,以邻苯二酚溶液为底物,测定了不同体积的酶的活性,研究了在不同pH值,温度和无机盐的条件下对酶活性的影响.确定了酶活性的最适温度为40C和最适pH值为6.78.关键词酪氨酸酶,活性,提取.中图分类号:0561.3;0657.32文献标识码:A文章编号:1004—8138(2008)06—1040—041前言2实验部分旱①联系人.电话:(0351)2275129;E—mail:***********************.cn作者简介:李好样(1965一),女,山西省运城市人,副教授.从事有机化学教育和科研工作.收稿日期:2008—04—01;接受日期:2008—0618第6期李好样等:马铃薯中酪氨酸酶的提取及其活性的研究一般定义在优化的条件下(pH,离子强度等),25℃时在lmin内转化lt~mol底物所需要的量为酶的活性单位.通过下式可计算出所用的酶的活性:a=AA/ktV×10式中:——所用溶液的酶的活性,△——最大吸收处吸光度的变化,f——时间,是——邻苯二酚的摩尔吸收系数,——加入的酶体积.进而计算处所用原料中的酶的活性:A—aV0/m式中:——原料中酶的活性,.——原料所得的酶溶液的总体积,——原料总质量.2.3酶的提取L7在研钵中放入10g切碎了的土豆,加入7.5mIpH=7.2的磷酸缓冲溶液,用力挤压.用两层纱布滤出提取液,立即离心分离(约3000rmp,5min),倾出上层清液保存于冰浴或冰箱中.提取液为棕色,在放置过程中不断变黑[8].2.4邻苯醌溶液的吸收光谱取0.5mI土豆提取液,加入4mIpH=6.0的缓冲溶液,再加入0.5mI邻苯二酚溶液,摇匀,反应约10min后,使用lcm比色池于扫描分光光度计上,进行重复扫描,可获得邻苯醌溶液的吸光度达到最大值0.624时,最大吸收波长为41lnm.2.5酶活性的测定取2.5mL上述提取液用pH=7.2的磷酸缓冲溶液稀释至10mI比色管中,摇匀.取0.1mI稀释过的提取液于10mI比色管中,加入2.9mIpH=6.0的缓冲溶液,再加入2m[邻苯二酚溶液,同时开始计时,用分光光度计在41lnm处测定吸光度.开始6min内每分钟读1个数,以后隔2rain读1个数,直至吸光度变化不大为止.取0.2mI,0.3mI,0.4mI已稀释过的提取液重复上述实验.[注意总体积为5mI,每次换溶液洗比色皿只能倒很少量溶液洗1次.]以吸光度对时间作图,从直线斜率求出酶的活性[9].2.6不同pH值对酶活性的影响取2.5mI上述提取液用pH=7.2的磷酸缓冲溶液稀释至10mL比色管中,摇匀.取0.2mI稀释过的提取液于10ml比色管中,分别加入2.8mIpH=6.0,6.32,6.78,7.2,7.5的缓冲溶液,再加人2mI邻苯二酚溶液,同时开始计时,用分光光度计在41lnm处测定吸光度.开始6min内每分钟读1个数,以后隔2min读1个数,直至吸光度变化不大为止.2.7温度对酶活性的影响取2.5mI上述提取液用pH=7.2的磷酸缓冲溶液稀释至10mI比色管中,摇匀.取0.4mL稀释过的提取液于10mI比色管中,加入2.6mIpH=6.0的缓冲溶液,分别在10lC,20C,30’C,40~C,50C,60”C,70’C的水浴中及沸水浴预热10min左右,再加入2mI 邻苯二酚溶液,同时开始计时,用分光光度计在411nm处测定吸光度.开始6min内每分钟读1个数,以后隔2rain读1个数,直至吸光度变化不大为止.2.8无机盐对酶活性的影响取0.4m1稀释过的提取液于10mI比色管中,加入2.6mIpH=6.0的缓冲溶液,加少量固体配成Na:S.O.溶液观察现象.光谱实验室第25卷3结果与讨论3.1酶活性的测定以吸光度对时间作图,由直线部分得出邻苯二酚的转化速率,即为酶的活性.依次得出不同体积提取液的活性,如表1所示.表1酶的活性计算由表1可以看出随着加入提取液体积的增大(即酶的浓度增大),酶的活性增大,但计算出原料中的酶的活性却减少了.3.2不同pH值对酶活性的影响酶是一种生物活性物质,调节pH值能有效地改变酶的活性.