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微⽣物绪论1微⽣物的概念、包含类群。

微⽣物是⼀切⾁眼看不见或看不清楚的微⼩⽣物的总称。

1）原核类的细菌、放线菌、蓝细菌（三菌）和⽀原体、⽴克次⽒体、⾐原体（三体）；2）真核类的真菌、原⽣动物和显微藻类；3）⾮细胞类的病毒和亚病毒。

2微⽣物的五⼤共性体积⼩、⾯积⼤（基础）吸收多、转化快。

⽣长旺、繁殖快。

适应强、易变异。

分布⼴、种类多3.微⽣物学发展各时期代表⼈物及贡献。

1、史前期（朦胧阶段）2、初创期（形态描述阶段）荷兰科学家—微⽣物学先驱者列⽂虎克，⾃制显微镜观察到细菌。

3、奠基期（⽣理⽔平研究阶段）1861年-1897年。

代表⼈物主要是：微⽣物学的奠基⼈——法国的巴斯德：①否定了微⽣物的⾃然发⽣学说；②开启了免疫学研究；③创⽴了巴⽒消毒法。

细菌学的奠基⼈——德国的科赫（Koch）：①建⽴了研究细菌的⼀整套⽅法；②分离到多种传染病的病原菌；③1884年提出确定病原微⽣物的科赫法则。

4、发展期（⽣化⽔平研究阶段）5、成熟期（分⼦⽣物学⽔平）1953年-⾄今J.Watson和F.Crick在英国的《⾃然》杂志上发表关于DNA结构的双螺旋模型，是微⽣物学发展史上成熟期到来的标志。

第⼀章思考题1．什么是⾰兰⽒染⾊法？主要步骤是什么？其中哪⼀步是关键？1.涂⽚固定2.初染—结晶紫染液第⼀次染（30S-1min）3.媒染—碘-碘化钾溶液浸湿30S-1min4. 脱⾊—95%⼄醇溶液进⾏颜⾊洗脱10-30S5.复染—藩红第⼆次染⾊1-2min细菌呈现第⼀次染⾊的效果紫⾊，⾰兰⽒阳性菌（紫阳G＋）；呈现第⼆次染⾊的效果红⾊；称⾰兰⽒阴性菌（红阴G -）2．细菌的⼀般构造和特殊构造是什么，扼要说明各部分的⽣理功能。

基本结构：细菌⽣活必须、缺⼀不可的结构。

细胞壁、细胞膜、细胞质、拟核特殊结构：不是每种细菌都具备的结构，并⾮细菌⽣活所必须；在⼀定阶段出现。

（糖被、鞭⽑、菌⽑、芽孢和胞囊）1）细胞壁（细菌最外层坚韧且有弹性的膜状结构）功能①固定细胞外形；②保护细胞免受外⼒的损伤；③阻拦⼤分⼦物质进⼊细胞；④使细胞具有致病性及对噬菌体的敏感性。

食品微生物学检测技术思考题

⾷品微⽣物学检测技术思考题⾷品微⽣物学检测技术思考题1、试述微⽣物与⾷品安全的关系。

微⽣物引起⾷品腐败变质；微⽣物引起⾷物中毒；微⽣物制造⾷品、促进粮⾷⽣产。

2、对⾷品进⾏微⽣物检验有何意义？检验结果是衡量⾷品卫⽣质量的重要指标,也是判定被检⾷品能否⾷⽤的科学依据；可以有效地防⽌或减少⾷物中毒和⼈畜共患病的发⽣；保证产品的质量,避免不必要的损失。

3、⾷品微⽣物检验的范围包括哪些？⽣产环境的检验；原辅料的检验；⾷品加⼯、储藏、销售诸环节的检验；⾷品的检验。

4、⾷品卫⽣标准中的微⽣物指标有哪些？根据⾷品卫⽣要求,⾷品中需要检测的微⽣物种类、数量及其代谢产物的种类和数量称为⾷品卫⽣微⽣物学指标，是评判⾷品卫⽣质量的重要依据。

微⽣物学指标种类：菌落总数；⼤肠菌群数；致病菌；霉菌及其毒素；其他指标。

我国卫⽣部颁布的⾷品微⽣物指标最重要的是菌落总数、⼤肠菌群数和致病菌三项。

5、描述⾷品微⽣物检验的⼀般程序。

6、列表⽐较低倍镜、⾼倍镜及油镜在数值孔径、⼯作距离及镜头⼤⼩等⽅⾯的差别。

数值孔径（NA）⼯作距离镜头⼤⼩0.25 7-8mm 较⼤低倍镜0.65 0.4-0.5mm 中等⾼倍镜1.25 0.18-0.2mm 较⼩油镜7、要使视野明亮，除光源外，还可采取哪些措施？加⼤虹彩光圈,提升聚光程度.调节光圈⼤⼩,提升聚光器8、与普通光学显微镜⽐较暗视野显微镜和相差显微镜在结构和功能上有何特点？结构：暗视野显微镜聚光器下增加了环状光栅，观察⽬标是亮的，背影为暗的，提⾼观察物体的对⽐度；相差显微镜聚光器下增加了环状光阑和相位板，把透过标本的可见光的相位差（光程差）变成振幅差。

功能：暗视野显微镜可以观察活细胞的形态和运动性；相差显微镜可以观察活细胞的形态和运动性，以及活细胞内部结构相差显微镜：通过环形光阑和相位板把透过标本的可见光的相位差（光程差）变成振幅差，从⽽提⾼了各种结构间的对⽐度，使各种结构变得清晰可见。

