生化仪的临床应用

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离心式
【结构】 加样：样品盘、吸样臂、试剂臂和电子控制部分 分析单元：离心转盘、温控器、光学系统、信息 处理与显示系统。 【工作原理】 先将样品和试剂分别置于转盘相应的凹槽内， 在离心力的作用下，样品和试剂被甩到转盘外的 比色槽内并相互混合繁盛反应，一定时间后进行 比色。 【仪器特点】 反应器就是转盘，整个分析过程的每一步骤 几乎同时完成，分析速度快，适合同一项目的批 量检测。
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波长
吸收曲线的低谷是空白波长，吸光度大而且 平的波长为分析波长；若使用光栅或单色光 器，光路采用后分光，波长更准确。 单波长：测定体系中含有一种组分或待测组 分的吸收波长与其他共存的物质的吸收波长 无重叠，有几个吸收峰的物质一般选择最大 吸收峰或是吸收峰处吸光度随波长变化较小 的的波长 双波长：干扰物的光吸收会出现光散射或是 非特异性光吸收 主波长：待测物特定的吸收波长 副波长：干扰物在主波长的吸收与副波长的 吸光率越接近越好如：己糖激酶法检测GLU， 为了消除Hb的干扰选择340/380nm
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内容
了解生化分析仪的分类 常用的分析方法 生化仪的参数设置 生化仪的校准 质量控制 使用常见问题 维护与保养
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生化分析仪的分类
按反映装置的结构 连续流动式（空气分段系统与非分段系统 离心式 分离式：目前最广泛的应用于临床 干化学法干片式 按自动化程度分全自动与半自动 按检测项目可分单通道与多通道 按仪器的复杂程度可分小型、中型、大型
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分析仪的校准
仪器校准：波长、温度、加样量、空 白吸光度（一般由厂家来完成） 项目校准：是常规工作进行的，也就 是我们所说的调标。 基质效应：样本校准物处于相同的条 件下进行 校准物的选择：应该溯源的国际或国 家的参考方法 附：不允许用定值质控品代替校准物质。
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分析仪的校准
【校准频率】 系统校准：若是封闭系统则校准周期 可以长一些，若是开放系统校准频率 应该高一点。 更换试剂或是批号不同时应该校准后 再用。 室内质量控制出现异常波动或 偏移好 时，此项目应该重新校正。 仪器更换部件或是大修过以后所有项 目均应该矫正一次。 19
公有化：一台仪器检测多个项目共有一个探 针、样品针、搅拌器和管道 随着生化仪处理能力的提高一台仪器上所做 的项目与方法学也很多 使用不当：操作人员使用生化仪或进行的保 养时方法不当，导致仪器及管道污染。 仪器老化：使用时间过长，部件老化冲洗站 功能下降 清洗液使用不当 检测项目排列不合理：由于试剂组成成分会 影响千货检测项目的结果。
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性能评价
【自动化程度：根据实验室的规模来制 定 【分析效率】根据工作量及样本的多少 来确定选择仪器的反应速度。 【应用范围】根据检测项目来选择 【准确度与精密度】越高越好 【试剂的开放程度】开放程度越高灵活 性越大，但是系统的稳定性稍差
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常用的分析方法
终点法 连续监测法 比浊法 均相酶免疫分析
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标准质控图
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失控的处理与分析
通过原始数据初步估计失控的原因 对具体的检测过程做回顾分析 通过有选择性的复查进一步判断失控 的原因并找出处理的办法
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全自动生化分析仪使用过程中 常见的问题
携带和交叉污染 多数一起存在的问题 常规工作中容易被忽视 引起不确定性的因素比较多
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携带和交叉污染产生的原因
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质控品的检测频率
在每一个项目的分析批次内必须做一 次质控检测 仪器或试剂厂家应该对质控项目的检 测频率作出相应的指导 用户可以根据不同的情况增加或减少 频率
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质量控制规则
通过检查质控数据作出有效的判断 指控界限的使用一般是均值与不同倍 数的标准差。 如：2倍内认可，1-3倍超控.3倍外失控
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保养
日、周、月、季、年。
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硬件设施
纯水机 Ups电源 外接电脑 废液排放管道 实验室环境：温度、湿度最重要，要 有每天的工作记录
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日维护
室内环境因素要符合仪器要求 正常开关机 日常清洗仪器及管道 检测试剂量 表面清理 （以上均应该每天做到）
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周维护
加强冲洗：应用酸液或碱液或是交替 对仪器管道进行冲洗 光路校正及空白检测：清洗光路，对 比色杯进行空白检测 样本针和试剂针的手工清洗：除去表 面的残留蛋白物质。
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携带污染的检测与计算
●●●△△△●●●△△△●●●△△ △●●●△△△○○○ ●●●高值水平 △△△生理盐水 ○○○1:1000稀释的样本 共检测29次盐水的均值为A，稀释后样本 为B 交叉污染率=（A/B*1000）*100% 判断标准，∠0.3%为正常
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携带和污染常见的组合I
ALT(IFCC)\AST(IFCC)试剂中含有高 活力的LDH成分，对LDH的检测可能 带来干扰 ALP (IFCC)\ CK(NAC)CKMB(NAC)CO2(PEPC)AMY(EPS)等试 剂中含有Mg2+，对Mg2+的检测带来 影响
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质量控制