以吸光度对时间作图,由直线的斜率得出邻苯二酚的转化速率即为酶的活性,结果如图1所示:以酶的活性为纵坐标,pH为横坐标作图,如图1所示可看出不同pH 值对酶活性的影响情况.O.140字0.tOOa0.060忙避0.0206.OO7.OO8.OOpH图1pH值对酶活性的影响//\\,建l\,避O.000L————————r—————,1温度t/’C图2温度对酶活性的影响由图1可看出,酪氨酸酶的活性达最佳的pH值为 6.78.pH值为6.32—7.2时酪氨酸酶的活性较高,pH值小于6.0时活性很低,而pH值大于6.78后活性又缓慢降低.3.3温度对酶活性的影响不适宜的温度会破坏活性部位三维结构的完整性,而它又是保持酶活力的关键,因此温度是影响酶活性的一个重要因素.分别在不同温度测定酶的活性,结果如图2所示:以酶的活性为纵坐标,温度为横坐标作图,如图2所示,可看出不同温度对酶活性的影响情况.由图2可看出,酪氨酸酶的最适温度为40’C.随着温度的升高,酪氨酸酶的活性不断提高,达到最大值后,酶的活性又逐渐降低.当温度达到70’C,可近似地认为酶已没有活性,即酶失活.因此,调节温度特别是低温条件能有效地抑制酶的活性.3.4无机盐对酶活性的影响一些无机盐会抑制酶的活性,在提取液中加入NaSO.,测酶的活性结果如表2所示.第6期李好样等:马铃薯中酪氨酸酶的提取及其活性的研究1043 由表2可知:在加入无机盐Na.sO.后酶的活性失去,且不可恢复是永久性失活.参考文献[13胡源,刘克武,喻东.刘鑫,黄新河,唐成康,姜骅,季雯娟.马铃薯酪氨酸酶的性质口].化学研究与应用,2005,17(1):5s一57.[2]柳荣,刘祥云,张云贵,李天俊.酪氨酸酶的基础研究及其在生化教学中的应用[J].天津农学院,1994.1(1—2):56—6O.[3]S~nehezF.RodriguezL6pezjN,GarciaCAnovasF.Tyrosinase:ACompr ehensiveReviewofitSmeeha2nism[J’].Biochim.BiophysActa.1995.1247:l—l1.[4]薛超彬,陈清西,王勤.菜青虫不同虫态及虫龄的多酚氧化酶性质比较口].昆虫,2004,47(3):305—3o9.[5]潘兴华.黑素细胞及黑素的生成与调节[J].生理科学进展,1998.29(2)t179一l81.[63孟雅.李刚.崔焱,张龙.马铃薯多酚氧化酶的提取纯化条件对其活性影响的研究EJ].化学与生物工程,2006,23(10):77—78.[73李立祥.吴红梅.提取方法对茶多酚氧化酶活性的影响[J].中国茶叶加工.2001,(4):26—31.[8]李敏.文U磊.郭玉蓉.陈德蓉,李永才.马铃薯多酚氧化酶的特性研究[J].甘肃农业大学.2005,40(2):2l～24.[9]宋康康,邱凌,黄璜.熊果甙作为化妆品添加剂对酪氨酸酶抑制作用[J].厦门大学:自然科学版.2003,42(6):9l一94. TheStudyofExtractionandtheActivityofTyrosinasefromPotato LIHao—Y angLUHai-YanDONGJin—Iong (DepartmentofChendstry?Taiy11a~1NormalUniversity,Taiyuan030031, P.R.China) AbstractThepotatotyrosinasewasextractedbybuffersolution,andtheenzy meactivitytocatecholassubstratewasstudied.TheeffectsofpHtemperatureandtheinorga nicsaltontheimpactoftheactivitywerestudied.Theoptimumtemperatureof4OCandpHof6.78w ereobtained.KeywordsTyrosinase,Activity,Extract.