过氧化物酶染色

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骨髓细胞过氧化物酶染色标准操作程序

骨髓细胞过氧化物酶染色标准操作程序1. 检验目的急性白血病类型鉴别；诊断遗传性过氧化物酶缺乏症。

2. 检测原理（包括结果计算）pereira 建立的碘化钾MPO染色法，安全、实用，其原理未明。

一般认为髓过氧化物酶分解H2O2，产生新生态氧，后者氧化KI析出碘，碘与W-G结合，生成颗粒状沉淀定位于细胞浆中。

3. 性能特征无。

4. 标本要求4.1 病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史。

凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠妇女作骨髓穿刺时要慎重。

4.2 标本类型：骨髓。

4.3标本容器：洁净载玻片。

4.4 标本存放:4.4.1未检测标本的存放：放于细胞室未检测标本架上。

4.4.2已检测标本的存放：骨髓存片柜，保存10年以上。

4.5 标本运输:室温条件下运输。

4.6 标本拒收标准：参照《采集手册》。

5.仪器和试剂5.1试剂名称：瑞吉氏染色液、过氧化物酶染色液。

5.2试剂成份：5.2.1 氧化瑞吉氏染色液：Wright 染色剂粉 1 gGiemsa 染色剂粉 0.5 g甘油 10 ml无水甲醇 500 ml加30% H202 50～100 ul，储存于棕色瓶，备用。

5.2.2过氧化物酶染色液：100 μl碘化钾溶液和1 ml磷酸盐缓冲液混和。

（1）磷酸盐缓冲液：0.067 mol/ L 磷酸盐，pH 5.8（2）碘化钾溶液：碘化钾 500 mg，蒸镏水50 ml，储存于棕色瓶，备用。

5.3 试剂来源：自配试剂。

6. 环境和安全此试剂为体外诊断用，存在一定的刺激性和毒性；不要入口，避免和眼睛，皮肤或衣服接触，一旦接触，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。

7. 检测前准备在玻片头端贴上标签编号。

8. 校准/定标无。

9. 质量控制无。

10. 标本检测10.1在干燥的骨髓涂片或外周血涂片体尾处用红蜡笔划两条平行线，防止染液溢出；在两条平行线间滴加氧化瑞吉氏染色液，并布满，立即滴加等量过氧化物酶染色液，染色1-2分钟；在显微镜下观察到阳性对照，即用过氧化物酶染色液冲洗；晾干，镜检。

