组织染色方法汇总

组织染色方法汇总

青海大学 08级动植物检验检疫 王志强

一、 常识：

1、酒精配制：例如将80%的酒精配制成70%的酒精时，可先将70ml 80%的酒精加入试管，再加蒸馏水10ml 至80ml 即可。

2、用酒精计测酒精浓度：不确定具体浓度时先用量程较大的测量。

3、一个染色缸容积约为50ml

4、组织脱水过程中可在70%酒精中长期保存。

5、玻片染色时，1:1表示二甲苯与无水酒精各半的混合物，DW 表示蒸馏水。

6、嗜银染色染液配制：

银液：1> 1%硝酸银水溶液3ml 2>PH5.6，0.1mol/l 醋酸盐缓冲液10ml 3>双蒸水87ml 还原液：对苯二酚1g ，无水亚硫酸钠2.5g ，双蒸水100ml 7、0.1mol/l 醋酸盐缓冲溶液配制方法： 1>预先配制：

A 液：0.2mol/l 醋酸溶液（11.5ml 冰醋酸用蒸馏水稀释至1000ml ）

B 液：0.2mol/l 醋酸钠溶液（CH 3COONa16.4g 或CH 3COONa.3H 2O 27.2g 用蒸馏水稀释至1000ml ） 2>

二、染色流程：

1、固定组织：常用甲醛溶液作为固定液。

4%多聚甲醛配制方法：1> A 液配制：磷酸二氢钠溶液 31.2gNaH2PO4·2H2O 溶于蒸馏水并稀释至1000ml 2> B 液配制：磷酸氢二钠溶液 71.6gNa2HPO4·12H2O 溶于蒸馏水并稀释至1000ml

3> PB 液配制：A 液95ml+B 液405ml+500ml 蒸馏水=1000ml 配置好后测定PH 值用NaOH 调整至7.4 4> 4%多聚甲醛溶液 40g 多聚甲醛+PB 溶液定容至1000ml 2、切块修整：用解剖刀片将组织切成小块。 3、组织脱水透明及浸蜡：

溶蜡后使其冷却到表面出现薄膜为限，然后将其置于温箱中（蜡的熔点约550C 左右，但为使操作过程中不使蜡凝固过快可将温

用蜡三进行包埋，包埋前将包埋框用二甲苯将框内擦干净，在包埋框上做好标记数字。组织块必须放于格子中央，且切面与格

子地面平行。冷却后放入冰箱中冷冻5分钟左右便于取出蜡块。

5、切片、展片、贴片 678、切片放入预热至600C 的银液内3-5小时

9、取出切片，用滤纸抹去多余银液（或蒸馏水急洗一次）

10、入450C 还原液内1小时（一分钟或更长，根据情况而定，镜检）

11、入5%Na 2S 2O 3 1分钟（镜检）（注：本实验中为2%Na 2S 2O 3.

5H 2O 30秒） 12、放入蒸馏水槽中晃动，冲去Na 2S 2O 3 树胶1-3滴左右。右手拿住镊子，左手大拇指与食指卡住片子另一端，从右往左推。防止产生气泡。