AlexaFluor系列染料

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流式常用荧光染料概要

流式常用荧光染料概要

如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料
流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢?
首先要考虑,他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时,必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。

发射光波长,如:氩离子气体激光管,它的发射光波488nm;
氦氖离子气体激光管发射光波长633nm;
488nm激光光源常用的荧光染料有FITC(异硫氰酸荧光素);
PE(藻红蛋白)
PI(碘化丙啶)
CY5(化青素)
preCP(叶绿素蛋白)
ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。

激发光和发射光波长,如下:
流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器
流式•细胞仪交流论坛:/forum-181-1.ht ml
荧光染料谱。

关于荧光染(资料集合)

关于荧光染(资料集合)

关于荧光染料(资料集合)●人肉眼对光源波长的颜色感觉红色770-622 nm橙色622~597 nm黄色597~577 nm绿色577~492 nm蓝靛色492~455nm紫色455~350nm●理想的荧光染料一般具有以下几个特点:1.具有高的光子产量,信号强度高;2.对激发光有较强的吸收,降低背景信号;3.激发光谱与发射光谱之间距离较大,减少背景信号的干扰;4.易与被标记的抗原、抗体或其他生物物质结合而不影响被标记物的特异性;5.稳定性好,不易受光、温度、PH、标本抗凝剂和固定剂的影响。

●染料在生物化学中最早的应用是直接对切片进行染色,然后进行观察。

随着生物技术、计算机技术以及荧光光谱测定技术的不断发展,许多染料尤其是荧光染料在细胞检测、肿瘤基因蛋白分析、毒物分析、临床医疗诊断等方面得到了广泛的应用。

荧光染料泛指吸收某一波长的光波后能发射出另一大于吸收光波长的光波的物质。

利用荧光染料进行抗体标记分析在现代生物免疫学领域中应用广泛,并逐步显示出明显的优越性。

下面简要介绍应用于标记抗体的荧光染料及其种类:1.荧光素类染料,包括异硫氰酸荧光素(FITC)、羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TET)等及其类似物。

这是一类具有较多苯环的化合物。

应用最广泛的是FITC(如图为FITC标记的组织荧光图),在488nm 处由氩离子激光激发,发射525nm的蓝绿色荧光。

FITC能够与各种抗体蛋白结合,并在碱性溶液中稳定呈现蓝绿色荧光。

2.罗丹明类染料,包括红色罗丹明(RBITC)、四甲基罗丹明(TAMRA)、罗丹明B(TRITC)等。

TRITC在550nm处被激发可发射出570nm的黄色荧光。

3.Cy系列菁染料,菁染料通常有两个杂环体系组成,包括Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7及其类似物。

4.Alexa系列染料,它是由MolecularProbes开发的系列荧光染料。

其激发光和发射光光谱覆盖大部分可见光和部分红外线光谱区域,应用广泛。

Alexa Fluor 647 标记山羊抗小鼠 IgG (H+L)

Alexa Fluor 647 标记山羊抗小鼠 IgG (H+L)

Alexa Fluor 647标记山羊抗小鼠IgG (H+L)产品简介:本Alexa Fluor 647标记山羊抗小鼠IgG (H+L) (Alexa Fluor 647-labeled Goat Anti-Mouse IgG (H+L))为进口分装,用于免疫荧光染色。

Alexa Fluor 647是一种较常用的非常明亮的远红外荧光探针。

通常该荧光探针被激发后肉眼不能观察到激发出来的长波长荧光,但可以被很多成像系统例如激光共聚焦显微镜等所检测到。

Alexa Fluor 647的荧光光谱与Cy5比较接近。

AlexaIgG、牛IgG(bovine IgG)、兔IgG和猪IgG吸附纯化的优质二抗。

对人IgG、马IgG、牛IgG(bovine IgG)、兔IgG和猪IgG几乎没有结合能力。

特别适合于对于二抗种属特异性要求比较高的荧光染色实验。

本Alexa Fluor 647标记山羊抗小鼠IgG (H+L)用于免疫荧光染色时的推荐稀释比例为1:500。

实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节荧光标记二抗的稀释比例,推荐的调节范围为1:200-1000。

本抗体如果用于常规的免疫染色,以每次检测需1毫升1:500稀释的荧光标记二抗计,至少可以检测50次。

如果适当重复使用已经使用过的荧光标记二抗,至少可以多检测150-250次。

保存条件:-20℃避光保存,一年有效。

注意事项:为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:1.免疫荧光染色请参考相关实验步骤进行。

起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。

2.如果希望重复使用稀释的荧光标记二抗,稀释的荧光标记二抗4℃保存。

使用本产品的文献:1. Zhao G, Zhou A, Lu G, Meng M, Sun M, Bai Y, Han Y, Wang L, Zhou H, Cong H, Zhao Q, Zhu XQ, He S.Identification and characterization of Toxoplasma gondii aspartic protease 1 as a novel vaccine candidate againsttoxoplasmosis.Parasit Vectors. 2013 Jun 14;6:175. doi: 10.1186/1756-3305-6-175.2. Ge C, Song J, Chen L, Wang L, Chen Y, Liu X, Zhang Y, Zhang L, Zhang M.Atheroprotective pulsatile flow induces ubiquitin-proteasome-mediated degradation of programmed cell death 4 in endothelial cells.PLoS One. 2014 Mar 13;9(3):e91564. doi: 10.1371/journal.pone.0091564. eCollection 2014.。

alexaflour 532分子式

alexaflour 532分子式

主题:alexaflour 532分子式解析1. 介绍alexaflour 532的基本信息alexaflour 532是一种荧光染料,通常用于生物医学研究和生物标记。