准备：人员培训、建立sop文件、做好 仪器的检定与校准。 选择质控品：一般选择两个水平的含 量，其中之一要有一个正常水平的， 另一个可以是临床水平或是超临床水 平的。 测定频率质控规则的选择 画质控图 失控结果的分析与处理
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质控品的选择与准备
与待检样品的性质相同或是相似 均匀恒定，最少使用半年 瓶间变异应该小于分析系统的变异 可采用商品的，也可使用实验室自制 其浓度与含量应该可以反映临床意义 的范围 不能作为校准物使用
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携带和污染常见的组合II
磷酸盐缓冲液可能对CHE CHO GLU UA HBDH带来污染 CK试剂中含有GLU的成分，若是下一测 试是glu就会有影响 胆固醇试剂中含胆酸盐，会对总胆汁 酸的检测带来影响 淀粉酶试剂含有钙离子会影响离子钙 的检测
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携带和污染常见的组合III
钒氧化法检测胆红素不能排在富有碱 性试剂测定的项目之后，如：ALB ALP Ca Mg Cr等 过氧化物酶反应系统的测定项目不要 排在一起，，因为基于Trinder反应的 高含量测定项目和低含量的测定项目 之间有交叉污染。
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连续流动式
【结构】 样品盘、比例表、混合器、透析器 【工作原理】 通过电脑来控制比例泵，将样本和实际注入 到连续的管道系统中，在一定温度下完成混合、 去干扰、保温、比色测定，经信号放大、运算处 理最后显示结果并打印 【仪器特点】 在检测过程中，样品与样品之间需要用空气 进行隔离，或是用空白试剂缓冲液/惰性液来隔离 • 空气分段系统：防止交叉污染 • 非空气分段系统试剂分段系统，每一次进样必须 在前一样品检测完毕才能开始，不能连续一次进 样。
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【结构】 样品处理系统：模仿人工操作，识别样品与试剂加 入到反应器中，，有试剂盘，样品架、加液器、和搅拌 器等 光学系统：光源、分光、比色、和信号拣流 温控系统：保持反应体系的温度恒定，有水浴、空气浴 和液相流动恒温系统 清洗：吸、注、擦：吸走废液-注入洗涤液或水、擦干杯 内壁 计算机处理系统：识别样品与试剂并完成样品与试剂的 加入与混合，最终处理计算数据并打印。 【工作原理】 以人工操作的工作模式，用机械臂代替人工手臂的 工作，按设定的程序完成各项操作 【特点】 样品与试剂有固有的试剂或样本反映盘，个项目在 6 各自的反应杯中独立进行。
分析仪的校准
【校准方法】 校准物的选择： 1.两点法校准：多数非酶类的检测使用两点校 准，其曲线应该是过原点的一条直线。 2.多点校准:应用一定梯度的校准液进行校准， 多数是免疫透射比浊检测使用，由于其线性 较差，所以选择多点校准。 3.因数校准：酶类检测应用较多，近年来推出 的酶类标准品也可以采用两点校准。
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月维护
比色杯样本针搅拌器冲洗站的维护 技术人员完成 季保养与年保养 工程师完成：主要涉及一些老化的部 件更换。
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温度与分析时间
【分析温度】 一般设定在体温（370C) 【分析时间】 1终点法：一般是选择开始的时间（即选择实际与样本 的混合瞬间，这样可以除去实际与样本的空白）结 束时间一般以反应达终点时的时间来计算 ΔA=A2-A1 A2：终末吸光度 A1：初始吸光度 2.动态分析时间：选定读数的起始点。也就是说延迟 时间按后开始，结束时间一定要在线性反应期内。 计算按下公式： ΔA/min=(A末-A始)/(T末-T始)
分立式
分离式模式图
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干片式
【仪器类型】 反射光度法：对试纸条上反应区通过反射光 光度法进行判别。 胶片涂层分析：把试剂片置于多层涂膜的反 应片上进行检测，可检测一个到几十个项目 项目 袋式分析仪：将时间与样本同时置于反应袋 中反映完毕将袋中物做成比色物质来检测 【特点】 液相反应在固相载体上进进行，化学、 光学、酶学、计算、于一身，操作简单检测 速度快，适于急诊或床前检测。
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解决方案
正确的安装操作规程维护和保养仪器， 并定期评估 熟知各种试剂的组成成分正确排列顺 序把容易受到干扰的排在最前面 规定解决方法：如变换试剂位、选择 特殊的清洗剂，则加洗涤次数。
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常用的排列顺序
ALT AST ALP GGT CHE TP ALB TBil DBil UA CR CK CK-MB HBDH LDH GLU TG CHO HDL apoA1 apoB AMY CO2 P Ca Mg2+ CL
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比浊法
检测物质对光的散射或透射强度， 测定的是浊度而非比色，可用于终点 分析，也可用于动态分析。 化学比浊：血清中K、Na离子的检测 免疫比浊：透射比浊/散射比浊，透射 比浊采用终点法，自动生化仪最常用， 一般用作特定蛋白的检测，如：载脂 蛋白、急时相蛋白、药物，而散射比 浊用的仪器是特制的。
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终点法
单点检测：使用一种或是两种试剂， 检测反应到达终点时的吸光度如-ALB、 TP等 两点法：又称固定时间法，使用双试 剂或単试剂，如苦味酸测肌酐 双波长的作用：消除背景干扰
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连续监测法
1.一步法：酶的检测底物就是所检测的 物质 Ea Ei 2.酶偶联反应：s1+s2——p1+p2—— p3+p4 Ea：辅酶 Ei：指示酶
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全自动生化仪参数
样品与试剂量的设置 检测方法 波长 温度 分析时间 校正方法
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样品与试剂的量与方法
【样品与试剂量】 以手工法按比例缩减 根据仪器的特性确定加样量范围，最 小反应体积等情况自行设计 考虑到检测的灵敏度与线性范围， 试剂与样本量需要的多少是衡量一台 仪器品质的重要指标 【检测方法】 根据所做的项目及仪器的方法来 设定终点法、动力学法（上升或下降）