9、简述监测⾼压蒸汽灭菌效果的⽅法及其特点。

微生物实验报告2012

在芽孢观察实验中，你认为哪些步骤是重要的？还可以需要做哪些改进吗？
2、根据阅读材料，请比较几种芽孢染色制片方法的优缺点？
三、自评表
实验内容
荚膜的染色与观察
实验操作
自评分
（5 分）
1、取菌时，是否挑取培养基表面
粘稠的菌落
2、菌落固定是否用火烧
理由
3、染色后菌落是否刮成一薄层
芽孢的染色和观察
4、取菌时，是否近火无菌操作）
2．与传统的生理生化应结合，简述分子生物学对于微生物多样性研究的优缺点？
三、自评表
实验内容

实验操作
评分理由
（满分５分）
1、是否严格按照步
骤操作
2、提取的基因组大基因组提取小是否大于10Kb
凝胶电泳
4、是否可以能独立进行制胶、点样、电泳的操作
实验十细菌 16S rRNA 基因扩增及分类鉴定一结果记录
３、环境样品中的微生物检测
环境来源
菌落形态
细菌形态
革兰氏染色结果
二、思考题 1、在使用光学显微镜时，当物镜由低倍转向油镜时，视野的亮度是增加还是
减弱？应如何调节？
2、结合阅读材料，分析影响革兰氏染色结果的因素？并设计最优的染色条件。
3、你从哪种环境中分离到了微生物，通过染色它是什么形态的？是革兰氏阳性菌还是革兰氏阴性菌？从这个实验你得到什么启示？
三、自评表
实验内容
实验操作
评分理由
（满分５分）
1、涂片厚度是否均匀革兰氏染色
2、脱色掌握的是否合适
1、取放显微镜是否规范
2、显微镜观察是否双眼睁开
3、从低倍镜到油镜的观察顺显微镜的使用
序

《微生物技术大实验》实验指导

《微⽣物技术⼤实验》实验指导《微⽣物技术⼤实验》实验指导（适⽤专业：11级本科⽣物技术微⽣物学⽅向）柯野编韶关学院英东⽣命科学学院2014年实验⼀、重组毕⾚酵母发酵表达蛋⽩酶及其初步鉴定⼀、实验⽬的1、学习重组毕⾚酵母培养基产物表达的⽅法。

2、学习发酵过程中菌体浓度的测定。

3、学习表达的重组蛋⽩酶的鉴定及其酶活的测定。

⼆、实验内容1、毕⾚酵母的菌体⽣长和诱导表达的培养基的制备。

2、重组毕⾚酵母⽣长菌体曲线的测定。

3、对重组毕⾚酵母⼯程菌株的诱导表达。

4、对重组毕⾚酵母⼯程菌株的诱导表达发酵液的酶活测定。

5、SDS-PAGE鉴定重组蛋⽩酶。

三、实验原理蛋⽩酶是催化蛋⽩质化合物中肽键⽔解为⼩肽或氨基酸的⼀类酶总称，⼴泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实及微⽣物中，并且对⽣物体的⽣理调控、催化各种代谢反应等⽅⾯具有重要的作⽤。

蛋⽩酶是⼀类重要的⼯业⽤酶，约占整个⼯业⽤酶量60%以上；⼴泛应⽤于⾷品加⼯、⽪⾰、医药和化⼯等⾏业。

由于蛋⽩酶具有⼴泛的⼯业、⾷品和医药等⽅⾯的应⽤价值，⽬前⼯业上需求量⼤。

植物中提取的蛋⽩酶主要是中性蛋⽩酶。

植物蛋⽩酶⽣产依赖于植物种植，这易受到季节、地理、⽓候等多因素的影响致使来源不稳定。

动物源性蛋⽩酶多从⽜、⽺和猪等的胰脏中提取⽽得。

动物来源蛋⽩酶⽣产成本较⾼，并受到世界动物保护协会和⼈员的强烈反对，⽬前主要⽤于医药⽅⾯。

因此，动植物源蛋⽩酶不能满⾜当代⼯业的需要。

微⽣物源蛋⽩酶⼏乎具有所有植物和动物来源蛋⽩酶的应⽤特性，成为了⽬前的蛋⽩酶的重要来源。

据统计，微⽣物蛋⽩酶占据了世界蛋⽩酶销售⼤约70%以上的份额。

⽬前商业化的蛋⽩酶主要来源于芽孢杆菌，中性蛋⽩酶来⾃植物⽊⽠，⽽来源于真菌的极少。

⽬前，国内外学者对来源于霉菌的蛋⽩酶的研究主要集中于通过优化固体(或者液体)发酵来提⾼蛋⽩酶的产量或通过分离纯化其产⽣的部分酶进⾏性质研究；⽽优化发酵条件很难⼤幅度提⾼蛋⽩酶产量，且发酵过程易受多种因素(如易污染或菌株⽣长状态)影响。

微生物实验思考题南京工业大学生物与制药工程学院

微⽣物实验思考题南京⼯业⼤学⽣物与制药⼯程学院实验⼀细菌的简单染⾊和细菌形态的观察⼀、实验原理简单染⾊采⽤⼀种染料对菌体进⾏染⾊，常⽤结晶紫、美蓝、碳酸复红等碱性染料。

染⾊后，菌体与背景形成鲜明对⽐，在显微镜下很容易被识别。

通过简单染⾊⽅法可以观察细菌的菌体形态特征和菌体的排列⽅式。

观察菌体形态简单染⾊（只⽤⼀种染料）观察菌体排列⽅式染⾊⽅法⾰兰⽒染⾊鉴别鉴别染⾊抗酸性染⾊（利⽤两种染料）芽孢染⾊观察特殊结构荚膜染⾊鞭⽑染⾊⼆、实验步骤：涂⽚⼲燥固定染⾊⽔洗⼲燥镜检三、思考题1、制备细菌染⾊标本时，应该注意哪些环节答；（1）涂⽚：开始所加⽆菌⽔液滴不要太⼤，否则不易⼲燥；取菌量要适宜且要涂抹均匀，避免过⼤造成堆积，⽽难以看清细胞个体形态同时也应避免取菌量太少⽽难以在显微镜视野中找到细胞。