它具有光稳定性和较高的荧光效率,被广泛应用于细胞成像和蛋白质定位等领域。

2. 分子式的组成及化学结构alexaflour 532的分子式为C38H46ClN3O6S2,它是一种有机化合物。

该分子由38个碳原子、46个氢原子、3个氮原子、6个氧原子和2个硫原子组成。

在分子结构上,alexaflour 532具有苯环和氨基等基团,这些基团赋予了它荧光性质。

3. 荧光性质alexaflour 532在适当的激发光下,会发出绿色荧光,具有较高的荧光量子产率和光稳定性。

这使得它成为细胞成像和荧光标记的理想选择。

4. 应用领域alexaflour 532广泛应用于生物医学领域,包括细胞成像、蛋白质定位、细胞分析等。

由于其稳定的荧光特性,可以在活细胞中长时间追踪目标分子的位置和分布,为生命科学研究提供了重要工具。

5. 实验方法使用alexaflour 532进行细胞成像实验时,通常需要将其与待研究的生物分子标记结合,然后通过激发光源激发,并观察其发出的荧光信号。

还需要注意控制实验条件,以确保荧光信号的稳定性和准确性。

6. 总结alexaflour 532作为一种优秀的荧光染料,在生物医学研究领域发挥着重要作用。

它的分子式C38H46ClN3O6S2揭示了其化学组成和结构特点,其荧光性质和广泛的应用领域使它成为研究人员青睐的选择。

通过合理的实验方法和技术手段,能更好地发挥其在生物标记和成像中的作用,为科学研究提供更加丰富的信息和数据。

7. alexaflour532的荧光机制alexaflour 532的荧光性质主要源自于其特定的化学结构和分子组成。

当alexaflour 532受到激发光源的激发后,其中的某些电子被激发到一个较高能级的轨道上,形成激发态。

荧光染料

荧光染料

AlexaFluor 荧光素是市场上效果最好的荧光素,比较传统荧光素,它具有以下优点:·多色彩选择的灵活性- 染料颜色区广,从蓝色到远红外;·更亮- 荧光强度明显高于近似波长的对应染料,可高达20 倍,镜下可持续3 分钟;·更不容易光淬灭;·对PH 变化极不敏感,可耐受PH2.5-10 广泛的PH 环境;·仪器适配性佳- 荧光显微镜、流式细胞仪等。

AlexaFluor 488 和FITC 的荧光强度对比AlexaFluor488 的荧光强度随时间降低的速度要远小于FITCAlexaFluor 488 的荧光强度几乎不随pH 变化,而FITC 变化显著麦生物™ AlexaFluor 荧光标记抗体实验推荐稀释浓度:使用前先离心,只使用上清,这样能避免保存过程中可能出现的任何微小的蛋白沉淀带来的背景染色。

染色步骤根据应用不同而有差异,所以抗体稀释精确倍数也需要摸索。

一般来说,可使用下表的荧光二抗浓度来进行初始实验:流式细胞术0.06-1.0 ug/106细胞免疫荧光1-10 ug/ml您需根据不同实验需要滴定抗体的最适稀释比例,即最佳工作浓度。

用PBS 进行稀释。

普通荧光素和Alexa Fluor® 替换对应表(括弧中为激发/ 发射波长最值)如果您使用... 那么您可以尝试...AMCA, coumarin (350/445) A lexa Fluor® 350 (346/442)Cascade Blue® (4000/423)Alexa Fluor® 405 (402/421) Alexa Fluor® 430 (434/539)Cy®2, FITC (488/519)Alexa Fluor® 488 (495/519) Alexa Fluor® 532 (531/554)PE, TRITC, TAMRA(547/572)Alexa Fluor® 546 (556/573) Cy®3 (550/570)Alexa Fluor® 555 (555/565) Rhodamine Red (570/576) Alexa Fluor® 568 (578/603)Texas Red® (589/615)Alexa Fluor® 594 (590/617) Alexa Fluor® 633 (632/647)Cy®5, APC (650/670,660)Alexa Fluor® 647 (650/668) Alexa Fluor® 660 (663/690)Cy®5.5 (675/694)Alexa Fluor® 680 (679/702) Alexa Fluor® 700 (696/719)Cy®7 (743/767) Alexa Fluor® 750 (752/779)。

AlexaFluor488抗体标记试剂盒

AlexaFluor488抗体标记试剂盒

Alexa Fluor 488抗体标记试剂盒试剂盒组分:A.AF488活性染料5瓶B.碳酸氢钠~84mgC.纯化树脂~10mlD.空柱5个E.收集管5个注意:纯化的蛋白buffer中不得含有铵离子或伯铵,因为它们会与蛋白质竞争结合活性染料。

不纯的抗体或者含BSA或明胶的抗体标记效果不好。

低浓度的叠氮钠(小于3mM)或thimerosal(小于1mM)不影响偶联效果。

一、实验步骤:1.标记蛋白1.1将1ml去离子水加入B组分瓶中,配成1M的碳酸氢钠溶液。

振荡或吹打至完全溶解。

该溶液pH约8.3,2~6度保存可用2星期;1.2若抗体是溶液,将抗体稀释至1mg/ml,再加入1/10体积的上述碳酸氢钠溶液;若抗体是冻干粉,将1M碳酸氢钠溶液用10倍去离子水稀释成0.1M后,用其将抗体溶成1mg/ml的溶液;1.3将上一步的蛋白溶液100μl加入活性染料瓶中。

盖上盖子轻轻翻动一会儿至染料完全溶解。

剧烈震动可能会导致蛋白降解(可将瓶上的标签撕掉后观察溶解情况);1.4室温孵育溶液1小时,每10~15min轻轻翻动瓶子使两种反应物混合均匀(孵育期间进行2.1~2.4步准备树脂柱,这个过程需要大约15min)。

2.纯化标记上的蛋白2.1 将树脂柱放入一个13×100mm的玻璃管中;2.2 搅动纯化树脂(组分C),加入1.0ml悬浮液至空柱中静置;2.3 继续加入树脂至床体积为~1.5ml;2.4将树脂柱放入一个收集管中,用垂直转子1100g离心3min,rpm与相对离心力g的换算公式如下:相对离心力g=(1.12×10-5)(rpm)2(半径cm);离心后静置待缓冲液全部流出,弃去缓冲液,保留收集管(若没有垂直转子,角转子也可);2.5 将1.4步的反应液100μl逐滴加入树脂柱的中心部位,使溶液被吸入胶床中;2.6 将树脂柱放入空的收集管中,1100g离心5min;2.7 离心后,收集管内是标记好的蛋白,溶在100μlPBS中,pH7.2,包括2mM的叠氮钠。

