BD ELISPOT —单细胞分析技术
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Cytokine detection by ELISPOT: relevance for
immunological studies in Type 1 diabetes. Diabetes Metab Res Rev, 2002, 18:367-380.
Direct Visualization of Cytokine-Producing Recall
与过敏机制之细胞因子研究 传染疾病研究 体液免疫研究 – B细胞免疫球蛋白及特定亚型反应的进展
研究
BD ELISPOT原理
ELISPOT实验设计: 是在96微孔培养板底部披覆PVDF薄膜，用来吸附特殊挑选,
且无毒性（不含sodium azide、内毒素endotoxin）的单株 抗体。静脉血PBMC经适当分离处理后分配到微孔上，再接受 适当的抗原刺激，并将微孔板放置于温箱中过夜培养一段时 间。一般而言，记忆性T细胞在受抗原刺激数小时后会开始 分泌细胞因子，此时局部(在紧靠分泌细胞的周围)分泌出的 细胞因子会被PVDF薄膜上特异抗体捕获。微孔板中的细胞被 移除并清洗后，被捕获的细胞因子可进一步使用生物素 （Biotin）标记的一抗来标识，其后再与辣根过氧化物酶标 记的亲合素作用，并加入底物使其呈色，有反应作用的细胞 会留下约10-20mm大小染色的斑点。
BD ELISPOT 流程
BD ELISPOT 结果显示
样本孔出现颜色斑点 Usu. 10～20 mm
Blank controls: G1-9: 无刺激剂的细胞 H1-9: 无细胞的刺激剂
BD ELISPOT 结果分析
在显微镜下计数，一个斑点代表一个分泌细胞 用Elispot Reader 进行分析对斑点自动计数，并
做出不同大小斑点的分布图，快速、精确、还能 平衡背景信号。 软件自动计算出细胞的分泌频率
BD ELISPOT 应用文献
Detection of GAD65-reactive T cells in Type1
diabetes by immunogloபைடு நூலகம்ulin-free ELISPOT assays. Diabetes Care, 2002, 25:1390-97.
Antigen-Specific CD4 Memory T Cells in Healthy Individuals and HIV Patients. The Journal of Immunology, 2000, 164: 3723–3732.
BD ELISPOT —单细胞分析技术
BD ELISPOT应用
移植研究 疫苗开发 -亦可评估疫苗效力，或是疫苗注射路径影响 Th0/Th1/Th2细胞转换分析 自体免疫研究 – 免疫调节及免疫治疗研究 癌症研究 -肿瘤反应T细胞作用 过敏机制探讨 – IL-4诱导免疫球蛋白亚型转换，其它参
immunological studies in Type 1 diabetes. Diabetes Metab Res Rev, 2002, 18:367-380.
Direct Visualization of Cytokine-Producing Recall
与过敏机制之细胞因子研究 传染疾病研究 体液免疫研究 – B细胞免疫球蛋白及特定亚型反应的进展
研究
BD ELISPOT原理
ELISPOT实验设计: 是在96微孔培养板底部披覆PVDF薄膜，用来吸附特殊挑选,
且无毒性（不含sodium azide、内毒素endotoxin）的单株 抗体。静脉血PBMC经适当分离处理后分配到微孔上，再接受 适当的抗原刺激，并将微孔板放置于温箱中过夜培养一段时 间。一般而言，记忆性T细胞在受抗原刺激数小时后会开始 分泌细胞因子，此时局部(在紧靠分泌细胞的周围)分泌出的 细胞因子会被PVDF薄膜上特异抗体捕获。微孔板中的细胞被 移除并清洗后，被捕获的细胞因子可进一步使用生物素 （Biotin）标记的一抗来标识，其后再与辣根过氧化物酶标 记的亲合素作用，并加入底物使其呈色，有反应作用的细胞 会留下约10-20mm大小染色的斑点。
BD ELISPOT 流程
BD ELISPOT 结果显示
样本孔出现颜色斑点 Usu. 10～20 mm
Blank controls: G1-9: 无刺激剂的细胞 H1-9: 无细胞的刺激剂
BD ELISPOT 结果分析
在显微镜下计数，一个斑点代表一个分泌细胞 用Elispot Reader 进行分析对斑点自动计数，并
做出不同大小斑点的分布图，快速、精确、还能 平衡背景信号。 软件自动计算出细胞的分泌频率
BD ELISPOT 应用文献
Detection of GAD65-reactive T cells in Type1
diabetes by immunogloபைடு நூலகம்ulin-free ELISPOT assays. Diabetes Care, 2002, 25:1390-97.
Antigen-Specific CD4 Memory T Cells in Healthy Individuals and HIV Patients. The Journal of Immunology, 2000, 164: 3723–3732.
BD ELISPOT —单细胞分析技术
BD ELISPOT应用
移植研究 疫苗开发 -亦可评估疫苗效力，或是疫苗注射路径影响 Th0/Th1/Th2细胞转换分析 自体免疫研究 – 免疫调节及免疫治疗研究 癌症研究 -肿瘤反应T细胞作用 过敏机制探讨 – IL-4诱导免疫球蛋白亚型转换，其它参