甲状腺过氧化物酶免疫染色在甲状腺细针抽吸细胞学检查中的诊断作用

ＣａｇｈｎｓｉｌＴｅＳｃｎｌａｙＭｅｉｌＵｎｖｒｉ，ｈｎｈｉ００３，ｈｎｈｎｚｅｇＨｏｐｔ，ｈｅｏｄＭｉｔｒｄｃｉｅｓｙＳａｇａ００Ｃｉａｉａｔ２ａＣｒｅｏｄｎｕｈｒｏｒｓｎｉｇａｔｏ：ｐ
ｃｌｅｓｌ
ＱｅＪＡＧＬｎ，ＨＮａｕＷｉＩＮｉｇＺＡＧＹｎ—ｍｅ，Ｉｈ —ｍｎ ’ ｅａｔｅｔｏｎｏｒｏｇ，，ｉＬＵＺｉｉ．ＤｐｒｎｆＥｄｃｉｌｙｍｎｏ
Ｚｈ —ｍｉＥｉ：ｗｌ６ｓｈ．ｏｉｎ，ｍａｌｑ０＠ｏｕｃｒｎ
ｍｕｏｓｉｉｇｗｒｊｄｅｙｗｔｏｓ（）ｅＭｉｏｍｅｏ：ａｐｅｅｅｃｎｉｅｅｅｉｏｅｎｔｎｅｅｕｇｄｂｏｍｅｄ：１Ｄｃｔｄｓｌｓｒｏｓｒｄｂｎｇｉｍｒａｎｔｈｃｈｍｗｄｎｆ
ｔａ０ｍｏｅｏｅｔｙｏｄｅＵｆｔｙｏｄｔｍｏｒｔｉｅｙＴＰｈｎ８％ｒｆｔｈｒｉｅｓｏｒｉｕｒｗｅｅｓａｎｄｂＯ．Ｃｏｓｑｅｔｈｈｎｅｕｎｌｙ，ｓｍｐｅｅｅａｌｓｗｒ
ｍｅｈｄ：ａｅｈｔｓｏｄｓｅｉｃｓａｎｎｆ％ｏｒｆｈｕｒｃｌ．ｒｇｒｌｓｆｔｉｉｇｉｔｎｔｏｃｓｓｔａｈｗｅｐｃｆｔｉｉｇｏｉ５ｒｍｏｅｏｅｔｍｏｅｌｔｓｅａｄｅｓｏａｎｎｅ－ｓｎｓｔｉｙ，ｗｅｅｓｏｅｏｉｖｒＴＯ．ｎｇｔｅｒｓｔｒＯＷａｏｓｄｒｄｃｎｉｔｎｉａｃｒｒｃｒｄａｐｓｉｅｆＰＡｅａｖｅｕｓｔｏｉｌｆＴＰｓｃｎｉｅｅｏｓｓｔｔｃｎｅ．ｏｅｗｈＲｅｕｔＰｔｒｉｅａｉｅＴＯｓｎｎＮＡＣｓｐｅｓｏｎｎ２ｕｆ４ｗｈｃｅｅｄａ－ｓｌｓａｔｎｗｔｎｇｔＰｔｉｇｉＦｅｈｖｉａｎａｌｓＷａｆｕｄｉ２ｏｔｏｉｈｗｒｇｍ２ｉｎｓｄｍａｉｎｎｕｒｂｉｔｌｇｃａｈｌｇ，ｈｌｏｉｖＰｓａｎｎａｔｒａｏｎｎ４ｆ７ｏｅｌｇａｔｔｍｏｙｈｓｏｏｉａｐｔｏｏｗｉｐｓｔｅＴＯｔｉｇｐｔｎＷｆｕｄｉ５ｏｌｙｅｉｉｅｓ４

细胞化学染色

颗粒什么关系
POX
如果原粒出现颗粒POX一定阳性吗？NO 如果幼淋出现颗粒POX一定阴性吗？YES
若POX阳性，肯定是髓系的。有颗粒+POX阴性做酯酶双染及免疫分型（存在一部分是POX阴性的白血病，MDS转白，CML急变，HAL ）无颗粒+POX阴性 +临床及形态淋系（1%做免疫分型，M0）
4.异常细胞MPO的变化 ①分化差的原始粒细胞及原始单核细胞MPO可为
阴性，如M2，并不是所有原始细胞均阳性。M5a，原始单核细胞常阴性。 ②MDS：原始细胞POX常阴性，发育异常的下阶段粒细胞POX可为阴性。 ③MDS转白，CML转白，HAL，原始粒细胞POX 可为阴性，但不能诊断为M0，因为原始粒细胞不像幼稚淋巴细胞，且可能为发育异常，并不是分化差。 ④反之，如果典型原始粒细胞POX阴性，应考虑到是否为MDS转化而来。
急性白血病类型鉴别：
急性粒细胞白血病：阳性率常≥3%，呈现弥散状，颗粒状或块状阳性；
急性单核细胞白血病：呈弱阳性（弥散状）或阴性；
急性淋巴细胞、巨核细胞性白血病：阴性。
急性白血病MPO反应强弱顺序： M3>M2>M6(粒)，M4，M1>M5>HAL
2.嗜天青颗粒（紫红色，非特异性颗粒，阿氏颗粒）：
干 4、复染：E液20min
积分计算
据兰色颗粒所占胞浆面积、颗粒大小、多少及染色强度来判断。阴性为胞浆内无兰色颗粒。正常值：正常人积分一般为40－100分
级别
+ ++ +++ ++++
兰色颗粒占颗粒大小胞浆面积（％）

细胞化学染色

细胞化学染色细胞化学染色2011年03月02日老三届极品居认真做事，低调做人。

记住该记住的，忘记该忘记的，改变能改变的，接受不能改变的。

一、概述细胞化学是组织学的一个分支，是在细胞形态学的基础上研究细胞的生物化学成分,及其定位、定量及代谢功能状态的学科。

在细胞形态学的基础上，运用化学反应的原理对血细胞内的各种生化组成及其代谢产物（酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。