Alexa Fluor 染料

Alexa Fluor 染料

无论你的实验需要标记的一抗,的键,但是四氟苯酯更不容易在结合反应中自发水解。

Alexa Fluor 488四氟苯酯也可以单独提供(表3)。

通过标记的二抗增强信号如果所制备的标记一抗是不实用的,或者无法提供足够的灵敏度,那就需要高质量的二抗来解决问题。

尽管来自于一抗和二抗的非特异性结合可以提高背景水平,选择一个较好的标记了的二抗,通常可以通过显著性的信号扩增来克服升高了的荧光背景。

当然,不是每一个商业上可以提供的二抗都是完全被纯化或优化标记的(图3)。

Molecular Probes提供了在任何地方均可获得的可以进行最大选择的荧光二抗。

(全部目录详见在线手册的第7章,网址是/handbook)。

图3. Molecular Probes的Alexa Fluor 647山羊抗鼠IgG 抗体与可购买到的其它公司提供的Cy5 山羊抗鼠IgG抗体亮度的比较这些包括具有强烈荧光的Alexa Fluor抗体耦合物,在各个光谱都胜过大多数常规使用的荧光二抗。

在制备每个二抗耦合物时,我们采用了质量最高的蛋白,然后优化标记,以形成最亮的的耦合物,最后使用细胞样品进行严格的测试,以确保低非特异性结合和高特异性染色。

Alexa Fluor二抗正快速成为所有基于荧光免疫测定的首选的二级试剂。

在我们新的Image-iT 试剂盒中还将包含几个Alexa Fluor 抗体耦合物—-每个Image-iT试剂盒都含一个明亮的并且光稳定的Alexa Fluor耦合物和所有用来优化固定细胞和组织成像的试剂。

通过酪胺信号放大技术(Tyramide Signal Amplification)促使信号增强当实验样品的靶点不是很丰富的时候,通过二抗的信号扩增是不够的。

对于此种情况,我们已经开发了酪胺信号放大技术(TSA)试剂盒(表4),它利用了超亮度的Alexa Fluor染料以达到最终的高清晰度信号扩增。

TSA 技术—有时也称作CARD(catalyzed reporter deposition)—是一种利用了辣根过氧化物酶(HRP)的催化活性在靶蛋白或核酸序列上产生高密度原位标记的酶介导检测方法(图4)。

荧光染料

荧光染料

荧光蛋白 QY Y66H Y66F EBFP EBFP2 Azurite GFPuv T-Sapphire Cerulean mCFP ECFP CyPet Y66W mKeima-Red TagCFP AmCyan1 mTFP1 S65A Midoriishi Cyan 360 360 380 383 383 385 399 433 433 434 435 436 440 458 458 462 471 472 442 508 440 448 447 508 511 475 475 477 477 485 620 480 489 492 504 495 0.9 25 dimer 0.75 0.24 3 29 29 54 monomer dimer tetramer dimer 0.60 0.62 0.40 0.15 0.51 26 27 13 3 18 59 weak dimer 25 36 64 weak dimer weak dimer monomer 0.18 0.27 20 15 monomer monomer monomer BR PS
503 504 509 510 536 543;590 546 547 642 647 361/330 506 505 505 548/579
530/640 523 533 ~600
DNA/RNA DNA Vital stain, TOTO: Cyanine Dimer TO-PRO: Cyanine Monomer
0.68
39
0.69
26k 105k 26k
0.60 0.74 0.91 0.61 0.57 0.76 0.77
34 41 40 47 51 57 53 59 80 1.65 13 31
174

常用荧光染料探针列表

常用荧光染料探针列表

这是来自于Salk的一个比较全的荧光染料列表,这些荧光染料可广泛用于流式细胞术以及荧光显微镜技术,汇集了各种荧光染料的特性,方便大家查找。

可根据实际所用的检测平台、染料的最大激发光波长和最大发射光波长来选择合适的荧光染料用于实验。

请注意这上面所显示的颜色可能会由于所用浏览器不同而有所不同,他们只是一个与实际颜色的近似值。

Ex: Peak excitation wavelength (nm)
Em: Peak emission wavelength (nm)
QY: Quantum yield
BR: Brightness; Extinction coefficient * Quantum yield / 1000 PS: Photostability; time to 50% brightness (sec)
光色波长λ(nm)代表波长
红(Red)780~630700
橙(Orange)630~600620
黄(Yellow)600~570580
绿(Green)570~500550
青(Cyan)500~470500
蓝(Blue)470~420470
紫(Violet)420~380420。

AlexaFluor488标记山羊抗兔IgG(HL)

AlexaFluor488标记山羊抗兔IgG(HL)

Alexa Fluor 488标记山羊抗兔IgG (H+L)产品简介:本Alexa Fluor 488标记山羊抗兔IgG (H+L) (Alexa Fluor 488-labeled Goat Anti-Rabbit IgG (H+L))为进口分装,用于免疫荧光染色。