这真是令人啼笑皆非——重大发明创造被视为”旧货”!欢迎作者将被退稿佳作,再投本刊在2O世纪的科技成就中,激光可算是重大发明创造之一.第一台激光器是1960年由美国物理学家梅曼(见《邮票上的科学家——佼佼者之路》中之M4)研制出来的.然而《物理评论快报》却拒绝刊登梅曼的论文.理由是:这是微波激射物理学方面的文章,对快速出版物不再有价值.这真是令人啼笑皆非j接着.梅曼将论文寄到了英国《自然》杂志,这篇300字的简短文章立即被接受.发表后引起全世界轰动.后来,梅曼被列入了美国发明家名人堂.为了吸取历史教训.本刊收到的论文,即使其观点与审稿人有尖锐的意见冲突.只要是言之有理,也给予发表.因为”仁者见之谓之仁,智者见之谓之智”(《周易?系辞上》),不同人从不同角度看问题,难免不同.我们欢迎作者将被退稿佳作,再投本刊.《光谱实验室》编辑部。
酪氨酸酶的提取及其酶促反应动力学研究
仪器与试剂
仪器：分光光度计 植物组织捣碎机 离心 机 恒温水浴 试剂：pH6.8磷酸盐缓冲溶液 多巴溶液 （200mg/L） 铜试剂（10-3mol/L） 土豆
实验步骤
1.络氨酸酶的提取：取75g的去皮土豆，切碎，置于植物组 织捣碎机中，加入冷却的磷酸盐缓冲溶液150ml，在高速转 速下捣碎2分钟，然后倒入干净烧杯中静置2分钟，去上层清 液于离心式管中在3000r/min转速下离心分离5分钟。 2.Km和vmax的测定：在6支比色管中按表1加入缓冲溶液、多 巴溶液，摇匀、30℃恒温10min，再在00、0、1号比色管各 加入络氨酸酶提取液各0.20mL，摇匀后立即倒入比色皿中， 以00号为参比溶液，测量其吸光度，前5min每隔30s测量一 次溶液的吸光度，后5min每隔60s测量一次溶液的吸光度， 并记录溶液的吸光度和对应反应时间。以同样方法测量2-5 号溶液的吸光度并记录数据。
影响酶促反应速度的因素： 酶的浓度[E] 底物的浓度[S] 溶液的pH值 温度 酶的抑制剂 酶的激活剂
二、实验原理
酶催化剂的特点
1.具有表观活性和专一性所需要的结构空间，反应能在比较 温和的条件下进行； 2.酶促反应的活化能较低； 3.酶的催化效能极高； 4.酶具有高度的专一性。
影响酶作用的因素：酶的浓度、底物浓度、 溶液的pH值、和酶抑制剂等。
米氏方程 [S]、[E]分别为底物浓度和酶的浓度，km为米 氏常数，其物理意义是当酶促反应速度到达 最大速度一半时的底物浓度，单位mol/L
对米氏方程进行双倒数得到：坐标作图，由图得 到截距和斜率，即可计算vmax和Km。
实验注意事项
酪氨酸酶的提取及其酶促反应动力学研究
一、底物浓度对酶促反应的影响
随反应物浓度S的增大，酶促反应速度V 增大。当底物的浓度较低时，V随〔S〕 增大而急剧增大，二者成正比关系；随 着〔S〕的继续增大，V继续增大，而增 幅逐渐减小，若再继续增大〔S〕，则V 将不再变化， 达到一个极 限值Vmax。
酪氨酸酶对多巴的催化氧化原理
影响酶促反应速度的因素： 酶的浓度[E] 底物的浓度[S] 溶液的pH值 温度 酶的抑制剂 酶的激活剂
二、实验原理
酶催化剂的特点
1.具有表观活性和专一性所需要的结构空间，反应能在比较 温和的条件下进行； 2.酶促反应的活化能较低； 3.酶的催化能极高； 4.酶具有高度的专一性。
3.抑制剂的影响：按表2的所列的数据进行溶 液的配制，以0号溶液为参比溶液，按步骤2 的方法测量各个溶液的吸光度随时间的变化。
数据记录表1
项目 00
缓冲溶 液 多巴溶 液 酶提取 物
0 3.8 1.0 0.2
1 3.8 1.0 0.2
2 3.3 1.5 0.2
3 2.8 2.0 0.2
4 2.3 2.5 0.2
1 2
3
4
5
时间 1吸光度 浓度
2 3 4 5