细胞化学染色临床上主要用于：①辅助判断白血病的细胞类型。

白血病的诊断以形态学为基础，但有时仅采用瑞式染色是难以判断白血病细胞的类型的。

不同的细胞系列，其所含的化学物质成分、含量及分布各不相同，随着细胞的分化阶段及病理生理状态变化，这些物质的含量也会发生相应改变。

因此根据细胞化学染色结果的不同，可推断细胞的所属系列。

因此临床上细胞化学染色成为辅助诊断白血病必要的、有力的手段。

②其他血液系统疾病的诊断和鉴别诊断。

在病理情况下，血细胞的化学物质的成分及含量会发生改变，据此可以辅助疾病的鉴别诊断。

如中性粒细胞碱性磷酸酶染色、铁染色等。

③观察疾病的疗效和预后。

当病理状况纠正后，血细胞的化学物质的成分及含量会发生改变。

④发病机制的研究。

细胞化学染色的基本步骤为固定、显示及复染。

1、固定为了保持细胞结构及化学成分的不变，需要对细胞进行固定。

根据染色的成分不同，选择合适的固定液，使细胞内的蛋白质、酶类、糖等变成不溶性物质。

固定的方法有物理法和化学法，临床常用化学法固定。

物理法包括干燥和火焰固定，化学法包括甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定。

采用蒸气或液体固定。

（1）蒸气固定：甲醛是常用的固定剂，极易挥发、氧化，常用40％甲醛蒸气固定。

方法为在封闭的玻璃器皿中加入40％甲醛，将涂片血膜朝下，固定5～10分钟。

（2）液体固定：将涂片浸在甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等固定液中，也可将两种或两种以上固定液混合，如10％甲醛甲醇液，甲醛丙酮液等。