（2）⽆菌操作取菌：⼀定要等接种换冷却后再取菌，以免⾼温使菌体变形；（3）⼲燥固定：否则细胞会破裂或变形；（4太长，否则菌体形态则会发⽣改变。

（5）⽔洗：倾去染⾊液后，⽤⽔沿着菌膜四周冲洗，注意勿使⽔流直接冲洗菌膜部位，⽔流不宜过急，过⼤，⾄流出⽔⽆⾊为⽌；2、为什么要求制⽚完全⼲燥才能⽤油镜观察答：使⽤油镜时，物镜与标本间的介质为⾹柏油（N=），不仅增加了透明度，⽽且会提⾼了分辨率。

若制⽚不完全⼲燥后，就⽤油镜观察，则N会减⼩，分辨率D也会变⼩。

⽽且还会造成油⽔两相不互溶，所以制⽚要求完全⼲燥后才能⽤油镜观察。

3、如果涂⽚未经加热固定，将会出现什么问题如果加热温度过⾼，时间太长，⼜会怎样呢答：加热固定的作⽤是使细胞质凝固，使细胞固定在载玻⽚上，这种加热处理还可以杀死⼤多数细菌⽽且不破坏细胞形态，⽽且还可增加细胞对染料亲和⼒。

（1）如果图涂⽚未经加热固定，则细胞⽆法固定在载玻⽚上，在染⾊⽔洗后会被⽔流冲⾛。

（2）如果加热温度过⾼，时间太长，则会使细菌形态发⽣变化甚⾄破裂。

4、为什么细菌染⾊常⽤碱性染料什么情况下⽤酸性染料答：（1）细菌染⾊常⽤碱性染料，原因在于微⽣物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中通常带负电荷，⽽碱性染料电离后染⾊部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着⾊。

微生物学复习思考题

微⽣物学复习思考题《微⽣物学》复习思考题第1章绪论1.名词解释：微⽣物，微⽣物学2.⽤具体事例说明⼈类与微⽣物的关系。

3.微⽣物包括哪些类群？它有哪些特点?4.为什么说巴斯德和柯赫是微⽣物学的奠基⼈?5.试根据微⽣物的特点，谈谈为什么说微⽣物既是⼈类的敌⼈，更是⼈类的朋友？6.简述21世纪微⽣物学发展的主要趋势。

第2章原核微⽣物1.名词解释：肽聚糖、溶菌酶、核区、异形胞2.根据⾰兰⽒阳性细菌与⾰兰⽒阴性细菌细胞壁通透性来说明⾰兰⽒染⾊的机制。

3.什么是芽孢？它在什么时候形成？试从其特殊的结构与成分说明芽孢的抗逆性。

渗透调节⽪层膨胀学说是如何解释芽孢耐热机制的？4.⽴克次⽒体有哪些与专性活细胞内寄⽣有关的特性？它们有什么特殊的⽣活⽅式？⾐原体与⽴克次⽒体都为专性活细胞内寄⽣，两者有何差别？5.螺旋体和螺旋菌有何不同？6.什么是缺壁细菌？试简述四类缺壁细菌的形成、特点和实践意义。

7.举例说明细菌的属名和种名。

8.试述古⽣菌和细菌的主要区别。

9.试根据细菌和古⽣菌细胞结构的特点，分析并举例说明为什么它们能在⾃然界中分布泛。

10.细菌（狭义）、放线菌、霉菌、酵母在繁殖⽅式上各有什么特点？第三章真核微⽣物1.名词解释：真菌、霉菌、酵母菌、真酵母、假酵母。

2.举例说明霉菌与酵母菌与⼈类的关系。

3.试列表说明真核微⽣物与原核微⽣物的主要区别。

4.试图⽰真核⽣物“9+2型”鞭⽑的横切⾯构造，并简述其运动机理。

5.细菌(狭义)、放线菌、酵母菌和霉菌的菌落有何不同？6.试⽐较细菌(狭义)、放线菌、酵母菌和霉菌细胞壁成分的异同，并讨论它们的原⽣质体的制备⽅法。

7.丝状真菌的营养菌丝和⽓⽣菌丝各有何特点？它们可以分化出哪些特殊结构？8.试述真菌的孢⼦类型和特点。

第4章病毒1. 名词解释：病毒粒⼦、烈性噬菌体、温和噬菌体、溶源性转变、前噬菌体、溶源性细菌、裂解量、类病毒、朊病毒。

2. 病毒区别于其他⽣物的特点是什么? 根据你的理解，病毒应如何定义?3. 试述病毒的主要化学组成及其功能。

微生物实验（生物实验三）

微⽣物实验（⽣物实验三）⽣物⼤实验三《微⽣物学》部分实验⽬录实验⼀、培养基的配制和灭菌实验⼆、微⽣物的分离、接种及培养法实验三、⽔中细菌总数和⼤肠菌群的检测实验四、微⽣物的快速鉴定和⾃动化分析技术实验五、抗微⽣物药物敏感性试验实验六、微⽣物的⽣理⽣化反应实验七、微⽣物菌种保藏实验⼋、沉淀反应实验九、细菌鞭⽑染⾊及其运动的观察实验⼗、细菌芽孢、荚膜的染⾊及观察实验⼀、培养基的配制和灭菌⼀、实验⽬的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的⼀般⽅法和步骤。

2.学习⼏种常⽤培养基的配制、分装和灭菌的操作⽅法。

3.进⼀步熟练掌握⼿提式⾼压蒸汽灭菌锅的使⽤⽅法。

⼆、实验器材1.药品及试剂：可溶性淀粉，葡萄糖，KNO3，K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O，FeSO4·7H2O，K2HPO4，1mol/L NaOH，琼脂，⽜⾁膏，蛋⽩胨，NaCl，马铃薯2.仪器及其它试管、三⾓瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、⾼压蒸汽灭菌锅、pH试纸(5.5-9.0)、棉花、⽜⽪纸、记号笔、⿇绳、纱布、⼲燥箱、培养⽫、涂布棒、吸管（1ml）、玻璃珠、PH试纸三、实验内容1.分组配制⾼⽒⼀号培养基300ml。