Alexa Fluor 488是一种常用的非常明亮的绿色荧光探针。

它比绝大部分常用的绿色荧光探针更加明亮,更加不容易淬灭,IgG和大鼠IgG吸附纯化的优质二抗。

对人IgG、小鼠IgG和大鼠IgG几乎没有结合能力。

特别适合于对于二抗种属特异性要求比较高的荧光染色实验。

本Alexa Fluor 488标记山羊抗兔IgG (H+L)用于免疫荧光染色时的推荐稀释比例为1:500。

实际实验操作过程中需根据抗原和抗体的具体情况适当调节荧光标记二抗的稀释比例,推荐的调节范围为1:200-1000。

本抗体如果用于常规的免疫染色,以每次检测需1毫升1:500稀释的荧光标记二抗计,至少可以检测50次。

如果适当重复使用已经使用过的荧光标记二抗,至少可以多检测150-250次。

保存条件:-20℃避光保存,一年有效。

注意事项:为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:1.免疫荧光染色请参考相关实验步骤进行。

起始稀释浓度按照产品简介中推荐的稀释比例进行稀释。

2.如果希望重复使用稀释的荧光标记二抗,稀释的荧光标记二抗4℃保存。

使用本产品的文献:1. Lu X, Zhang N, Meng B, Dong S, Hu Y.Involvement of GPR12 in the regulation of cell proliferation and survival.Mol Cell Biochem. 2012 Jul;366(1-2):101-10.2. Lu X, Zhang N, Dong S, Hu Y.Involvement of GPR12 in he induction of neurite outgrowth in PC12 cells.Brain Res Bull. 2012 Jan 4;87(1):30-6.3. Su J, Wang Y, Li R, Peng H, Hua S, Li Q, Quan F, Guo Z, Zhang Y.Oocytes selected using BCB staining enhance nuclear reprogramming and the in vivo development of SCNTembryos in cattle.PLoS One. 2012;7(4):e36181. doi: 10.1371/journal.pone.0036181. Epub 2012 Apr 27.4. Qiu M, Quan F, Han C, Wu B, Liu J, Yang Z, Su F, Zhang Y.Effects of granulosa cells on steroidogenesis, proliferation and apoptosis of stromal cells and theca cells derivedfrom the goat ovary.J Steroid Biochem Mol Biol. 2013 Jun 28. pii: S0960-0760(13)00120-9. doi: 10.1016/j.jsbmb.2013.06.005.5. Yang Z, Liu J, Liu H, Qiu M, Liu Q, Zheng L, Pang M, Quan F, Zhang Y.Isolation and Characterization of SSEA3(+) Stem Cells Derived from Goat Skin Fibroblasts.Cell Reprogram. 2013 Jun;15(3):195-205. doi: 10.1089/cell.2012.0080. Epub 2013 May 13.6. Liu J, Yang Z, Qiu M, Luo Y, Pang M, Wu Y, Zhang Y.Developmental potential of cloned goat embryos from an SSEA3(+) subpopulation of skin fibroblasts.Cell Reprogram. 2013 Apr;15(2):159-65. doi: 10.1089/cell.2012.0073. Epub 2013 Feb 26.7. Deng Z, Yan F, Jin Q, Li F, Wu J, Liu X, Zheng H.Reversal of multidrug resistance phenotype in human breast cancer cells using doxorubicin-liposome-microbubble complexes assisted by ultrasound.J Control Release. 2014 Jan 28;174:109-16. doi: 10.1016/j.jconrel.2013.11.018. Epub 2013 Nov 25.8. Miao SH, Sun HB, Ye Y, Yang JJ, Shi YW, Lu M, Hu G, Zhou JW.Astrocytic JWA Expression is Essential to Dopaminergic Neuron Survival in the Pathogenesis of Parkinson's Disease.CNS Neurosci Ther. 2014 Aug;20(8):754-62. doi: 10.1111/cns.12249. Epub 2014 Mar 17.9. Su J, Hu G, Wang Y, Liang D, Gao M, Sun H, Zhang Y.Recombinant human growth differentiation factor-9 improves oocyte reprogramming competence and subsequent development of bovine cloned embryos. Cell Reprogram. 2014 Aug;16(4):281-9. doi: 10.1089/cell.2014.0001. Epub 2014 May 19.10.Zhao ZW, Pan DD, Wu Z, Sun YY, Guo YX, Zeng XQ.Antialcoholic liver activity of whey fermented by Lactobacillus casei isolated from koumiss.J Dairy Sci. 2014 Jul;97(7):4062-71. doi: 10.3168/jds.2014-7954. Epub 2014 Apr 24.11.Jin Y, Sun C, Feng L, Li P, Xiao L, Ren Y, Wang D, Li C, Chen L.Regulation of SIV antigen-specific CD4+ T cellular immunity via autophagosome-mediated MHC II molecule-targeting antigen presentation in mice. PLoS One. 2014 Mar 26;9(3):e93143. doi: 10.1371/journal.pone.0093143. eCollection 2014.12.Zhang H, Xiao Y, Wang X, Riaz H, Li W, Fu S, Xin Y, Shi L, Ma F, Li X, Yang L.Effects of histone deacetylase inhibitors on the early development of bovine androgenetic embryos.Cell Reprogram. 2014 Feb;16(1):54-64. doi: 10.1089/cell.2013.0027. Epub 2014 Jan 4.13.Gao W, Gu Y, Li Z, Cai H, Peng Q, Tu M, Kondo Y, Shinjo K, Zhu Y, Zhang J, Sekido Y, Han B, Qian Z, Miao Y.miR-615-5p is epigenetically inactivated and functions as a tumor suppressor in pancreatic ductal adenocarcinoma.Oncogene. 2014 Apr 28;0. doi: 10.1038/onc.2014.101.14.Cheng J, Sun Y, Zhang X, Zhang F, Zhang S, Yu S, Qiu X, Tan L, Song C, Gao S, Wu Y, Ding C.Toll-like receptor 3 inhibits Newcastle disease virus replication through activation of pro-inflammatory cytokines and the type-1 interferon pathway. Arch Virol. 2014 Jun 17.15.Su J, Wang Y, Zhang L, Wang B, Liu J, Luo Y, Guo Z, Quan F, Zhang Y.Oocyte-secreted factors in oocyte maturation media enhance subsequent development of bovine cloned embryos.Mol Reprod Dev. 2014 Apr;81(4):341-9. doi: 10.1002/mrd.22302. Epub 2014 Feb 18.16.Ge XY, Yang LQ, Jiang Y, Yang WW, Fu J, Li SL.Reactive oxygen species and autophagy associated apoptosis and limitation of clonogenic survival induced by zoledronic acid in salivary adenoid cystic carcinoma cell line SACC-83.PLoS One. 2014 Jun 25;9(6):e101207. doi: 10.1371/journal.pone.0101207. eCollection 2014.17.Su J, Wang Y, Li W, Gao M, Ma Y, Hua S, Quan F, Zhang Y.Effects of 3-hydroxyflavone on the cellular and molecular characteristics of bovine embryos produced by somatic-cell nuclear transfer.Mol Reprod Dev. 2014 Mar;81(3):257-69. doi: 10.1002/mrd.22293. Epub 2014 Jan 10.。