过氧化物酶(POX)染色

过氧化物酶(POX)染色[原理]粒细胞和单核细胞脑浆内含过氧化物酶，能借助受体(联苯胺)脱氢催化过氧化氢而释放新生氧。

受体被氧化成联苯胺蓝。

再与亚硝基铁氰化钠结合成稳定的蓝色颗粒而沉淀于脑浆内。

[试剂]1．联苯胺溶液：联苯胺0．38，加36％亚硝基铁氰化钠溶液1ml，再取95％乙醇加到100ml，水浴加热助溶。

贮于棕色瓶中，可保存数月。

工作时应小心溶液污染皮肤。

2.稀双氧水：临用前将30％双氧水用蒸馏水1：80稀释。

[操作](1)新鲜干燥血片或骨髓片，加联苯胺液5—8滴，使布满整张涂片，固定1—2分钟。

(2)加等量稀双氧水，用吸球吹吸，使两液混匀，作用4—8分钟。

(3)涂片用流水冲洗。

待干后再用瑞氏染液复染，复染时间约30分钟。

[结果观察]可报告阳性程度或阳性细胞％。

阴性：无蓝色颗粒和蓝色物质。

弱阳性：蓝色颗粒量少且细小，相当于(十)。

阳性：‘蓝色颗粒量多，粗细不一。

相当于(++)。

强阳性：细胞充满粗大紧密蓝色颗粒。

相当于(+++）。

[临床意义](1)粒系统细胞除早期原粒细胞阴性外，晚期原粒细胞及以下各阶段细胞均含有不同程度的蓝色颗粒。

嗜酸性粒细胞颗粒更粗大，呈深蓝色。

嗜碱性细胞为阴性。

(2)单核细胞中，除早期原始阶段外，皆呈弱阳性反应，其颗粒细小稀疏。

(3)某些网状细胞及吞噬细胞可呈不同程度的过氧化物酶阳性反应。

(4)所有淋巴细胞过氧化物酶染色皆为阴性。

(5)该化学染色是区别急性淋巴细胞性白血病和急性非淋巴细胞性白血病的关键化学染色。

FAB分型规定前者阳性率＜3％。

编写：谢平制定日期：2011.12.1[附注](1)联苯胺溶液若明显变色发绿，应重新配制。

(2)亚硝基铁氰化钠溶液也可在临用前取0．368溶解于1ml蒸馏水中，加热助溶后应用。

(3)双氧水浓度若过高，则有抑制酶作用。

双氧水浓度太高、制片太厚、涂片冲洗不净以及粒细胞破坏过多，可造成假阳性。

涂片中粒细胞若看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即示双氧水过浓。

过氧化物酶染色、糖原染色与嗜异性抗体、EB-VCA-IgM抗体联合检测用于异型淋巴细胞诊断和鉴别诊断的探索

中外医学研究
一
２１００年７月第８卷
。≯ －－－譬董。
第１３期
ＣＩＥＥＡＤＦＲＩＮＭＥＩＡＥＥＲＨＨＮＳＮＯＥＧＤＣＬＲＳＡＣ
曩｜一｜｜≯｜｜一。ｌｌ。。ｌｌｌｌ
ａｄｄｆｅｅｔｌｉＬ一ｃｅｇ，ＩＪａｎｉｒｎｉａｎｓｓｏｔｐｃｌｙａｄｌｈｃｔ．１ｈｎＸＥｉｎ—ｈｎＺＨＯＵＹｏｇ，ｕ—ｑｕＪＡＳＨ— 打，ＮＧＺａｉ，ＩｈｐＷＡｈｏ—ｑｎＣＮｉｇ，ＨＥ
【ｅｏｄ】Ａｙｉｌｙｐｏｙ；Ｍｒｈｌ＇ＰＸ：ＳｉｉｒｌｏｅＫｙｗｒｓｔｃｍｈｃｔｐａｌｅｏｐｏ￣；Ｏｏｔｎｇｆｙｇｎａｎｏｇｃ
如果缺乏丰富的经验和形态学专业知识，型淋巴细胞很难异
Ｚｈｈａ９０１，ｉ．ｕｉ５１０Ｃｈｎａ
【ｂｔｃ】ＯｊｔｅｒｉｍｒｏｊｔｅｄｎｆａｏｍｔｄｆｍａｒａｄｔｉｍｎｋｒｎａｅｙｉｌｙｐｏｙＡｓａｔｒｂｃｖＰｏｄａｏｅｉｅｔｃｔｎｅｏｍｔｅｎｙａｏｏａｏｔｒａｐａｌｈｃｅｏｅｉｖｅｅｂｃｖｉｉｉｈｏｉｕａｐｉｙｐｔｎｔｃｍｔｔ
Ｂ，ＵＮｉｎ— ａ，ＥＧ一ｕ，Ｉｕ．ａｏａｏｅｔｏＨＡＧＪａｙｏＤＮｈａＬａＬｂｒｔｒＣｎｅｏｔｎｌｎｈｌＣｒＨｓｉｌＺｕａｉｕｎｄｎｒｉｅＨｙｒｆＭａｒａｄＣｉａｅｏｔｈｈｉｔｉＧａｇｏｇＰｏｎ．ｅａｄｐａｏｆＣｙｎｖｃ

过氧化物酶染色原理及临床意义

过氧化物酶染色原理及临床意义全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：过氧化物酶染色是一种常用的组织和细胞染色技术，它是通过过氧化物酶与底物发生氧化反应，产生可见的颜色来标记目标物质或结构。

过氧化物酶是一种氧化还原酶，它可以将氢过氧化物等底物氧化成氧和水，同时还可以将某些受体氧化成可见色素。

过氧化物酶染色的原理是利用此氧化还原反应来实现对目标物质的标记和检测。

过氧化物酶染色在生物学研究和临床诊断中有着广泛的应用。

它可以被用来检测细胞和组织中的特定蛋白质、酶和其他生物分子，从而帮助科研人员和医生了解生物学过程或诊断疾病。

过氧化物酶染色的原理是利用过氧化物酶与底物的氧化还原反应。

过氧化物酶通过其活性位点与底物结合，使得底物的特定氧原子与酶分子中的氧原子结合形成活性羟基，从而将底物氧化成产生可见颜色的产物。

这种氧化还原反应通常是可逆的，并受到PH、温度和底物的影响。

在过氧化物酶染色的过程中，通常会加入底物和显色剂。

底物是过氧化物酶的底物，可以被其氧化生成可见颜色的产物。

而显色剂则是一种可以与底物产生可见颜色反应的化学剂，可以帮助直观地观察染色结果。

过氧化物酶染色在临床诊断中有着重要的应用价值。

它可以用来检测癌细胞、病毒感染、细胞凋亡等重要生物过程，从而帮助医生诊断疾病、监测治疗效果和预测患者的预后。

在肿瘤病理学中，过氧化物酶染色可以用来检测肿瘤标志物，帮助诊断和鉴别肿瘤的类型、分级和预后。

过氧化物酶染色还可以用来研究细胞生物学和分子生物学中的基本问题。

在免疫组织化学中，过氧化物酶染色可以用来检测感兴趣的蛋白质在细胞和组织中的表达情况；在蛋白质定位研究中，可以用来观察蛋白质在细胞内的位置和功能；在细胞信号转导研究中，可以用来鉴别不同信号通路的活性和功能。