配⽅：可溶性淀粉20g NaCl 0.5g KNO3 1g K2HPO4·3H2O 0.5g MgSO4·7H2O 0.5g FeSO4·7H2O 0.01g 琼脂15-25g ⽔1000ml pH 7.4-7.62.配制⽜⾁膏蛋⽩胨培养基配⽅：⽜⾁膏3g 蛋⽩胨10g NaCl 5g ⽔1000ml PH 7.4-7.63.配制马丁⽒培养基配⽅：K2HPO4 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，蛋⽩胨5g，葡萄糖l0g，琼脂15～20g，⽔1000mL，⾃然pH。

配制⽅法配制20％马铃薯浸汁取去⽪马铃薯200g，切成⼩块，加⽔1000ml。

微生物学思考题

4
Байду номын сангаас
方案。
第十一章
复习题 1．简述微生物在生态系统中的作用。 2．简述碳在生物圈中的总体循环。 3．详述微生物参与的氮循环。 4．简述微生物种群之间的相互作用。 5．比较陆生、水生及大气生境中微生物在生态分布、存在状态、生理活性等方面的异同点。 6．简述嗜热微生物的生境及其生态分布。 7．简述嗜冷微生物的生境及其生态分布。 8．简述嗜酸微生物的生境及其生态分布。 9．简述嗜碱微生物的生境及其生态分布。 10．简述嗜盐微生物的生境及其生态分布。 11．举例说明微生物与动物的互惠共生关系。 12．以根际、菌根和根瘤说明微生物和植物根的互惠共生关系。 13．从病原微生物的传播途径说明人类预防传染病的基本方法。 14．我们可以从哪些方面说明微生物具有降解环境污染物的巨大潜力？ 15．微生物降解环境污染物是降解自然有机物能力的扩展和延伸，这样说的道理何在？ 16．在污染介质的微生物处理中我们主要利用微生物的哪些生理功能，这些利用是如何实现的？ 17．生物修复中的强化措施有哪些？ 18．为什么说生物强化可以在生物修复中发挥重要的作用？
第八章
复习题 1．从遗传学角度谈谈你对朊病毒的理解和看法。 2．在人类基因组计划的执行中，为什么要进行以微生物为主体的模式生物的全基因组序列测定？哪几种生物分别是已完成全基因组侧序的第一个独立生活的生物？第一个真核生物？第一个自养生活的生物？ 3．在细菌细胞中，均以环状形式存在的染色体 DNA 和质粒 DNA，在质粒提取过程中发生了什么变化？这种变化对质粒的检测和分离有什么利用价值？ 4．请说明下列两株不同遗传表型的大肠杆菌是否都是营养缺陷型？并作解释。E. coli(his 一）和 E. coli (lac 一）。 5．根据你所学的关于诱发突变的知识，你认为能否找到一种仅对某一基因具有特异性诱变作用的理化诱变剂？为什么？ 6．DNA 链上发生的损伤是否一定发生遗传表型的改变？为什么？ 7．根据突变的光复活修复作用原理，你认为在进行紫外线诱变处理时，应注意什么？为了使被诱变的细胞能均匀地受到紫外线照射，你将如何做？

食品微生物学实验报告册.pdf

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万里学院《食品微生物学实验》报告册
《食品微生物实验》报告册：
学号：
班级：
学期：
万里学院生物与环境学院
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I
万里学院《食品微生物学实验》报告册
目录
实验一显微镜的使用和常见微生物形态观察1
实验二细菌的革兰氏染色4
实验三微生物细胞的大小测定和计数6
实验四土壤微生物的分离9
实验五食品中菌落总数的测定14
实验六大肠菌群计数18
实验七酒酿中根霉的分离与甜酒酿的制作21
实验八微生物抗菌肽的制备及抑菌实验26
II
实验一显微镜的使用和常见微生物形态观察
第一部分：预习报告
1、显微镜使用的注意事项有哪些？
2、显微镜观察过程中，视野中污点的如何判断是在玻片上还是在目镜或物镜上？
第二部分：实验部分
(一)、简述实验原理
(二)、实验主要试剂和仪器设备
(三)、简述主要实验步骤
(四)、实验记录（观察的标本片绘图）
第三部分：课后思考题（研讨）
分析实验中发生的问题、现象，提出解决的方法。

微生物思考题

微⽣物思考题第⼀章1.设计⼀张表格，⽐较⼀下6个⼤类原核⽣物的主要特性。

2．试图⽰G+和G-细菌细胞壁的主要构造，并简要说明其异同。

3．试述染⾊法的机制并说明此法的重要性。

⾰兰⽒染⾊的机制为：过结晶紫液初染和碘液媒染后，形成不溶于⽔的结晶紫与碘的复合物。

G+细菌由于细胞壁较厚、肽聚糖⽹层次多和不含脂类，故经过⼄醇脱⾊后仍保持紫⾊；G-细菌则因其细胞壁薄、外膜层类脂含量⾼、肽聚糖层薄，遇到⼄醇脱⾊后细胞褪⾊；再经红⾊染料复染后，G-细菌呈红⾊，⽽G+细菌则仍保留最初的紫⾊。

重要性：此法证明了G+和G-主要由于起细胞壁化学成分的差异⽽引起了物理特性的不同⽽使染⾊反应不同，是⼀种积极重要的鉴别染⾊法，不仅可以⽤与鉴别真细菌，也可鉴别古⽣菌。