常用抗体荧光染料的选择

常用抗体荧光染料的选择

常用抗体荧光染料的选择随着免疫荧光技术的不断发展,荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。

目前,市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM, USA); Alexa Fluor®系列(Life technology, USA); DyLight系列; Cy系列; IR Dye系列等等。

使用最多的为Alexa Fluor®系列和CFTM系列。

一、CFTM系列染料的核心对比Alexa Fluor®系列具有以下几点优势:1、新型罗丹明核心罗丹明染料以优异的耐光性和良好的荧光量子产量著称。

因此很多Alexa Fluor®染料具有罗丹明核心结构,但是,传统罗丹明的化学结构很难从长波长的荧光染料延伸至远红外区域甚至是更具挑战性的近红外区域,而且生物偶联后其水溶性并不理想。

Biotium 科学家发现从绿色到近红外多色荧光的罗丹明染料的新型化学方法。

该方法被有效的应用于CF染料的产品中,尤其是远红外CF染料,而且通过这种方法制备的染料不仅水溶性极佳而且耐光性极好。

2、特异性高的近红外染料近红外染料最大的特点是比可见光范围要大很多,大滴的染料常会导致染料水溶性低、染料聚合体多、荧光量子产量差等问题。

为了解决这些问题,许多商用的近红外染料比如AlexaFluor®、DyLight®dyes和IRDyes®近红外染料,在制备时吸附了大量的带负电荷的磺化基团,其磺化作用可以在一定程度上会提高染料的溶解性和荧光性,但这样也带来了另一些更加严重的问题,经这种染料标记的生物耦联物的非特异性结合。

Biotium的科学家用革命性的方法设计出近红外染料CF,在避免引入大量负电荷的情况下,极大的保证了染料优异的理化特性。

Biotium 近红外的CF 染料以花青或罗丹明染料为核心结构,该核心结构的特殊化学修饰限制了染料的分子内位移,从而获得染料的高量子产率和更好的水溶性。

生物荧光染料波长

生物荧光染料波长

生物荧光染料波长荧光染料是一种能够吸收特定波长的光并发射出不同波长的光的化合物。

它们在生物科学研究、医学诊断、药物开发等领域中起着重要作用。

本文将介绍几种常见的生物荧光染料及其波长特性。

一、荧光染料的波长定义荧光染料的波长通常由其吸收峰和发射峰决定。

吸收峰是指荧光染料能够吸收的最大波长,而发射峰则是指荧光染料在受到激发后发射的最大波长。

二、常见的荧光染料及其波长特性1. Alexa Fluor 488(波长:495 nm/519 nm)Alexa Fluor 488是一种常用的荧光染料,其吸收峰位于495 nm,发射峰位于519 nm。

它在细胞免疫荧光染色、蛋白质定位研究等方面广泛应用。

2. Cy3(波长:550 nm/570 nm)Cy3是一种红色荧光染料,其吸收峰位于550 nm,发射峰位于570 nm。

它常用于DNA、RNA等核酸的荧光标记,也可用于蛋白质荧光标记。

3. Texas Red(波长:595 nm/615 nm)Texas Red是一种红色荧光染料,其吸收峰位于595 nm,发射峰位于615 nm。

它在细胞荧光染色、分子探针等方面有广泛应用,常用于免疫荧光标记和显微镜观察。

4. FITC(波长:492 nm/520 nm)FITC是一种绿色荧光染料,其吸收峰位于492 nm,发射峰位于520 nm。

它常用于细胞免疫荧光染色、蛋白质标记等研究中。

5. Rhodamine B(波长:554 nm/576 nm)Rhodamine B是一种橙红色荧光染料,其吸收峰位于554 nm,发射峰位于576 nm。

它在细胞荧光染色、荧光显微镜观察等方面有广泛应用。

6. DAPI(波长:358 nm/461 nm)DAPI是一种蓝色荧光染料,其吸收峰位于358 nm,发射峰位于461 nm。

它可用于染色体核型分析、细胞核染色等。

三、荧光染料的应用领域荧光染料在生物科学领域中有着广泛的应用。

它们可以被用于细胞荧光染色、蛋白质定位、基因表达分析、药物荧光标记等方面。

荧光抗体染料大集合

荧光抗体染料大集合

荧光抗体染料大集合染料在生物化学中最早的应用是直接对切片进行染色,然后进行观察。

随着生物技术、计算机技术以及荧光光谱测定技术的不断发展,许多染料尤其是荧光染料在细胞检测、肿瘤基因蛋白分析、毒物分析、临床医疗诊断等方面得到了广泛的应用。

荧光染料泛指吸收某一波长的光波后能发射出另一大于吸收光波长的光波的物质。

利用荧光染料进行抗体标记分析在现代生物免疫学领域中应用广泛,并逐步显示出明显的优越性。

下面简要介绍应用于标记抗体的荧光染料及其种类:1.荧光素类染料,包括异硫氰酸荧光素(FITC)、羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TET)等及其类似物。

这是一类具有较多苯环的化合物。

应用最广泛的是FITC(如图为FITC标记的组织荧光图),在488nm处由氩离子激光激发,发射525nm的蓝绿色荧光。

FITC能够与各种抗体蛋白结合,并在碱性溶液中稳定呈现蓝绿色荧光。

2.罗丹明类染料,包括红色罗丹明(RBITC)、四甲基罗丹明(TAMRA)、罗丹明B (TRITC)等。

TRITC在550nm处被激发可发射出570nm的黄色荧光。

3.Cy系列菁染料,菁染料通常有两个杂环体系组成,包括Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7及其类似物。