1.根据朗伯-比尔定律，将测得的吸光度计算 转化为浓度，以浓度为纵坐标，时间为横坐 标作图，求得直线的斜率即为反应的速度v； 2.根据双倒数米氏方程，以1/v为纵坐标， 1/[S]为横坐标作图，求得直线的截距和斜率 即可计算反应的最大速度vmax和米氏常数Km； 3.抑制剂的影响：求出未加入和加入抑制剂 的反应速度，以反应速度为纵坐标，抑制剂 浓度为横坐标作图，判断抑制剂对反应的影 响。
土豆中酪氨酸酶的提取及其催化活性的研究 (终稿)
本科毕业论文（设计）题目：土豆中酪氨酸酶的提取及其催化活性的研究学生：蒋泽琦学号： 201040320111学院：生命科学学院专业：生物科学入学时间： 2010 年 09 月 15 日指导教师：张秋研职称：助理实验师完成日期： 2014 年 05 月 04 日诚信承诺我谨在此承诺：本人所写的毕业论文《土豆中酪氨酸酶的提取及其催化活性的研究》均系本人独立完成，没有抄袭行为，凡涉及其他作者的观点和材料，均作了注释，若有不实，后果由本人承担。
承诺人（签名）：年月日土豆中酪氨酸酶的提取及其催化活性的研究不同因素对酪氨酸酶活性的影响学位申请人：蒋泽琦导师：张秋研摘要酪氨酸酶从目前的研究看来是一种由Cu+ 或Cu2+作为辅助因子构成的全酶，空气中的氧对多巴的氧化反应就是由其催化的[1]。
而我们可以通过多巴转换反应过程中的颜色变化检测其中的催化过程，所以酶的活性我们可以通过对于吸光度随时间的变化的测定来求得。
本论文则是首先从土豆中提取出酪氨酸酶，而后采用分光光度计法对其的活性进行测定，大约于480nm处使用紫外分光光度计测定土豆提取液的吸光度，将吸光度对于时间的变化率（△A/△V）作为反应的速率，并以此建立对于多巴溶液的转换动力学曲线，得出酪氨酸的活性[2]。
关键词酪氨酸酶；提取；活性；活性动力学曲线Extraction and catalytic activity of Tyrosinase potatoes Abstract：From tyrosinase appears to be a current study of Cu + or Cu2 + as a cofactor holoenzyme composed of the oxygen in the air is oxidation of dopa by catalysis. We can convert the catalytic process and reaction process wherein the color change is detected by dopa, the enzyme activity that we can change with time for the measurement of absorbance to obtain. This paper is the first extract from potato tyrosinase, followed by the spectrophotometer its activity was measured at approximately at 480nm using a UV spectrophotometer absorbance potato extract, the absorbance changes with respect to time rate (△ A / △ V) as the reaction rate, and thus create a solution for the conversion of dopa kinetic curve derived tyrosinase activity.Key words：Tyrosinase; extraction; activity; activity kinetics目录1引言 (1)2 材料与方法 (3)2.1 材料 (3)2.2 方法 (3)2.2.1 酪氨酸酶的提取 (3)2.2.2 酪氨酸最大吸收波长确定 (3)2.2.3 酪氨酸酶的活性测定 (3)2.2.4 酶活性因素测量 (3)3 结果与分析 (4)3.1 酪氨酸最大吸收波长确定 (4)3.2 建立酶的动力学曲线 (4)3.3 计算酶的活性 (6)3.4 影响酶的活性的因素研究 (7)3.4.1 pH值对酶活性的影响 (7)3.4.2 温度对酶活性的影响 (7)3.4.3 抑制剂EDTA对酶活性的影响 (8)4结论 (9)5参考文献 (10)1 引言酪氨酸酶（Tyrosinase），简称TYR，是一种75kD含铜的多酚氧化酶，酪氨酸酶非常普遍的存在于微生物、动植物及人体中[3]。
