EB病毒检测技术进展及临床应用文稿演示
EB病毒实验室检测技术研究进展
Ｅ Ｖ 培 养 是 将 标 本 直 接 接 种 人 新 鲜 的 脐 带 血 淋 巴 细 胞 或 Ｂ Ｂ细 胞 ， 养 ４周 ， 果 出现 大 量 的转 化 淋 巴 细 胞 ， 提 示 病 毒 培 如 则 培养阳性 ， 通过免疫荧光技术或其他检测手段检测转化淋 巴 可
１ 培 养 法
白成 为可 能 ， 种 Ｅ Ｖ 抗 原 已 被 表 达 纯 化 ， Ｅ ＩＡ 法 诊 断 多 Ｂ 使 ＬＳ 相 关 疾 病 的 价 值 大 大 提 高 。通 过 Ｅ ＩＡ 法 检 测 诊 断 Ｎ Ｃ 获 ＬＳ Ｐ 得 较 好 结 果 的 抗 原 有 ｇ １５ Ｅ Ｚ Ｂ Ａ、 Ｂ ｐ２ 、 Ａ、 Ｅ Ｒ Ｅ ＮＡ１ ＴＫ 激 酶 、 、 Ｄ ＮＡ 聚 合 酶 、 糖 核 酸 还 原 酶 等 ， 中 ＶＣ ｐ２ 核 其 Ａ ｇ １５编 码 是 敏 感 性 最 高 的基 因 片 段 ， 具 有 极 强 的 免 疫 原 性 。 盛 平 等 ｌ 并 ＿ １ 选
２Ｉ 免疫 荧 光法 （ ． ｉ ｍｍｕ ｏ ｕ ｒｓ ｅ ｃ ｓａ ，Ｆ Ｉ Ａ 以 ｎ ｆ ｏ ｅ ｃｎ ｅａ ｓ ｙ Ｉ Ａ） Ｆ ｌ Ｅ Ｖ 激 活 的 Ｂ ５ ８细 胞 或 Ｒ ｊ 细 胞 涂 片 ， 显 色 剂 显 色 后 用 Ｂ ９— ａｉ 经
关 键 词 ： 疹 病 毒 ４型 ， ； 病 毒 培 养 ； 免 疫 学技 术 ； 聚 合 酶 链 反 应 疱 人 Ｄ Ｉ１ ． ９ ９ｊｉｓ． ６ ３４ ３ ． ０ ２ ０ ． ２ Ｏ ：０ ３ ６ ／．ｓｎ １７ —１０ ２１ ． ９ ０ ９ 文 献标 识 码 ： Ａ
Ｅ 病 毒 （ｐｔｉ－ａｒｖ ｕ ， Ｂ 又 称 人 类 疱 疹 病 毒 ４ Ｂ ｅ ｓ ｎｂ ｒ ｉ ｓ Ｅ Ｖ） ｅ ｒ 型 ， 引 起 传 染 性 单 核 细 胞 增 多 症 ， 与 鼻 咽癌 （ Ｃ 、 基 特 可 并 ＮＰ ） 伯 （ ｕｋｔ 淋 巴瘤 、 奇 金 淋 巴 瘤 及 多 发 性 硬 化 症 的 发 生 关 系 密 Ｂ ｒ ｉ） ｔ 霍
EB病毒检测技术进展及临床应用
EBV实验室检测方法
嗜异凝集抗体试验：也称“Monospot”试验。在EBV还未 确定为IM的病因之前，1932年引入临床实践诊断IM。 当时发现IM患者的血清或血浆可以凝集马或绵羊的红细胞。 该抗体在病程第1～2周出现，持续约6个月。 在青少年原发性EBV感染中其阳性率可达80％-90％，约10％ 的青少年缺乏对嗜异性抗体的阳性反应。
1975年Horwitz首次描述一些持续性IM患者血清存在高滴 度的抗EBV-VCA和EA抗体
1982年Tobi进一步描述并证实该病 1984年被称为慢性单核细胞增多样综合征 1986年被定义为慢性症状性EBV感染 1991年被称为慢性活动性EBV感染
CAEBV
发生于儿童或年轻成年人 该病表现为慢性或反复的单核细胞增多样症：发热、肝脾
概述
➢ 传播途径：EBV感染主要通过唾液接触传播，也可通过 血液传播；
➢ 人感染EBV后建立终身潜伏感染，人群感染率超过90%。 ➢ 1-6岁儿童、14-20岁青少年及年轻成年人高度易感，发
展中国家EBV感染多发生在儿童早期。
病原学
疱疹病毒科，γ疱疹病毒亚科，淋 巴隐病毒属，人疱疹病毒4型
球形双链DNA病毒，基因组平均 大小约为172 kb
EBV病毒核酸检测
➢ 实时荧光定量PCR是目前最主要的监测EBV载 量的方法
➢ 鉴别EBV健康携带者的低水平复制与EBV相关 疾病患者高水平活动性感染。
EBV病毒核酸检测
EBV载量检测有多种方法，Real-time PCR是 目前最主要的监测EBV载量的方法，有较强的敏 感性和特异性。不同的EBV疾病进行Real-time PCR检测时，需要的标本不同。
EB病毒检测技术及临床应用
EB病毒感染临床应用研究进展
自然 杀 伤 细 胞 等 ， 发 相 关 的疾 病 。 引 ］ ２ Ｅ Ｂ病 毒 感 染 相 关 疾 病
２ １ 肿 瘤 性 疾 病 Ｅ ． Ｂ病 毒 感 染 与 某 些 肿 瘤 的发 生 和 发 展 密 切 相 关 ， Ｂ ｒ ｉ 淋 巴瘤 、 咽 癌 、 杰 金 病 和 成 人 Ｔ 细 胞 如 ｕｋｔ Ｓ ｔ 鼻 何