4.Alexa系列染料,它是由Molecular Probes开发的系列荧光染料。

其激发光和发射光光谱覆盖大部分可见光和部分红外线光谱区域,应用广泛。

以高亮度、稳定性、仪器兼容性、多种颜色、pH值不敏感以及水溶性为主要特点。

包括Alexa Fluor350、405、430、488、532、546、555、568、594、610、633、647、680、700、750。

目前市面上Alexa系列染料应用非常广泛,且逐渐替代传统的荧光染料,如Alexa Fluor488可替代FITC、Cy2;Alexa Fluor555可替代Cy3、TAMRA;Alexa Fluor633可替代APC、Cy5等。

常用染料特征之欧阳美创编

常用染料特征之欧阳美创编

常用抗体标记荧光染料的特性及其应用1、FITC:激发波长488nm,最大发射波长525nm。

1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL1通道检测;3)可用于荧光显微镜技术4)荧光强度易受PH值影响,PH值降低时其荧光强度减弱。

2、Alexa Fluor 488:激发波长488nm,最大发射波长519nm。

1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL1通道检测;3)具有超乎寻常的光稳定性,非常适用于荧光显微镜技术;4)在较宽的PH值范围内保持稳定(PH4~10)。

3、Cy3:激发波长488nm,最大发射波长570nm。

1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL2通道检测;3)适用于荧光显微镜技术;4)为小分子染料,非常适合需小分子染料的流式细胞术,荧光强度低于PE。

4、Cy5:激发波长633/635nm,最大发射波长670nm。

1)其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL4通道检测;3)适用于荧光显微镜技术;4)同样为小分子染料,非常适合需小分子染料的流式细胞术,荧光强度低于APC。

5)与单核和粒细胞非特异性结合多,易出现假阳性结果。

5、PE:激发波长488nm,最大发射波长575nm。

1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL2通道检测;3)其荧光泯灭性强,不适用于传统的荧光显微镜技术,但适用于激光共聚焦显微镜技术。

6、PE-TR:激发波长488nm,最大发射波长615nm。

1)在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测;2)可适用于小功率激光器的流式细胞仪,也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。

7、PE-Alexa Fluor 610:激发波长488nm,最大发射波长628nm。

荧光染料大荟萃!

荧光染料大荟萃!

荧光染料大荟萃!荧光染料荧光染料可对蛋白质、核酸和聚糖等其他结构进行染色,即便钙离子等非生物物质也可以检测出来。

利用荧光物质与相应抗体或抗原发生特异性结合后,可对待测物进行定位、定性和定量的分析,此方法具有高度特异性、敏感性和直观性,是最早出现的免疫标记技术。

本文就对几种常用的荧光剂进行了具体的介绍。

免疫荧光 (IF)在荧光显微镜技术中,可以通过两种方式观察到你的目的蛋白:利用内源荧光信号,即通过克隆手段,用遗传学方法将荧光蛋白与目的蛋白相连;或利用荧光标记的抗体特异性结合目的蛋白。

有些生物学问题采用第二种方法会更有用或更有必要。

比如,组织学样品无法使用荧光蛋白,因为通常来说,标本都是从无法保存荧光蛋白的生物体中获取。

此外,当有一个有功能的抗体可用时,免疫荧光法会比荧光蛋白技术快很多,因为后者必须先克隆目的基因再将DNA转染到适当的细胞中。

荧光蛋白的另一项劣势在于其本身属于蛋白质。

因此,细胞内的这些荧光蛋白具有特定的蛋白质特性,其会导致附着的目的蛋白质发生功能紊乱或出现误释的情况。

然而,荧光蛋白技术仍然是观察活细胞的首选方法。

免疫荧光法利用了抗体可以和相应抗原特异性结合的这个特性,对此它还有两种不同的表现形式。

最简单的方式是使用可与目的蛋白相结合的荧光标记抗体。

这种方法被称为“直接免疫荧光法”。

在很多情况下,我们可以利用两种不同特性的抗体。

第一种抗体可以结合目的蛋白,但其本身并未进行荧光标记(一抗)。

第二种抗体本身就携带荧光染料(二抗),并且可以特异性结合一抗。

这种方法被称为“间接免疫荧光法”。

这种方法存在诸多优势。

一方面,它会产生放大效应,因为不只一个二抗可以与一抗相结合。

另一方面,没有必要始终用荧光染料标记目的蛋白的每个抗体,但可以使用市售荧光标记的二抗。

免疫荧光中广泛使用的荧光染料包括FITC、TRITC 或一些Alexa Fluor?染料,下文均有提及。

FITC 和 TRITC异硫氰酸荧光素(FITC) 是一种有机荧光染料,目前,这种荧光染料仍用于免疫荧光和流式细胞术中。

alexaflour 568分子式

alexaflour 568分子式

一、概述AlexaFluor 568是一种生物标记物,具有出色的光稳定性和荧光强度,被广泛应用于生物医学领域。

本文将对AlexaFluor 568的分子式、特性和应用进行详细介绍。

二、AlexaFluor 568的分子式1. AlexaFluor 568是一种荧光染料,其化学分子式为C_34H_50N_4O_6S_2,并且其分子量为646.9g/mol。

它是一种橙红色的荧光染料,可在激发波长为578nm时发射出红橙色的荧光。

2. AlexaFluor 568的结构中含有两个硫醚键,这使得它具有优秀的光稳定性和荧光强度,能够在较长时间内保持明亮的荧光信号。

三、AlexaFluor 568的特性1. 光稳定性:AlexaFluor 568在光照条件下能够保持较长时间的荧光稳定性,不易受到光破坏而消失。

2. 荧光强度:相较于传统的荧光染料,AlexaFluor 568具有更高的荧光强度,能够提供更清晰和明亮的荧光信号。

3. 光谱特性:AlexaFluor 568的光谱特性使其在激发波长为578nm时能发出明亮的红橙色荧光,适合用于各种荧光成像实验。

四、AlexaFluor 568的应用1. 生物标记:AlexaFluor 568能够与生物分子特异性结合,用于细胞荧光标记,蛋白质定位和细胞器示踪等生物学实验。