中国地质大学应用化学综合实验报告
应用化学综合实验报告——明矾的制备及其单晶培养——酪氨酸酶的提取及催化活性的研究031102班XXX XX实验一 明矾的制备及其单晶培养一、明矾的基本性质与用途明矾，学名为十二水合硫酸铝钾，又称明矾、白矾、钾矾、钾铝矾、钾明矾，是含有结晶水的硫酸钾和硫酸铝的复盐。
其分子式是KAl(SO 4)2·12H 2O ，加合式是K 2SO 4·Al 2(SO 4)3·24H 2O ，相对分子质量为474.39，无色立方，单斜或六方晶体，有玻璃光泽，密度为1.757g/cm 3，熔点92.5℃。
在64.5℃时失去9个分子结晶水，200℃时失去12个分子结晶水，溶于水，不溶于乙醇。
明矾性味酸涩，寒，有毒。
故有抗菌作用、收敛作用等，可用做中药。
明矾还可用于制备铝盐、发酵粉、油漆、鞣料、澄清剂、媒染剂、造纸、防水剂等。
明矾净水是过去民间经常采用的方法，它的原理是明矾在水中可以电离出两种金属离子：KAl(SO 4)2= K + + Al 3+ + 2SO 4 2-，而Al 3+很容易水解，生成胶状的氢氧化铝Al(OH)3：Al 3+ + 3H 2O = Al(OH)3（胶体）+ 3H +，氢氧化铝胶体的吸附能力很强，可以吸附水里悬浮的杂质，并形成沉淀，使水澄清。
所以，明矾是一种较好的净水剂。
二、实验目的（1）学会利用身边易得的废铝材料制备明矾的方法；（2）巩固溶解度概念及其应用；认识铝和氢氧化铝的两性性质；（3）练习和掌握溶解、过滤、结晶以及沉淀的转移和洗涤等无机制备中常用的基本操作和测量产品熔点的方法。
（4）学习从溶液中培养晶体的原理和方法。
三、实验原理1、明矾的制备将废铝样品溶解于稀氢氧化钾溶液中，值得偏铝酸钾：↑+=++222H 32KAlO O H 2KOH 2Al 2在偏铝酸钾溶液中加入过量的浓硫酸，使其生成溶解度较小的复盐明矾（KAl(SO 4)2·12H 2O ）反应式为：在不同温度下明矾、硫酸铝、硫酸钾的溶解度（单位：g/100gH 2O ）如下表所示：表1.1 明矾、硫酸钾、硫酸铝在不同温度下的溶解度温度（K ） 273 283 293 303 313 333 353 363明矾 3.00 3.95 5.90 8.39 11.7 24.8 71.0 109 硫酸铝 31.2 33.5 36.4 40.4 45.8 59.2 73.0 80.8 硫酸钾7.49.311.1 13.0 14.8 18.2 21.4 22.92、单晶的培养要使晶体从溶液中析出，从原理上有两种方法。
酪氨酸酶的提取及其催化活性研究(课件)
1. 2材料： 供试原料为市售马铃薯。仪器: V IS 7220 型可见分光光度计(北京瑞利分析 仪器公司); 电热恒温水浴锅( 天津市中环试 验电炉有限公司); 离心机; 秒表。药品: 0. 01 mol/L 二羟基苯丙胺酸( 多巴) 溶液, 0. 10 mol/L N a2HPO4 缓冲溶液( pH 值7. 2和pH 值6. 0) , 盐酸。
2 结果与分析
2. 1酶的动力学曲线的建立 以表1中的吸光度为纵坐标, 时间为横坐标, 可得出在加入酶的作用下, 多巴溶液的转换 动力学曲线, 再由曲线的直线部分得出直线 斜率(即转换速率), 由斜率可求出酶的活性。
2.2 酶的活性计算
