发酵工程实验五 一级种子的制备

《发酵工程实验》

实验五、一级种子的制备

一、实验目的

1、了解发酵工业菌种的制备过程及质量控制。

2、熟悉发酵实验的一级菌种制备。

二、实验原理

菌种制备的主要手段是扩培，其出发点是尽可能培养出高活性的、能满足大规模发酵需要的纯种。由于现代生产菌种的生产性能已非常高，因此，菌种在培养过程中自发突变往往以负向突变为主，加上平时操作中可能有污染，导致发酵菌种容易退化。因此，菌种的管理主要有两点：分离纯化和扩大培养。前者目的为分离出单细胞菌落，保证菌种的性能稳定。后者目的是为发酵生产提供充足的高活性菌种，分斜面菌种、一级菌种和二级菌种。

在进行各级菌种的扩培时，菌种的质量要达到发酵要求。比较简单的做法是用显微镜观察细胞的形态是否正常、测定种子培养基的pH值是否正常及细胞生长繁殖活力等。

三、实验器材与试剂

1、菌种

实验二中筛选到的-淀粉酶产生菌(酵母)。

2、培养基（W/V）

（1）斜面培养基（已制备）

（2）摇瓶种子培养基：蔗糖20g/L，蛋白胨5.0g/L，磷酸氢二钠4.0g/L，硫酸镁0.5g/L，磷酸二氢钾1.0g/L，pH为5.0-5.5。250ml三角瓶中装培养基50ml，8层纱布封口，0.1MPa 灭菌20min（现用现配）。

四、实验步骤

1、斜面接种

挑取保藏菌种接种到斜面培养基上，28℃培养24h。仔细观察斜面菌苔生长情况（菌苔的颜色、边缘等特征是否正常），有无感染杂菌。

2、镜检

在无菌条件下，挑取斜面菌苔少许，在载玻片上制成涂片，在显微镜下检查菌苔形态特征，大小、均匀情况。

3、摇瓶培养

挑取经镜检确定后的活化斜面菌苔3-5环，接入上述液体培养基中，28℃恒温摇床培养(180rpm)，培养12h。观察摇瓶菌液外观稠度、静置沉降情况。镜检菌液中菌体细胞的形态是否正常（大小均匀程度等）及测定培养液中pH。

五、注意事项

1、出现污染征象的斜面培养活化菌苔坚决不能使用。

2、菌种的污染，势必导致发酵的失败，轻者产量降低，严重的不积累产物。因此，在菌种制备过程中，都要树立牢固的无菌概念，力求细致、到位。