2. 免疫组化:AlexaFluor 568作为一种优秀的荧光染料,在免疫组化实验中能够提供明亮且清晰的信号,用于检测生物标本中的蛋白质和细胞结构。

3. 荧光成像:结合激光共聚焦显微镜或荧光显微镜使用,AlexaFluor 568可以提供高分辨率的细胞内荧光成像,被广泛应用于细胞生物学和生物医学研究。

五、结论AlexaFluor 568作为一种优秀的荧光染料,在生物医学领域有着广泛的应用前景。

其分子式为C_34H_50N_4O_6S_2,具有良好的光稳定性和荧光强度,适合用于细胞荧光标记、免疫组化和荧光成像等实验。

P0190 免疫荧光染色试剂盒-抗小鼠Alexa Fluor 555

P0190 免疫荧光染色试剂盒-抗小鼠Alexa Fluor 555

免疫荧光染色试剂盒-抗小鼠Alexa Fluor 555产品简介:免疫荧光染色试剂盒(Immunol Fluorence Staining Kit)系列是碧云天开发的用于细胞或组织切片免疫荧光染色的试剂盒。

在有适当的一抗检测特定的目标蛋白时,就可以使用免疫荧光染色试剂盒检测到红色、绿色或蓝色等荧光。

免疫荧光染色试剂盒-抗小鼠Alexa Fluor 555 (Immunol Fluorence Staining Kit with Alexa Fluor 555-Labeled Donkey Anti-Mouse IgG),含有Alexa Fluor 555标记的驴抗小鼠IgG (H+L)抗体,可以用于检测小鼠来源的相应一抗,观察到的颜色为非常鲜艳的红色。

Alexa Fluor 555是一种常用的非常明亮的红色荧光探针。

它比绝大部分常用的红色荧光探针更加明亮,更加不容易淬灭,4℃可以保存长达6个月,并且在6个月内至少可以重复使用10次。

本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液,可以使荧光更加持久。

本试剂盒对于六孔板内的细胞样品或常规切片,至少可以检测300个样品。

保存条件:-20℃保存,一年有效。

同时抗小鼠Alexa Fluor 555需避光保存。

注意事项:需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。

在使用抗荧光淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭,但仍宜尽量避光,特别是需要尽量缩短在荧光显微镜下的观察时间。

荧光物质均易发生淬灭,染色后宜尽快进行荧光显微镜下的观察。

如果不能及时观察可以4℃避光保存,但存放时间通常不宜超过一周,随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。

免疫荧光染色效果的好坏和一抗的关系非常密切。

建议选购有较多文献报道的并注明可以用于免疫荧光染色的一抗用于本实验。

如果观察时发现荧光过弱,可以适当提高一抗的浓度;如果荧光还是比较弱,可以适当提高荧光标记抗体的浓度。

需自行配制用于免疫荧光染色的相关试剂,需自备盖玻片和载玻片(可以向碧云天订购)。

荧光染料的分类与介绍

荧光染料的分类与介绍

荧光染料分类荧光染料是在荧光剂的帮助下对细胞成分进行高度特异性的可视化。

可以是一种荧光蛋白、例如 GFP在基因上与感兴趣的蛋白质相关联。

接下来,新研博美的小编带大家了解一下我们公司荧光染料的分类。

一、花菁染料1、Cyanines(Cyanine dyes花菁染料)花青素(Cyanines)是在两个具有离域电荷的氮原子之间含有聚甲炔桥的分子:花青素(Cyanines)染料主要用于通过光学方法监测细胞、细胞器和囊泡中的膜电位差。

用于通过光学方法监测细胞、细胞器和囊泡中的膜电位差。

这些对电位敏感的染料在分子结构、电荷和通过膜的渗透性方面有所不同。

根据染料的不同,涉及到与膜的电位依赖性结合以及二聚体和更高聚集体的形成。

花菁染料有两种:非磺化花菁和磺化花菁。

对于许多应用,它们是可互换的,因为它们的光谱特性几乎相同。

磺化和非磺化染料均可用于标记生物分子,例如DNA和蛋白质。

染料之间的区别在于它们的溶解度:硫化染料是水溶性的,并且它们在水性环境中不使用有机助溶剂进行标记。

它们不易在水中聚集。

在某些情况下,需要使用一种类型的花菁。

非磺化花菁染料Cyanine3 NHS esterCyanine3.5 carboxylic acidCyanine5 azideCyanine5.5 hydrazideCyanine7 amineCyanine7.5 tetrazine磺化花菁染料sulfo-Cyanine3 DBCOSulfo-Cyanine3.5 alkyneSulfo-Cyanine5 NHS esterSulfo-Cyanine5.5 azideSulfo-Cyanine7 maleimideSulfo-Cyanine7.5 carboxylic acid2、ICG吲哚菁绿Indocyanine Green,ICG,吲哚菁绿CAS:3599-32-4是一种三碳菁染料,具有良好的水溶性,分子量为775,吲哚菁绿完全可以在血浆和全血液中几乎完全与血浆蛋白结合,可以保证其几乎完全留在血管中,不易向外扩散,因此被作为一种常用的血管造影剂使用。

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AlexaFluor系列染料
Alexa Fluor 系列染料――可见光谱的最佳染料,Alexa Fluor 是荧光标记试剂的一大突破,包括一系列近紫外、可见光和近红外光谱的优良染料,这些试剂产生的偶联物无一例外是实验检测过最好和最亮的,在蓝光和远红光范围提供了多色检测和FRET(荧光共振能量转移)的多种选择。

和R-PE 或APC 联用的Tandem 染料扩展了Alexa Fluor 在多色检测的应用。

Alexa Fluor 的优点如下:
◆亮度— Alexa Fluor 偶联物相比其他染料荧光更强。

◆光稳定性—Alexa Fluor 偶联物相比其他染料光稳定性更强,提供更
长的图像捕获时间。

◆仪器兼容性—Alexa Fluor 偶联物的吸收光谱与普通激发光源的主要
输出波长相匹配。

◆多种颜色— Alexa Fluor 偶联物有蓝色到红色的多种直接荧光.
◆pH 值不敏感— Alexa Fluor 染料在一个广泛的pH 范围内保持强荧
光.
◆水溶性— Alexa Fluor 反应性染料有良好的水溶性, 无需有机试剂即
可结合蛋白, 且储存不易产生沉淀.
Alexa Fluor 染料的光谱特性: Alexa Fluor 350—亮蓝和紫外光激发
Alexa Fluor 350 的蓝色荧光比AMCA 亮50%,而且最大发射波长稍短(为442 nm ,AMCA 为448nm),因此更容易与现有的绿色荧光基团区分。