根据公式 (其中k是斜率, 由图1可知), 将不同的k、 V值代入公式, 可求得提取液中酪氨酸酶的 活性, 由公式A = a V0 /m(其中V0 = 6. 0 ml、m = 10. 0 g, 即马铃薯原料的总体积 和质量)可得原料马铃薯中酪氨酸酶的活性。
1. 3 方法
1. 3. 1 酪氨酸酶的提取：在研钵中放入10. 0 g切碎的马铃薯, 加入7. 5m l pH值7. 2的缓冲溶液, 研磨挤压。滤出提取液, 离心分离。倾出上层清液保存于冰浴或冰箱中。 1. 3. 2 酶的活性测定：取6. 0 m l上述提取液, 用pH 值 7. 2的缓冲溶液于10. 0 m l比色管中稀释至刻度, 摇匀。取 0. 1 m l稀释过的提取液于10. 0 m l比色管中, 加入2. 9 m l pH 值6. 0的缓冲溶液, 再加入2. 0 m l多巴溶液, 用分光光 度计在480 nm处测定吸光度。开始6m in内每分钟读1个 数, 以后隔2m in读1个数, 直至吸光度变化不大为止, 得吸 光度为A1。取0. 2, 0. 3, 0. 4 m l已稀释过的提取液重复上 述试验, 得吸光度分别为A2、A3、A4。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
酪氨酸特性及其影响因素摘要：酶是由生物细胞合成的、对特定底物起高效催化作用的蛋白质，是生物催化剂。
生物体内所有的化学反应几乎都是在酶的催化作用下进行的。
只要有生命活动的地方就有酶的作用，生命不能离开酶的存在。
在酶的催化下，机体内物质的新陈代谢有条不紊地进行着；同时又在许多因素的影响下，酶对代谢发挥着巧妙的调节作用。
生物体的许多疾病与酶的异常密切相关；许多药物也可通过对酶的作用来达到治疗的目的。
随着酶学研究的深入，必将对人类社会产生深远影响和做出巨大贡献。
Summary: The enzyme is high efficiency catalyst on a specific substrate protein synthesis by biological cells is the biological catalyst. Chemical reactions in all organisms is almost in the under the catalysis of enzyme. As long as there is life there is the function of enzyme the enzyme in the presence of life can not leave. In the enzyme catalytic machine body material the new supersedes the old. With everything in good order and well arranged; and at the same time, the influence of many factors under the regulation of enzyme plays cleverly on metabolism. Many diseases and enzyme of organisms are closely related; many drugs can also be based on the role of the enzyme to achieve the purpose of treatment. With the in-depth study of bound enzyme have a far-reaching impact on human society and make great contributions to. 关键词：酶催化活性影响因素正文引言：酶是具有催化作用的蛋白质。
其活性仅决定于它的蛋白质结构。
酶与一般非生物催化剂相比，具有以下几个特点：1、酶的主要成分是蛋白质。
它具有表现活性和专一性所必需的空间结构，以提供反应中心。