过氧化物酶染色是一种简单、快速、敏感和可靠的染色技术，它在生物学研究和临床诊断中都具有广泛的应用价值。

通过此技术，科研人员和医生可以更好地理解生物学过程、诊断和治疗疾病，为医学进步和健康服务做出贡献。

免疫辣根过氧化物酶染色法诊断猪弓形虫病的研究

维普资讯
第２７卷第１期
２００６年３月
扬州大学学报（农业与生命科学版）
ＪｒａｎｚｕＵｎｖｒｉ（ｒｃｌｕａｎｆｃｅｅＥｄｔｏ）ｏｕｎｌＹａｇｈｏｉｅｓｔＡｇｉｕｔｒｌａｄＬｉｅＳｉｎｃｉｉｎｏｆｙ
ｔｓｅｓｃｉｎｔｉｅｏｈＨＥａｄｉｉｕｅｔｏｓｓａｎｄｂｔｎｍｍｕｏｅｉｘｄｓｔｉｉｇｍｅｈｄｓｎｐｒｏｉａｅｓａｎｎｔｏ．ＴｈｘｐｌｓｏｄｉｗａｄｎｉｅｎｔｅｅＴｏｏａｍａｇ＇ｉｎｓｉｅｔｉｄｉｈｆ
ｓａｎｉｅｈｄｔｉｎｇｍｔｏ
ＷＡＮＧａ — ｏ，ＸＵ — ｉＸｉｏｂＹｉｍｎ
（ｏｌｆＶｔｄ，ａｇｈｕＵｎｖＹａｇｈｕ２０９ＣｉａＣｌｏｅＭｅＹｎｚｏｉ，ｎｚｏ．２５０，ｈｎ）
Ｖ０＿７Ｎ０１ｌ２．
Ｍａ．２０６ｒ０
免疫辣根过氧化物酶染色法诊断猪弓形虫病的研究
王小波，许益民
（州大学兽医学院。扬江苏扬州，２０９２５０）
摘
要：根据病猪临床表现以及病猪组织切片的常规苏木素一伊红（）ＨＥ染色和免疫辣根过氧化物酶染色对病猪作出初
ｔｅｐｇ．Ｔｏｏｌｓｏｄｉａｅｏｓｒｅｏｈｉｎｍｍｕｏｅｉｘｄｓｔｉｅｉｓｅｓｃｉｎ，ｈｗｅｅ，ｏｌｈｉｓｘｐａｍａｇｎｉｃｎｂｂｅｖｄｂｔｎＨＥａｄｉｎｐｒｏｉａｅｓａｎｄｔｓｕｅｍｅｒｆｃｔｓｉＣＲｉｎｃｌｔｄｉｔａｅｉ０ｅｌｔｍｌｉｅｔｄｔｓｅｓｍｐｅ（ｕｇａｄｌｍｐｏｅ）ｆｏａｍｃｉｏｕａｅｎｒｐｒｔｎａｌｗｉｌｇｓｅｉｕａｌ１ｎｎｙｈｎｄｓｒｍｅｙｈｄｓ

过氧化物酶染色法

项目名称：碱性磷酸酶染色法检验标本：外周血涂片收费标准： 50元检验方法：细胞化学染色原理：在PH9.5时，底物被白细胞的酶水解，释出磷酸根和芳香萘胺，后者与偶氮盐偶合，形成有色沉淀。

试剂：1.固定液（保存于4℃）冰箱2. 0.05缓冲液（PH9.4~9.6）保存于4℃冰箱3.底物4.二甲基甲酰胺5.固紫B操作步骤：1.血片或髓片放置4C固定液中30秒，流水冲洗，空气晾干2.工作液：（1）用二甲基甲酰胺溶解底物后，倒入缓冲液中（2）再加入固紫B混匀3.把固定后的玻璃片放入工作液中，置37C水温箱45分钟4.流水冲洗5.苏木精复染6.流水洗，晾干7.直接油镜观片结果：酶活动处呈亮红颗粒正常参考值：积分10～100分/100个中性分叶核细胞意义：NAP活性增高见于细菌性感染、类白反应、再障、某些肿瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病急性变等。