把原核⽣物分为G+和G-两⼤类，并揭⽰其在结构、功能、⽣理、遗传、⽣态等特性上的不同，故具有重要的理论和实践意义。

4．试讨论细菌的细胞形态与菌落形态间的相关性。

相关性：因不同形态、⽣理类型的细菌，在其菌落形态、构造等特征上也有许多明显的反映，故细菌的细胞形态与菌落形态间存在明显的相关性现象，如，⽆鞭⽑、不能运动的细菌尤其是球菌通常都形成较⼩、较厚、边缘圆整的半球状菌落；长有鞭⽑、运动能⼒强的细菌⼀般形成⽽平坦、边缘多缺刻、不规则的菌落；有糖被的细菌，会长出⼤型、透明、蛋清状的菌落；有芽孢的细菌往往长出外观粗糙、“⼲燥”、不透明且表⾯多褶的菌落等等。

名词解释菌落：菌落即单个（或聚集在⼀起的⼀团）微⽣物在适宜的固体培养基表⾯或内部⽣长、繁殖到⼀定程度可以形成⾁眼可见的、有⼀定形态结构的⼦细胞⽣长群体。

菌苔：如果把⼤量分散的纯种细菌密集的接种在固体培养基的较⼤⾯积上，结果长出的⼤量“菌落”已相互连成⼀⽚即称菌苔。

伴孢晶体：是少数芽孢杆菌在形成芽孢的同时，会在芽孢旁形成⼀颗菱形、⽅形或不规则形的碱溶性蛋⽩质晶体。

基内菌丝：是孢⼦落在固体基质表⾯并发芽后，不断伸长、分枝并以放射壮向基质表⾯和内层扩展，形成⼤量⾊浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的菌丝。

实验11环境微生物的检测_基础生物学实验（安徽大学研究生复试用,生物生命科学）

实验11环境微⽣物的检测_基础⽣物学实验（安徽⼤学研究⽣复试⽤,⽣物⽣命科学）实验⼗⼀环境微⽣物的检测⼀、实验⽬的1.学习从混杂的微⽣物群体中分离纯化微⽣物的⽅法，掌握分离纯化的基本操作技术；2.学会从菌落及培养特征辨别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌四⼤类微⽣物；3.学会好氧、厌氧的微⽣物平板及斜⾯培养的⽅法。

⼆、实验原理从杂居在⼀起的微⽣物群体中获得只含有某⼀种或某⼀株微⽣物的过程称为微⽣物的分离与纯化。

具体的⽅法有1.单细胞挑取法简易单孢⼦分离法是⼀种不需显微单孢操作器，可直接在普通显微镜下利⽤低倍镜分离单孢⼦的⽅法。

它采⽤很细的⽑细管吸取较稀的萌发的孢⼦悬浮液滴在培养⽫盖的内壁上，在低倍镜下逐个检查微滴，将只含有⼀个萌发孢⼦的微滴放⼀⼩块营养琼脂⽚上，使发育成微⼩菌落。

再将微⼩菌落转移到培养基中，即可获得仅由单个孢⼦发育⽽成的纯培养。

2.平板分离法该⽅法操作简便，普遍⽤于微⽣物的分离、纯化。

基本原理包括：（1）选择适合的待分离微⽣物的⽣长条件，例如营养条件、合适的酸碱度、温度和氧等要求或加⼊某种抑制剂造成只利于该微⽣物⽣长，⽽抑制其他微⽣物⽣长的环境，从⽽淘汰⼀些不需要的微⽣物。

（2）微⽣物在固体培养基上⽣长繁殖形成的单个菌落可以是由⼀个细胞繁殖⽽成的集合体。

可以通过挑取单菌落⽽获得⼀种纯培养，获取单个菌落的⽅法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术完成。

值得⼀提的是从微⽣物群体中经分离⽣长在平板上的单个菌落并不⼀定保证是纯培养。

纯培养的确定除了观察其菌落形态外，还要结合显微镜观察到的个体形态特征后才能确定，有些微⽣物的纯培养要经过⼀系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定⽅能得到。

⼟壤是微⽣物⽣活的⼤本营，它所含微⽣物⽆论是种类还是数量上都是极其丰富的。

因此⼟壤是微⽣物多样性的重要场所，是开发微⽣物资源的重要基地，可以从其中分离、纯化得到许多有价值的微⽣物菌株。

本实验将采⽤以下不同的培养基从⼟壤中分离出不同类型的微⽣物。

微生物实验---实验室环境和人体表面微生物的检查

一、目的要求1．证明实验室环境与体表存在微生物。

2．比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。

3．体会无菌操作的重要性。

二、基本原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。

每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。

因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。

三、器材肉膏蛋白胨琼脂平板，无菌水，灭菌棉签（装在试管内），接种环，试管架，酒精灯或煤气灯，记号笔（或蜡笔），废物缸。

四、操作步骤每组在“实验室”和“人体”两大部分中各选择一个内容做实验，或由教师指定分配，最后结果供全班讨论。

1．写标签任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，培养皿的记号一般写在皿底上。

如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时，容易混淆。

用记号笔写上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源（如实验室空气或无菌室空气或头发等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。

2．实验室细菌检查（1）空气将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中；将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室，移去皿盖。

一小时后盖上两个皿盖。

（2）实验台和门的旋钮（a）用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线，如图Ⅱ-1。

（b）取棉签左手拿含有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞（或试管帽），将其取出（图Ⅱ-2，B），将管口很快地通过煤气灯（或酒精灯）的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出（图Ⅱ-2，C）。

微生物课后思考题缭乱版

1简述菌毛的分类与医学意义。

普通菌毛黏附性性菌毛传递遗传物质2比较芽孢与荚膜的形成原因与医学意义荚膜细胞壁外包绕的一层黏性物质，去除豆不影响细菌细胞生命活动抗吞噬，抗有害物质损害，粘附细胞与致病性有关芽胞某些细菌在一定的环境条件下，在菌体的内部形成的有关圆形小体，休眠方式，抵抗力强，杀死芽胞为灭菌指标3.革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁结构有何区别？阳性坚韧厚肽聚糖含量多层数多磷壁酸阴性外膜4.简述细菌L型的概念、特点及临床意义。

