淀粉酶产生菌的分离

实验原理：土壤中含有大量的微生物，将土壤
稀释液涂在不同类型的培养基上，在适宜的环境 中培养几天，细菌或者是其他的微生物便能在平 板上生长繁殖，形成菌落。将初次筛选得到的微 生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生 淀粉酶的细菌才能够利用培养基中的淀粉成分来 完成自身的生命活动，才能够生存。故在淀粉培 养基上长出的菌便是淀粉产生菌。在培养基上滴 碘液，淀粉被分解掉的部分不显现蓝色，出现透 明圈，可以通过透明圈的大小来初步判断菌 种产淀粉的能力。
管号
淀粉稀释液/ml 缓冲液/ml
1
2(0%)
2
2(0.2%)
3
1
4
1
5
2(1.5%)
6
2(2.0%)
7
2(2.0%)
2(0.5%) 2(1.0%)
1
1
1
1
1
40摄氏度水浴保温5min 蒸馏水/ml 1 1 1 1 1 1 0 粗酶液/ml 0 0 0 0 0 0 1 40摄氏度水浴保温30min，然后放入沸水浴5min
淀粉酶产生菌的分离
第四小组
淀粉酶：是指一类能催化分解淀粉分子中糖
苷键的酶的总称，主要包括α－淀粉酶和β-淀 粉酶等，α-淀粉酶可从淀粉分子内部切断淀粉 的α-1,4糖苷键，形成麦芽糖、含有6个葡萄糖 单位的寡糖和带有支链的寡糖，是淀粉的粘 度下降，因此又称为液化型淀粉酶。淀粉遇 碘呈蓝色。这种淀粉-碘复合物在660nm处有 较大的吸收峰，可用分光光度计测定。随着 酶的不断分作用，淀粉长链被切断，生成小 分子的糊精，使其对碘的蓝色反应逐渐消失， 因此可以根据一定时间内蓝色消失的程度为 指标来测定α-淀粉酶的活力。
稀碘液/ml
1
1ຫໍສະໝຸດ Baidu
1
1
1
1
1
（4）酶活力测定取稀释的粗酶液也按照 下表中七号管的要求配置混合液，测得吸 光度后，在标准曲线上查出相应的淀粉浓 度，求出被酶消耗的淀粉量。 （5）酶活力测定： 酶活力以每毫升粗酶 液在40摄氏度，pH6.0的条件下每小时所 分解的淀粉毫克数来衡量。
淀粉产生菌的筛选：
实验器材料及试剂： 材料：河南科技学院花园土壤。 培养基： （1）分离培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基 （牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、溶于 1000mL蒸馏水中，再加入15g琼脂粉，pH调至 7.2，121℃灭菌15min，待冷却至50℃左右时， 于超净工作台倒平板） （2）筛选培养基：淀粉培养基（可溶性淀 粉 20g, 硝酸钾 1g, 磷酸氢二钾 0.5g, 氯化 钠 0.5g, 硫酸镁 0.5g, 硫酸亚铁 0.01g, 琼 脂 20g, 水 1000毫升，调整pH值到7.2～ 7.4。） （3）摇瓶培养：淀粉培养液。
酶活力测定： （1）选产生透明圈最大的菌株进行摇瓶培养， 将菌溶于5ml无菌生理盐水中，吸取此培养液加 入淀粉培养液中，30摄氏度摇瓶培养72h。 （2）酶液稀释： 取发酵液进行4000r/min离心 5min，取上清液，用缓冲液适当稀释。 （3）标准曲线制作： 准备七支试管，按照下表 配置混合液。使用分光光度计策规定各管溶液在 660nm下的OD值。然后以淀粉浓度为横坐标， 吸光度为纵坐标，做标准曲线。
试剂：碘液、2%可溶性淀粉、 pH6.0磷酸氢二 钠-柠檬酸缓冲液、标准糊精溶液、0.5mol/L乙 酸、0.85%生理盐水。 4、器材： 培养皿、锥形 瓶、高压灭菌锅、超净工作台、恒温水浴锅、分 光光度计。 器材： 培养皿、锥形瓶、高压灭菌锅、超净工 作台、恒温水浴锅、分光光度计。
实验步骤： 淀粉产生菌的筛选： （1）采集土样，并用无菌水稀释成菌悬液； （2）配置牛肉膏蛋白胨固体培养基及淀粉培养 基，倒平板备用； （3）将制好的菌悬液与超净工作台上涂到牛肉 膏蛋白胨平板上，于37摄氏度培养箱中培养一 天； （4）挑取整个菌落，将其移入淀粉培养基中， 继续放在37摄氏度培养箱中培养两天； （5）将碘液滴在平板上，观察透明圈的大小。