高通量测序及个体化医学

个体化wk.baidu.com疗
传统的循证医学是结合临床医生的个人实践经验和 客观的科学研究证据，对于症状相同的病人使用 相同剂量的同种药物进行治疗，但治疗效果却千 差万别。传统治疗方案显示，肿瘤的无效率高达 75%，糖尿病无效率43%，抑郁症无效率也有 38%。人们逐渐意识到大多数疾病的发生是自身 遗传密码和外界环境共同作用的结果。 精准医疗 借助可监测的遗传信息和环境信息，针对个体提 供定制的优化治疗方案，提升现有治疗水平，并 尽量在发病前就有望有效预防。
全基因组扩增技术主要分为两种类型：
一是基于热循环以PCR为基础的扩增技术，如简并寡核苷酸 引物PCR (DOP-PCR)、连接反应介导的PCR (LM-PCR)、 扩增前引物延伸反应 (PEP)等；
二是基于等温反应不以PCR为基础的扩增技术，如多重置换 扩增 (MDA) 和基于引物酶的全基因组扩增 (pWGA)。
(DeepSequencing)
单细胞全基因组测序
2014年1月《自然—方法学》（Nature Methods）上发表年 度特别报道，将“单细胞测序”（Singled out for sequencing）的应用列为2013年度最重要的方法学进展。
单细胞全基因组测序技术是在单细胞水平对全基因组进行扩 增与测序的一项新技术。其原理是将分离的单个细胞的微量 全基因组DNA进行扩增，获得高覆盖率的完整的基因组之后 通过外显子捕获进而高通量测序用于揭示细胞群体差异和细 胞进化关系。它解决了用组织样本测序时或样本少无法解决 的细胞异质性难题。为从单核苷酸水平深入研究癌症发生、 发展机制及其诊断、治疗提供了新的研究思路并开辟了新的 研究方向。
测序
高通量测序 高通量测序技术（HighthroughputSequencing）是对传统Sanger测序 （称为一代测序技术）革命性的改变，由于该种 方法能够一次同时对几十万到几百万条核酸分子 进行序列测定，因此在有些文献中称其为下一代 或二代测序技术(NextGenerationSequencing， NGS)，足见其划时代的改变。同时，高通量测序 使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌 的分析成为可能，所以又被称为深度测序
第一步 基因检测
第二步 建立基因数据库
第三步
精准的药物靶向治疗：
非小细胞性肺癌治疗进展
中国埃克替尼治疗非小细胞肺癌专家共识（2016 年版） EGFR （表皮生长因子受体）基因突变状态是晚期 NSCLC 最重要的疗 效预测因子和选择治疗方式的分子指标。突变最常见于 18-21 外显子， 其中 19 外显子缺失突变和 21 外显子点突变是最常见的 EGFR 基因敏感 突变。最新研究发现，EGFR 基因敏感突变的晚期 NSCLC 患者接受 EGFR-TKI 治疗后的中位生存时间可达到 4 年。 多项研究结果也显示，在非选择的中国 NSCLC 患者 EGFR 基因敏感突 变率约为 30%，而肺腺癌患者的敏感突变率可以达到 50%，不吸烟的腺 癌患者甚至可高达 60%-70%，肺鳞癌患者也仍有 10% 左右的 EGFR 突 变率，因此建议临床上对已经明确 NSCLC 的病理诊断、并且不能进行 手术的晚期患者，在治疗开始前要常规进行 EGFR 基因突变检测。
MDA（不以PCR为基础的扩增技术）是目前公认的最好的单 细胞基因组扩增技术，它能对全基因组进行高保真的均匀 扩增，扩增出10~100kb大小的片段，能提供大量均一完 整的全基因组序列。但是MDA也有一些缺点，特别是显著 的非特异扩增，往往空白对照样品也总是“无中生有”地 产生大量的DNA，另外就是仍然存在序列偏差。另外，对 测序得到 的大量数据结果的专业分析也是一个重大的挑 战。单细胞全基因组测序正在从基础研究走向临床应用。