透射电镜制样流程

透射电镜样品制备过程

组织取材（60s内），体积<1mm3，之后进行如下步骤

1）前固定：3%戊二醛2h或过夜。

2）漂洗：磷酸缓冲液，3次，10min/次。

3）后固定：1%锇酸固定液，2h。

4）漂洗：（同上）。

5）梯度脱水：50%丙酮，70%丙酮，80%丙酮，90%丙酮两次，各10min 。100%丙酮两次，各15min。

6）渗透：丙酮/包埋剂（1:1,1:2），室温各1h。丙酮/包埋剂1:3, 4度过夜。纯包埋剂，4度过夜。

7）包埋：纯包埋剂（37度,45度,60度各24h）。

取出包埋块，进行超薄切片，片厚70nm。分别采用醋酸双氧铀对切片进行染色30min，双蒸水漂洗3-5次，之后用柠檬酸铅

染色10min，双蒸水漂洗3-5次。待切片干燥后，透射电镜观

察。

切片机型号：Leica UC7 超薄切片机，速度1mm/s.

透射电镜型号：日立高新HT7700，电压80kv 电流10μa.