细菌细胞壁缺乏型，细菌细胞壁的肽聚糖结构受到理化或者生物因素的直接破坏或合成被抑制，造成细胞壁部分或完全缺失解释下列名词L formed bacterium, pepotidoglycan,LPS, capsule, spore名词：pyrogen、disinfection、sterilization1. 何谓细胞的生长曲线，有何意义2.细菌的合成性代谢产物有哪些，在医学上有何实际意义？3.在同一温度下，干热与湿热灭菌效力哪一种更大，为什么？1.概念　Virulent phages(毒性噬菌体)　Lysogenic phage(溶原性噬菌体)　Prophage（前噬菌体）Plaque(噬斑)P452.溶原性细菌特点3.简述噬菌体与宿主菌的关系及医学意义1、名解backward mutation、BCG P142abortive transduction、HfrPathogenicity island2、细菌基因转移和重组的类型及其主要差异？3、简述F质粒的作用及存在形式4、影印试验验证何种理论？5、局限性转导与普遍性转导的主要区别1、名解固有耐药性（ Intrinsic resistance）获得耐药性 (Acquired resistance)钝化酶 (modified enzyme)2、简述细菌耐药的生化机制3．简述抗菌药物作用机制1.名解:正常菌群（normal flora）、生物拮抗(Antagonism)条件致病菌(conditional pathogen)、菌血症(bacteremia)毒力（virulence)、侵袭力(invasiveness)、侵袭素（invasin）2.试比较内毒素与外毒素的基本生物学特性?3.细菌的侵袭力由哪些因素组成？4.正常菌群的特点及生理作用5.条件致病菌的致病条件及其特点1、名解serological identification and diagnosis(血清学鉴定与诊断)2、简述病原菌标本的采集和送检的原则SPA、脂寡糖抗原（LOS）对脑膜炎球菌应如何进行分离培养（为何需要床边接种）？快速诊断方法P105金黄色葡萄球菌与乙型溶血性链球菌引起的化脓性炎症的特点有何不同，为什么？确定致病性葡萄球菌的指标有哪些？1.Shiga toxin(志贺毒素)、Widal test(肥达试验)、The number of coliform bacteria(大肠菌群数)Vi antigen (Vi抗原)2.志贺菌属的致病物质及标本采集和送检原则3.疑似肠热症患者应做哪些微生物学检测以进一步确诊？4.沙门菌属的致病物质及所致疾病1.霍乱肠毒素（cholera toxin）2.霍乱弧菌O1群的主要致病物质及防治原则，简述霍乱肠毒素的作用机理。

给学生微生物遗传育种学复习思考题1

给学⽣微⽣物遗传育种学复习思考题1《微⽣物遗传育种》复习思考题01 绪论1、⼯业微⽣物菌种应具有哪些基本特征？⾮致病性；适合⼤规模培养⼯艺要求；利于规模化产品加⼯⼯艺；具有相对稳定的遗传性能和⽣产性状；形成具有商业价值的产品或具有商业应⽤价值。

2、简述⼯业微⽣物遗传育种的分类。

天然菌种（native strain）：通过⾃然筛选和分离获得的⼯业菌种；诱变菌种（mutagenized strain）：通过物理、化学等诱变剂在实验室⼈⼯诱变⾃然筛选与分离的菌株所获得产量或/和性状改善的⼯业菌种；重组菌种（recombinant strain）是通过遗传重组技术对菌种进⾏定向遗传改良获得的⼯业菌种；遗传修饰⽣物体（genetic modification organisms, GMOs）：经外源基因导⼊并因此发⽣遗传整合和性状改变的⽣物体。

3、试从微⽣物遗传学的不同⾓度阐述你对微⽣物多样性的认识。

⼀、微⽣物物种的多样性; ⼆、微⽣物遗传的多样性;三、微⽣物代谢的多样性 ;四、微⽣物的⽣态多样性;五、微⽣物利⽤的⼴泛性02 第四章⼯业微⽣物育种诱变剂1、什么是诱变剂？可分为哪⼏种类型？诱变剂：凡能诱发⽣物基因突变，并且突变频率远远超过⾃发突变率的物理因⼦或化学物质.可以分为三类：物理诱变剂；化学诱变剂：⼀类能对DNA起作⽤，改变DNA结构，并引起遗传变异的化学物质；⽣物诱变剂：采⽤某些噬菌体来筛选抗噬菌体突变菌株时，常常发现伴随着出现抗⽣素产量明显提⾼的抗性突变株。

因此，可以认为这些溶源性噬菌体是⼀种⽣物诱变剂。

2、什么是突变？突变的表现型有哪些？基因突变的特点有哪些？突变，从⼴义上讲，除了转化、转导、接合等遗传物质的传递和重组引起⽣物变异以外，任何表型上可遗传的突变都属突变范围，如染⾊体整倍性和⾮整倍性的变化及染⾊体结构上的畸变等都包括在内。

1、形态突变型，是⼀种可见突变，它包括微⽣物菌落形态变化，如菌落形状⼤⼩、颜⾊、表⾯结构等；2、⽣化突变型，；3、条件致死突变型；4、致死突变型；5、抗性突变型；6、营养缺陷型；普遍性；随机性（基因突变可以发⽣在⽣物个体发育的任何时期和⽣物体的任何细胞。

（整理）各种微生物生化试验方法原理.