由于蛋白质遇高温、强酸、强碱、重金属盐或紫外线等容易变性而失活，所以酶促反应都是在比较温和的条件下进行的。
2、酶促反应所需的活化能较低。
如使1mol 蔗糖水解所需活化能高达1.34MJ，用H+离子作催化剂时活化能降至87.9 KJ，若用蔗糖酶催化时只需39.4 KJ。
3、酶的催化效率非常高。
酶的催化效率通常比非催化反应高108 ~1020倍，比一般非生物催化剂高107~1013倍。
4、酶具有高度的专一性。
酶对所作用的底物有严格的选择性，每一种酶只能对某一类物质甚至只对某一种物质起催化作用，这是一般非生物陈化剂所无法比拟的。
影响酶作用的因素有酶的浓度、底物浓度、pH值、温度和抑制剂等。
在酶浓度恒定的情况下，增加底物的浓度，可以提高酶促反应的初速度。
当底物浓度增至某一限度后，反应初速度就不再随底物的浓度而变化，而是逐渐趋近某一极限值，这个极限值称为最大速度(V max)。
酪氨酸的提取及其催化活性研究一、前言：生物酶的基本知识酶（enzyme ）是由生物细胞合成的、对特定底物（substrate ）起高效催化作用的蛋白质， 是生物催化剂。
生物体内所有的化学反应几乎都是在酶的催化作用下进行的。
只要有生命活 动的地方就有酶的作用，生命不能离开酶的存在。
在酶的催化下，机体内物质的新陈代谢有 条不紊地进行着；同时又在许多因素的影响下，酶对代谢发挥着巧妙的调节作用。
生物体的 许多疾病与酶的异常密切相关；许多药物也可通过对酶的作用来达到治疗的目的。
随着酶学 研究的深入，必将对人类社会产生深远影响和作出巨大贡献。
酶与一般非生物催化剂相比，具有以下几个特点：1、酶的主要成分是蛋白质。
它具有表现活性和专一性所必需的空间结构，以提供反应中心。
由于蛋白质遇高温、强酸、强碱、重金属盐或紫外线等容易变性而失活，所以酶促反应都是在比较温和的条件下进行的，如人体中的各种酶促反应，一般都为37℃）和pH 约为7的条件下进行。
2、酶促反应所需的活化能较低。
如使1mol 蔗糖水解所需活化能高达1.34MJ ，用H +离子作催化剂时活化能降至87.9 KJ ，若用蔗糖酶催化时只需39.4 KJ 。
3、酶的催化效率非常高。
酶的催化效率通常比非催化反应高 108 ~1020倍，比一般非生物催化剂高107~1013倍。
如存在于血液中能催化H 2CO 3分子分解的碳酸酐酶，它的催化效率非常高，每一分子每分钟可以催化数万个H 2CO 3分子分解。
正是因为血液中有这样高效率的酶，才能及时完成排放CO 2 的任务，维持血液的正常生理pH 值。
4、酶具有高度的专一性。
酶对所作用的底物有严格的选择性，每一种酶只能对某一类物质甚至只对某一种物质起催化作用，这是一般非生物陈化剂所无法比拟的。
影响酶作用的因素有酶的浓度、底物浓度、pH 值、温度和抑制剂等。
在酶浓度恒定的情况下，增加底物的浓度，可以提高酶促反应的初速度。
当底物浓度增至某一限度后，反应初速度就不再随底物的浓度而变化，而是逐渐趋近某一极限值，这个极限值称为最大速度(V max )。
酶的以上特性已引起化学工作者的极大兴趣，例如酶正被作为分析试剂、探针得到应用；生物酶的化学模拟已广泛开展，将为研制高性能的工业催化剂奠定基础。
酶的电化学研究的开展还开辟了生物电化学的新领域。
酶化学是一门交叉学科，对其研究具有广阔的前景。
酶促反应动力学是酶化学的主要内容之一，这方面的研究具有重要的理论和实践意义。
二、实验目的1、认识生物体中酶的存在和催化作用，了解生物体系中酶促反应的特点与有机合成的不同和相同之处，认识一些生物化学过程的特殊性。
2、掌握生物活性物质的提取和保存方法，学会使用仪器分析的手段研究催化反应，特别是生物化学体系中催化过程的基本思路和方法。
三、实验原理酪氨酸是一种以Cu +或Cu 2+为辅助因子的全酶，能催化空气中的氧对多巴的氧化反应。
催化过程可以通过多巴转换反应过程的颜色变化来监测，通过测定吸光度随时间的变化来求的酶的活性。
酪氨酸酶可用比色法测定。