NAP活性减低见于慢性粒细胞白血病、急性粒细胞白血病、绿色瘤、红白血病、PNH、病毒感染等。

注意事项：1.外周血涂片标本需新鲜，收到标本后需立即用专用固定液固定。

2.试剂需防在4℃冰箱内，临用前拿出，试剂打开后需立即应用，最长不得超过30min。

项目名称：过氧化物酶染色法检验标本：骨髓涂片收费标准：50元检验方法：细胞化学染色检验原理：过氧化物酶在细胞内的颗粒从H2O2中释放出氧，氧化联苯胺，引起在过氧化酶活性处，沉积棕黑色的化合物。

试剂：1.0.3%联苯胺酒精溶液2.H2O2溶液（3%H2O2+蒸馏水5ml）操作步骤：1.骨髓涂片加0.3%联苯胺酒精溶液10-15滴2.一分钟后，加H2O2溶液10-15滴3.五分钟后，流水冲洗4.再用瑞氏染液复染5.水洗，晒干结果：酶活力处呈棕黑色。

意义：急性白血病中可借过氧化物酶染色区蓓别急淋与急非淋。

急淋POX呈阴性反应，FAB分型规定阳性率＜3%。

急非淋呈阳性反应，阳性率≥3%。

注意事项：1.骨髓涂片标本需新鲜，收到标本后需立即染色。

血液学血细胞化学染色

嗜酸粒细胞：阳性最强
嗜碱粒细胞：（－）
2.单核细胞系统阴性或弱阳性 3.淋巴细胞系统
红细胞系统巨核细胞系统阴性浆细胞组织细胞
四、临床意义
鉴别急性白血病的类型首选（1）急淋和急性髓细胞系的鉴别：
急淋：（－），阳性率<3%；急单：弱阳性；急粒：阳性（ + ～ + + + ）。
A
B图：急性单核细胞白血病 α-NAE氟化钠抑制染色
原始、幼稚单核细胞阳性反应被氟化钠抑制（与A图为同一标本）
B
【临床评价】
主要用于鉴别急性白血病类型
急单急粒急性早幼粒急粒单急淋
α-NAE +++或 -或 ++ ++++ 弱+
阳性 -
NaF 被抑制不被不被抑制部分被抑制
抑制
部分未被抑制
➢ 原始单核细胞分化差阴性分化好阳性
正常血细胞的染色反应
与POX染色基本一致
临床意义
与POX染色相似
二、SBB与POX区别：
1. POX特异性高于SBB，而敏感性低于SBB； 2. POX染色要求涂片新鲜，保持酶活性， SBB染色可用陈旧涂片。
四、酯酶染色
一、分类
1. 特异性酯酶（specific esterase）主要存在于粒细胞，又称“粒细胞酯酶” －氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）。
2. 临床意义
辅助鉴别急性白血病细胞类型急单：单核细胞阳性，能被NaF抑制。急粒：粒细胞弱阳性，不被NaF抑制。
M3：强阳性，不能被NaF抑制。 M4：部分阳性细胞能被NaF抑制，