（整理）各种微⽣物⽣化试验⽅法原理.各种微⽣物⽣化试验⽅法原理通常利⽤⽣化试验的⽅法，检测细菌对各种物质的代谢作⽤及其代谢产物，称为细菌的⽣化反应，常⽤于细菌的鉴别。

1、糖类分解产物（1）糖发酵试验（carbohydrate fermentation test）不同种类的细菌对糖的分解利⽤能⼒不同，⼀般以能否分解某种糖，是否产酸产⽓等现象来鉴别。

例如⼤肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产酸且产⽓；⽽伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产⽓，且不分解乳糖。

这是因为⼤肠杆菌分解葡萄糖等产⽣甲酸，经甲酸解氢酶的作⽤⽣成H2和CO2。

⽽伤寒杆菌⽆此酶，故分解葡萄糖只产酸不产⽓。

（2）VP试验（V oges-Proskauer test）产⽓杆菌将分解葡萄糖产⽣的两分⼦丙酮酸脱羧，⽣成⼀分⼦⼄酰甲基甲醇。

⼄酰甲基甲醇在碱性溶液中被空⽓中氧⽓氧化，⽣成⼆⼄酰，⼆⼄酰可与培养液中含胍基的化合物（如蛋⽩胨中的精氨酸）反应，⽣成红⾊的化合物，此为VP试验阳性。

⼤肠杆菌分解葡萄糖不⽣成⼄酰甲基甲醇，故VP试验阴性。

（3）甲基红试验（methyl red test）⼤肠杆菌和产⽓杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、乳糖产酸产⽓，⼆者不易区别。

但两者所产⽣的酸类和总酸量不⼀：⼤肠杆菌可产⽣甲酸、⼄酸、乳酸、琥珀酸等，⽽产⽓杆菌只产⽣甲酸、⼄醇及⼄酰甲基甲醇。

故⼤肠杆菌培养液PH在4.5以下，加⼊甲基红指⽰剂呈红⾊，为甲基红试验阳性；产⽓杆菌培养液PH在5.4以上，加⼊甲基红后呈桔黄⾊，为甲基红试验阴性。

（4）枸橼酸盐利⽤试验(citrate utilization test）产⽓杆菌在以枸橼酸盐为唯⼀碳源的培养基上⽣长，分解枸橼酸盐产⽣CO2，并转变为碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，含溴麝⾹草酚蓝（BTB）指⽰剂的培养基由淡绿⾊变为深兰⾊，此为枸橼酸盐利⽤试验阳性。

⼤肠杆菌不能利⽤枸橼酸盐，故在此培养基上不能⽣长，培养基仍为绿⾊。

2、蛋⽩质及氨基酸的分解产物（1）硫化氢试验（hydrogen sulfide test）有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸等）产⽣H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能⽣成⿊⾊的硫化物，为硫化氢试验阳性。

微生物学实验复习题及其答案

微生物学实验复习题一、选择题1.革兰氏染色的关键操作步骤是：A. 结晶紫染色B. 碘液固定C. 酒精脱色D. 复染2.放线菌印片染色的关键操作是：A. 印片时不能移动B. 染色C. 染色后不能吸干D. A和C3.高氏培养基用来培养：A. 细菌B. 真菌C. 放线菌4.肉汤培养基用来培养:A. 酵母菌B. 霉菌C. 细菌5.无氮培养基用来培养:A. 自生固氮菌。

B. 硅酸盐细菌C. 根瘤菌D. A、B 均可培养E. A、B、C 均可培养6.在使用显微镜油镜时，为了提高分辨力，通常在镜头和盖玻片之间滴加:A. 二甲苯B. 水C. 香柏油7.常用的消毒酒精浓度为:A. 75%B. 50%C. 90%8.用甲醛进展空气熏蒸消毒的用量是:A. 20ml/M3B. 6ml/M3C. 1ml/M39.实验室培养基高压蒸汽灭菌的工艺条件是:A. 121℃/30minB. 115℃/30minC. 130℃/30min10.巴氏消毒的工艺条件是:A. 62-63℃/30minB. 71-72℃/15minC. A.B. 均可11.半固体培养基的主要用途是:A. 检查细菌的运动性B. 检查细菌的好氧性C. A.B. 两项12.半固体培养基的琼脂参加量通常是:A. 1%B. 0.5%C. 0.1%13.使用手提式灭菌锅灭菌的关键操作是:A. 排冷气彻底B. 保温时间适当C. 灭菌完后排气不能太快D. A-C14.目镜头上的“K〞字母表示:A. 广视野目镜B. 惠更斯目镜C. 补偿目镜15.目镜头上的“P〞字母表示:A. 平场目镜B. 广视野目镜C. 平场补偿目镜16.物镜头上的“PL〞字母表示:A.正低相差物镜B.正高相差物镜C.负高相差物镜17.物镜头上的“UVFL〞字母表示。

A. 无荧光物镜B. 照相物镜C. 相差物镜18.镜头上标有“TC〞字母的镜头是:A. 相差调整望远镜B. 摄影目镜C. 相差目镜19.“PA〞表示:A. 马铃薯培养基B. 高氏培养基C. 肉汤培养基20.无菌室空气灭菌常用方法是:A. 甲醛熏蒸B. 紫外灯照射C. 喷石炭酸D. A.B. 并用21.干热灭菌的关键操作是:A. 灭菌物不能有水B. 保温过程中不能开箱门C. 降温不能太快22.霉菌水浸制片的关键操作是：A. 菌丝要分散B. 菌丝首先要用50% 的乙醇浸润C. 盖盖玻片不能有气泡D. A-C23.加热法染芽胞的染料通常是:A. 孔雀绿B. 结晶紫C. 复红D. 蕃红24.复红法染鞭毛的关键操作是:A. 玻片干净B. 染料新鲜C. 菌体活化适当D. A、B、C25.镀银法染鞭毛的关键操作是:A. 玻片干净B. 染料无沉淀C. 加热适当D. 菌体活化适当E. A-D26.进展简单染色使用的染色液通常是:A. 复红B. 蕃红C. 结晶紫D. 孔雀绿E. A-D 均可27.物镜头上的“APO〞字母代表:A. 消色差物镜B. 复消色差物镜C. 半消色差物镜28.物镜头上的“Ach〞字母表示:A. 平场物镜B. 超平场物镜C. 消色差物镜29.物镜头上的“NH〞字母表示：A. 正相差物镜B. 负相差物镜C. 负高相差物镜30.物镜头上的“0.17〞表示：A. 要求的盖玻片厚度B. 要求的载玻片厚度C. 镜头浸油的深度31.镜头上标有“NFK" 字母的镜头是：A. 照相目镜B. 荧光目镜C. 相差目镜32.目镜头上的“PK〞字母表示：A. 平场目镜B. 补偿目镜C. 平场补偿目镜33.物镜头上的"Splan" 字母表示:A. 超平场物镜B. 平场物镜C. 消色差物镜。