由于多巴转变成多巴红速率很快，在转到下一步产率慢得多，故可在酶存在下，测定多巴转变为多巴红的速率而测定酶的活性。
（可用吸光度对时间作图，从所得的直线斜率求酶的活性）。
酶参与的多巴转换反应如下：酪氨酸——多巴——多巴醌——无色——多巴红——二羟基吲哚——吲哚醌——黑色素酶的活性计算： 一般pH 、离子强度），25℃时在 1min 内转化1 mol 底物所需要的量为酶的活性单位。
通过下式可计算出所用的酶的活性：610kt a ⨯∆=VA，式中：a 为所用溶液的酶的活性，A ∆ 为最大吸收处吸光度的变化，t 为时间，k 为酪氨酸的摩尔吸收系数，V 为加入的酶体积。
进而计算出所用原料中的酶的活性： ma a 0V ='，式中：a '为原料中酶的活性，0V 为原料所得的酶溶液的总体积，m 为原料总质量。
本实验拟通过从土豆等物中提取酪氨酸酶并测定其活性，使我们对酶有个基本认识。
当土豆、苹果、香蕉或蘑菇受损伤时，在空气作用下，很快变为棕色，这是因为它们的组织中都含有酪氨酸和酪氨酸酶，酶存在于物质内部，当内部物质暴露于空气中，在氧的参与下将发生反应，生成黑色素。
四、仪器和试剂1、仪器：分光光度计、离心机、电子天平、研钵、水浴、容量瓶、秒表。
2、试剂：酪氨酸、磷酸二氢钾、氢氧化钠、盐酸、新鲜土豆。
五、实验步骤及数据记录1、溶液配制1.1 酪氨酸溶液的配制酪氨酸在中性水溶液中溶解度较小，因而配制过程中需加入一定量盐酸溶解。
首先称取一定量的酪氨酸配制0.1mol/L 酪氨酸储备液，在实验过程中稀释至0.02mol/L ，使用时需要加入一定量的NaOH 调节其pH 接近中性。
1.2 缓冲溶液的配置首先分别配置0.2mol/L KH 2PO 4溶液0.2mol/L NaOH 溶液，然后以一定的体积比配置pH=6.0和pH=7.2的KH 2PO 4-NaOH 缓冲溶液。
体积比如下表：表1.1 KH PO -NaOH 缓冲溶液的体积比2、酶的提取取新鲜土豆，清洁后切碎，称取10.05g置于研钵中，加入7.5mL pH=7.2的磷酸缓冲溶液，用力挤压和研碎，用两层纱布滤出提取液，立即高心分离5min，倾出上层清液保存于冰箱中，提取液为棕色，在放置过程中不断变黑。
3、酪氨酸最大吸收波长确定取2.5mL酶提取液用pH=7.2的缓冲溶液稀释至10mL比色管中，摇匀。
取0.4mL已稀释过的土豆提取液，加2.6mLpH=6.0的缓冲溶液，加入2.0mL酪氨酸溶液，摇匀。
反应约数分钟后，于分光光度计上扫描绘制酪氨酸的吸收光谱图。
表1.2 最大吸收波长的确定吸收光谱的绘制如下：图1.1 酪氨酸吸收光谱的绘制由图1.1可知酪氨酸的最大吸收波长为450nm。
4、酶活性测量分别取0.3、0.4、0.5mL稀释过的提取液于10mL比色管中，加入5.0mLpH=6.0的缓冲溶液，再加入4.0mL酪氨酸溶液，同时开始计时，用分光光度计在450nm处测定吸光度。
开始6min内每分钟读一个数，以后隔2min读一个数，直至吸光度变化不大为止。
以吸光度对时间作图，从直线斜率求出酶的活性。
表1.3 不同酶含量的活性测试5、酶活性因素测量（1）取1.5mL稀释过的提取液于10mL比色管中，加入4.5mLpH=6.0的缓冲溶液，再加入4mL酪氨酸溶液，分别加入一定量NaOH溶液和HCl溶液，然后用pH=7.2的缓冲溶液定容，此时测得的溶液的pH分别为2、10，测定溶液的吸光度随时间变化值。
（2）取1.5mL稀释过的提取液于10mL比色管中，加入4.5mLpH=6.0的缓冲溶液，再加入4mL酪氨酸溶液，然后用pH=7.2的缓冲溶液定容，摇匀分别在热水浴30℃、50℃中加热5min，测定溶液的吸光度随时间变化值。
（3）取1.5mL稀释过的提取液于10mL比色管中，加入4.5mLpH=6.0的缓冲溶液，再加入4mL酪氨酸溶液，分别加入浓度为0.01827mol/L的EDTA1ml、2ml，然后用pH=7.2的缓冲溶液定容，测定溶液的吸光度随时间变化值。