过氧化物酶染色的原理

过氧化物酶染色的原理
过氧化物酶染色原理是利用过氧化物酶作为反应媒介，在生物样本中特异性地检测目标分子。

过氧化物酶是一种催化剂，能够将底物氧化成有色产物。

具体实验步骤为：首先将待测样本固定在载玻片上，然后加入特异性的一抗，使其与目标分子结合。

接着，加入经过改性的二抗，该二抗上结合有过氧化物酶。

此时，如果目标分子存在于样本中，二抗就会与一抗结合，并把过氧化物酶带到固定的位置。

接下来，加入过氧化物酶底物，其比如碘化四氢-3,3,5,5-四甲基-2,2-联吡啶（DAB），底物会被过氧化物酶催化氧化，形成棕色的有色产物。

该产物会沉积在固定的位置，显示出目标分子所在的位置。

最后，在显微镜下观察载玻片，可以根据有色棕色沉积物的形成位置确定目标分子的存在与否。

过氧化物酶染色技术广泛应用于免疫组化、组织学研究和病理诊断领域。

过氧化物酶染色

【目的】指导过氧化物酶染色检查。

【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。

【用途】急性白血病的鉴别诊断，急非淋（粒细胞，单核细胞）阳性，急淋呈阴性反应。

【染色原理】当存在过氧化物酶之活性时，可以将基质（过氧化氢）分解，而产生新生态的氧，此新生态氧进而使无色联苯胺氧化为蓝色的联苯胺。

联苯胺是一种不稳定的中间产物，它可以进一步氧化变成棕色的化合物。

【分布】1．粒细胞系：原粒细胞为阴性，白血病时副原粒细胞可呈阳性反应。

中性粒细胞：自早幼粒细胞起，随细胞成熟而阳性强度也递增。

其阳性颗粒为圆形，规则，直径与嗜苏丹黑颗粒相仿，而比瑞氏染色的特殊颗粒为大。

嗜酸粒细胞：为阳性反应，其颗粒比中性粒细胞的大，着色也深。

嗜碱粒细胞：为阴性反应，但在慢粒白血病时可出现阳性反应。

在粒细胞系统中，过氧化物酶颗粒的出现和逐渐增多，与特殊颗粒的出现和增多有平行关系。

2.单核细胞系：呈弱阳性反应，颗粒数少，细小，着色较浅。

在白血病时可见强阳性。

3．组织细胞（网状细胞）：一般呈阴性反应，部分细胞有不同强度的阳性反应。

4. 其他细胞：均为阴性反应。

【试剂配制】一、3%联苯胺酒精溶液配制: 联苯胺0.3g+碱性品红0.1g+95%乙醇99ml全溶后加入亚硝基铁氰化钠饱和水溶液（36%）1。

此液可保存1-2年。

一、过氧化氢溶液配制: 3%过氧化氢1滴+蒸馏水5ml。

每次用需新鲜配制。

【染色步骤】1. 将新鲜之血或骨髓涂片，滴加0.3%联苯胺酒精溶液4—8滴，盖满涂膜约1分钟。

2.1分钟后，立即加入过氧化氢等量与上液混匀。

3.4—5分钟后，一出现蓝色，立即冲洗，否则颗粒变黑。

4.立即再用瑞氏染色法复染，时间应稍长【结果判断】阳性反应为蓝色或蓝棕色颗粒，定位于胞浆中。

【临床意义】1.急性粒细胞白血病呈阳性反应。

2.单核细胞白血病呈弱阳性反应，但有些病例可呈强阳性反应，故不能与急性粒细胞白血病鉴别，尚需作其他检验。

实验十二常用血细胞化学染色

实验十二常用血细胞化学染色Cytochemistry stain for blood cells一、过氧化物酶染色染色原理粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有髓过氧化物酶(myeloperoxidase, POX或MPO),能将底物H202分解，产生新生态氧，新生态氧可氧化四甲基联苯胶成联苯胺蓝。

联苯胺蓝自我脱氢氧化形成棕色的四甲基苯酿二胺，后者与亚硝基铁氧化纳结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色颗粒，沉淀于细胞质内酶所在的部位。

试剂器材1．1%TMB(3,5,31,5f一四甲基联苯胶)乙醇溶液:0.1g TMB溶于100mL88%乙醇溶液中，置棕色瓶内，冰箱保存。

2．亚硝基铁氧化锅饱和溶液在少量蒸馏水中加入亚硝基铁氰晶体，至不再溶解为止，置棕色瓶内，冰箱保存。

3．1%过氧化氢溶液取30%H2021mL加入蒸馆水29mL。

4．稀过氧化氢溶液1%H2021滴，加10 mL蒸馏水稀释(新鲜配制)。

5．瑞氏(Wright)染色液。

6．新鲜涂片(骨髓或血片)、染色架、洗耳球、光学显微镜等。

操作步骤1．取0.1%TMB乙醇溶液1mL，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μL，溶液呈淡棕黄色，染色液应临用前配制。