Alexa Fluor 405 —近乎完美的匹配蓝色二极管激光器
Alexa Fluor 405 的激发/发射最大波长为402/421 nm,与近来使用的荧光显微镜和流式细胞仪405nm
谱线的蓝色二极管激光器近乎完美的匹配。

Alexa Fluor 405 琥珀酰酯是Cascade Blue 的氨基反应性衍生
物,后者是乙酰叠氮化物。

Alexa Fluor 405 琥珀酰酯纯度更高且有一个4-哌啶羧酸的间隔,使得荧光基团
与其偶联的生物分子之间的反应性最小化。

Alexa Fluor 430—高斯托克斯频移的430 nm 吸收
少数400 nm ~ 450 nm 吸收的染料在水溶液中可测荧光偏离500 nm。

Alexa Fluor 430 弥补了这一缺
陷,430 nm 激发时发射在540 nm 附近。

Alexa Fluor 488—最好的绿色荧光基团,Alexa Fluor 488 偶联蛋白优于其他荧光素,实验证明比包括Cy2 的其他绿色荧光基团都好。

不仅亮度更高,而且光稳定性更好。

在pH4~10 保持稳定是另一优越之处。

Alexa Fluor 532 —最适于532 nm 激发光源的染料
激发发射波长位于绿色荧光Alexa Fluor 488 和橙色荧光的Alexa Fluor 546 之间,适用于双频Nd:YAG
激光器在内的532 nm 激发光源。

Alexa Fluor 546—Cy3 和四甲基罗丹明的替代物
Alexa Fluor 546 标记的偶联物良好应用于橙色范围光谱,比四甲基罗丹明(TRITC 、TAMRA) 及Cy3 荧
光更强,容易被汞弧灯激发,发射波长546 nm。

Alexa Fluor 555—优于Cy3 的替代物
Alexa Fluor 555 与Cy3 偶联物的光谱相匹配,因此适用于Cy3 的滤光器。

Alexa Fluor 555 的总荧光更强,且光稳定性更好,为研究者提供了更长的图像捕获时间。

Alexa Fluor 568 —最适于568 nm 激发光源
Alexa Fluor 568 的橙红色荧光最适用于激光共聚焦显微镜的Ar–Kr 混合气体激光器,其发射的谱线为
568 nm。

与具有相似最大激发/发射波长的Lissamine Rhodamine B 和Rhodamine Red-X 相比,AlexaFluor 568 的偶联物亮度更高。

Alexa Fluor 594 —优于Texas Red 的替代品
Alexa Fluor 594 偶联物发出红色光,可与绿色荧光探针一同用于多色标记实验。

比Texas Red 偶联物有更高的亮度。

Alexa Fluor 610—Alexa Fluor 最好的红色染料
Alexa Fluor 610 亮度高、光稳定,可用检测Texas Red 和Alexa Fluor 594 的光学元件检测。

前身是
FRET-based Alexa Fluor–phycobiliprotein 的受体染料。

新的Alexa Fluor 610 激发/发射波长为612/628
nm,容易与绿色荧光基团相区分,适用于多色标记。

Alexa Fluor 610 仍为人眼可见,优于Alexa Fluor 633
和其他更长波长的荧光团。

Alexa Fluor 633 —光稳定性更强
远红光染料近来大受欢迎,是因为它们的光谱范围在大多数样品的自发荧光之外。

He–Ne 激光器
633 nm 和红色二极管激光器635 nm 谱线的广泛应用加速了兼容染料的开发。

Alexa Fluor 633 偶联物具有
亮度和光稳定性,吸收峰在632 nm,发射峰在650 nm。

Alexa Fluor 635 —He–Ne 激光器633 nm 线的最佳染料新的Alexa Fluor 635 染料,其偶联物比Alexa Fluor 633 亮度更高,因为它的吸收光谱不会象Alexa
Fluor 633、Cy5 和tetramethylrhodamine 那样分成两个峰。

Alexa Fluor 635 同样适用于He–Ne 激光器的
633 nm 谱线和红色二极管激光器的635 nm 谱线,吸收峰在633 nm,发射峰在647 nm。

Alexa Fluor 647 —优于Cy5 的替代品
Alexa Fluor 647 与Cy5 偶联物的光谱及滤光器相匹配。

Alexa Fluor 647 二抗偶联物的总荧光亮度高
于其他公司的Cy5 偶联物。

在与大多数的蛋白质、寡核苷酸和核酸结合时,Alexa Fluor 647 相比Cy5 荧光
吸收光谱波动很小,因此在同等程度的替换时发出的荧光更强。

Alexa Fluor 680 —Cy5.5 的替代物
Alexa Fluor 680 的激发峰在679 nm,最大发射为702 nm,与Cy5.5 类似。

Alexa Fluor 680 能够很好
的与其他红色荧光团区分,如Texas Red, R-phycoerythrin, Alexa Fluor 594 和Alexa Fluor 647,是理想
的三色与四色标记用染料。

Alexa Fluor 700 —远红光二极管激光器的最适染料
Alexa Fluor 700 最大吸收在696 nm,能够被675–700 nm 范围的氙弧灯、远红外二极管激光器或
dye-pumped lasers 激发。

发射光在红外区,峰值为719 nm。

Alexa Fluor 750—Alexa Fluor 最长波长的产品
Alexa Fluor 750 是目前的Alexa Fluor 系列产品中波长最长的产品,与Cy7 光谱相似。

其发射的最大
波长为779 nm,能够和Alexa Fluor 647 及allophycocyanin (APC)区分,适合多色分析。

Alexa Fluor 700
偶联物752 nm 的最大激发光使其适用于720–750 nm 范围的氙弧灯或dye-pumped lasers。

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