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各章习题阅读人数：408 人页数：6 页各章习题第1章 1．什么是菌落？了解菌落有何实际意义？ 2．绘出细菌的基本结构和特殊结构图。 3．比较革兰阳性菌和阴性菌的细胞壁结构及化学组成的差异。 4．试述脂多糖及外膜蛋白的组成及功能。 5．叙述细菌核体与真核细胞核的异同。 6．解释荚膜的概念及其功能。 7．S 层是什么样的结构？ 8．试述鞭毛的结构和功用。 9．菌毛的本质、分类及功能如何？ 10．叙述芽胞的结构、功能及对外界环境抵抗力强的原因。 11．根据鞭毛、芽胞为何能鉴别细菌？ 12．什么是革兰染色？有何意义？其染色机制如何？ 13．试述应用电镜观察细菌有哪些特点和限制？第2章 1．细菌菌体分裂为什么只需较短时间？ 2．细菌的生长曲线如何确定？有何意义？ 3．试述细菌生长的各个期的特点。 4．培养基有哪些种类？各有何用途？ 6．生物被膜有何特点？ 7．何谓密度感应系统调控？举例说明其作用。 8．试述益生菌及益生元的概念及应用价值。 9．何谓菌群失调？保持动物正常菌群有何重要意义？ 10．试述悉生生物学和悉生动物的概念、实验动物分类（包括定义）以及培育实验动物的意义。第3章 1．何谓灭菌、消毒、防腐？举例比较它们的异同。 2．试述影响微生物的主要物理因素及其实用价值。 3．试述各种热力灭菌法的方法原理及其主要用途。 4．根据对微生物的灭活作用可分为哪些类型？列举常用的辐射方法及其杀菌原理和应用。 5．试述滤过除菌的概念及其应用。第4章 1．什么是柯赫法则？如何从分子水平解释柯赫法则？ 2．试述致病菌侵入宿主细胞的主要过程。 3．什么样的细菌能内化入胞？意义何在？ 4．什么是细菌外毒素？其基本特性及组成如何？ 5．什么是类毒素？有何用途？ 6．试述内毒素的来源、组成、致病意义及检测方法。 1/6 7．比较外毒素与内毒素的主要异同点。第5章

微生物工程思考题参考答案

微⽣物⼯程思考题参考答案微⽣物⼯程思考题参考答案Ricky & Bullet 2017.11、举出⼏例微⽣物⼤规模表达的产品, 及其产⽣菌的特点？A.蛋⽩酶表达产物⼀般分泌⾄胞外，能利⽤廉价的氮源，⽣长温度较⾼，⽣长速度快,纯化、分离及分析快速；安全性⾼，得到FDA的批准的菌种。

B.单细胞蛋⽩⽣长迅速，营养要求不⾼，易培养，能利⽤廉价的培养基或⽣产废物。

适合⼤规模⼯业化⽣产，产量⾼，质量好。

安全性⾼，得到FDA的批准的菌种。

C. 不饱和脂肪酸⽣长温度较低，安全性⾼，能利⽤廉价的碳源，不饱和脂肪酸含量⾼，D.抗⽣素⽣产性能稳定，产量⾼，不产⾊素，，能利⽤廉价原料F. 氨基酸代谢途径⽐较清楚，代谢途径⽐较简单2、⾃然界分离微⽣物的⼀般操作步骤？样品的采取→预处理→培养→菌落的选择→初筛→复筛→性能的鉴定→菌种保藏3、从环境中分离⽬的微⽣物时，为何⼀定要进⾏富集培养？⾃然界中⽬的微⽣物含量很少，⾮⽬的微⽣物种类繁多，进⾏富集培养，使⽬的微⽣物在最适的环境下迅速地⽣长繁殖，数量增加，由原来⾃然条件下的劣势种变成⼈⼯环境下的优势种，使筛选变得可能。

4、菌种选育分⼦改造的⽬的？防⽌菌种退化; 解决⽣产实际问题;提⾼⽣产能⼒; 提⾼产品质量; 开发新产品5、什么叫⾃然选育？⾃然选育在⼯艺⽣产中的意义？⾃然选育就是不经⼈⼯处理，利⽤微⽣物的⾃然突变进⾏菌种选育的过程。

⾃然选育在⼯业⽣产上的意义：⾃然选育可以有效地⽤于⾼性能突变株的分离。

然选育虽然突变率很低，但却是⼯⼚保证稳产⾼产的重要措施。

6、什么是诱变育种？常⽤的诱变剂有哪些？诱变育种是指⽤物理、化学因素诱导植物的遗传特性发⽣变异，再从变异群体中选择符合⼈们某种要求的单株，进⽽培育成新的品种或种质的育种⽅法。

诱变剂有两⼤类：物理诱变剂和化学诱变剂。

常⽤的物理诱变剂有紫外线、x射线、γ射线(如Co60等)、等离⼦、快中⼦、α射线、β射线、超声波等。

常⽤的化学诱变剂有碱基类似物、烷化剂、羟胺、吖定类化合物等。