2．在新鲜干燥的血片或骨髓涂片上，加0.1%TMB一亚硝基铁氰化钠饱和溶液0.5mL，放置lmin，再加稀H202溶液0.7mL，吹匀，染色6min。

3．自来水冲洗，待干，用瑞氏染液复染15~20 min。

4．自来水冲洗，待干，用油镜镜检。

注意事顶1．血涂片或骨髓涂片应新鲜制作，涂片应厚薄适宜。

2．TMB配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90%~95%乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而导致染色效果差。

3．H202需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。

涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示H202过浓。

若H202加于血片上不产生气泡，则示无效。

4．染色液pH应为5.5。

实验细胞化学染色POX

M7 PAS(+)
（3）巨核细胞和Sternberg细胞鉴别
巨核细胞PAS强阳性，Sternberg细胞为阴性或弱阳性。
（4）戈谢氏细胞强阳性，尼曼-皮克细胞阴性或弱阳性。
（5）淋巴肉瘤、霍奇金病等，淋巴细胞的糖原积分增高；一般的病毒感染，糖原积分在正常范围内。
四、中性粒细胞碱性磷酸酶染色
AML-M1
M1 - POX(+)
×Байду номын сангаас
二、苏丹黑B染色
【原理】苏丹黑B (sudan black B , SB )是一种能溶解于脂肪中的色素染料，可使细胞内的中性脂肪、磷脂和类固醇着色，即使细胞内微细结构的脂类物质也能显示出来。
▪ 【试剂】 ▪ 1. 10%甲醛液。 ▪ 2. 苏丹黑B乙醇溶液
M2型反应最强，MI和M5型反应较弱， ▪ 故有助于区别M3和M5型。 ▪ 急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反应，故
为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重要指标。
注意事项
1. 涂片应新鲜制作、厚薄适宜。 2. TMB 配制在85％～88％的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90
％～95％乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而使显色反应减弱或消失。 3. 过氧化氢溶液需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示过氧化氢过浓。若过氧化氢加于血片上不产生气泡，则示无效。 4. 染色液适宜pH值应为5.5，若pH值 <5.0会出现假阳性结果。 5. 试剂应置于低温暗处，防止光线照射失效。 6. 染色时加稀过氧化氢溶液之后必须与染色液充分混匀，否则同一片子上细胞染色情况不一致。
（3）其他细胞淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细胞、巨核细胞均呈阴性反应。（4）血小板过氧化物酶主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜上，可作为原巨核细胞的一种标志物，有助于 FAB M7的识别。

过氧化物酶染色实验

注意事项：
1. 标本应及时固定； 2. 标本未染色前切勿沾有甲醇和氧化剂等； 3.每次应设阴、阳性对照。
临床意义：
主要用于鉴别急性白血病的类型 1. 急粒：原粒细胞呈阳性反应(+) ~ (+++) 2. 急淋：呈阴性反应(–) 3. 急单：呈弱阳性，急粒单中的原粒、
早幼粒呈强阳性，幼单呈弱阳性。
不同而产生棕黑色颗粒沉着于细胞内。
试剂：
1. Ⅰ液：乙醇、二氨基联苯胺、亚硝基铁氰化钠、稳定剂等
2. Ⅱ液：H2O2
操作方法：
1. 新鲜涂片滴加Ⅰ液数滴，室温放置1分钟，勿冲洗即滴加Ⅱ液数滴，混合后室温放置5分钟，流水冲洗；
2. 瑞氏染色复染20分钟，流水冲洗后油镜观察结果。
结果判断：
过氧化物酶染色实验要求： 1. 掌握过氧化物酶染色的原理、操作、注意
事项、结果判断； 2. 熟悉正常细胞、病理细胞的染色反应及临
床意义。
过氧化物酶染色 (peroxidase pox)
原理：
血细胞内的过氧化物酶能将底物H2O2 氧化释出新生态氧，后者氧化联苯胺，使之
变成联苯胺蓝，后者显色情况随pox的活力
1. 阴性：胞质内无沉淀物（无色）； 2. 阳性：胞质内出现棕黄或蓝黑色沉淀物； 3. 强阳性
1. 粒系：原粒(–) →早幼粒(+) →成熟中性粒 (阳性渐强) ；嗜酸粒(+++) ，其颗粒粗大，有折光性；嗜碱粒(–)；
2. 单核系：原单(–)；幼单、成熟单(±)； 3. 其他：淋巴系、红系、巨核C系、浆C系均(–)。