感 染 的 Ｂ淋 巴 细 胞 可 表 达 一 系列 Ｅ Ｂ病 毒 特 异 性 抗 原 分 子 ， 诱
２３ 其他相关疾病 ．
大 量 研 究 提 示 ， Ｂ病 毒 病 毒 感 染 与 类 风 Ｅ
湿关节炎之间存在 诸多联 系＿ ｌ Ｅ 病 毒 蛋 白和 类 风 湿 关 节 。 Ｂ 炎 特 异性 蛋 白 间存 在 一 些 抗 原 序 列 相 似 性 。 有 报 道 滑 膜 中存 在 Ｅ ＶＤ Ｂ ＮＡ 的个 体 中 患类 风 湿 关 节 炎 的风 险增 加 ＿ ｌ 近 年 。 来 ， Ｂ病 毒感 染 与 妊 娠 相 关 的 报 道 也 越 来 越 多 ， 妇 感 染 Ｅ Ｅ 孕 Ｂ 病毒后也会发生流产、 产 、 早 胎死 宫 内 、 儿 畸 形 及 新 生 儿 感 染 胎 等 情 况 。Ｅ Ｂ病 毒 妊 娠 期 再 次 激 活 可 导 致 孕 期 缩 短 ， 现 出 生 出 儿 体 质 量 降 低 、 长 缩 短 和头 颈 周 径 缩 短现 象 口。 身 。
淋 巴瘤 等 。近 年 来 ， 来 越 多 的学 者 把 研 究 重 点 转 移 到 Ｅ 越 Ｂ病
Ｅ Ｂ病 毒 实 验 室 检 测 的方 法 主要 有 ： 异 性 凝 集 试 验 、 毒 嗜 病 培 养 分 离 法 、 合 酶 链 反 应 、 毒 荧 光 检 测 、 清 学 抗 体 检 测 聚 病 血
EB病毒检测及其临床应用的研究进展
EB病毒检测及其临床应用的研究进展张旭【摘要】Diseases caused by Epstein-Barr virus (EBV) infection are increasing,such as organ transplantation-associated EBV infection. Epithelial cell source tumor is correlated with EBV infection,and it is characterized by recessive infection and is often ignored in clinic. With the development of determination methods for EBV infection,especially quantitative determination of EBV DNA,combined with the results of immunological determination,pathogens could be timely determined in early infection period. It is potential for the dynamic monitoring and prognosis evaluation of EBV-related tumors. This review focuses on the determination methods of EBV from home and abroad and the relationship between EBV-related determination and tumors.%目前临床上由EB病毒(EBV)感染引起的疾病越来越多,如器官移植伴EBV感染.上皮细胞源肿瘤与EBV感染密切相关,常表现为隐性感染,易被临床忽视.随着检验技术的不断成熟,尤其是EBV DNA的定量检测,结合常规的免疫学检测结果,不仅有利于在感染初期及时检出致病原,而且对EBV相关肿瘤的动态监测、预后评估也有积极的意义.文章就国内外EBV的检测方法和EBV相关肿瘤的研究进展作一综述.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2018(033)003【总页数】5页(P259-263)【关键词】EB病毒;检测方法;肿瘤;治疗【作者】张旭【作者单位】绵阳市404医院检验科,四川绵阳 621000【正文语种】中文【中图分类】R446.5EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一种嗜淋巴细胞的双链DNA病毒，属于疱疹病毒γ亚科。
EB病毒感染临床应用研究进展
EB病毒感染临床应用研究进展EB病毒感染是儿科比较常见的病毒感染性疾病，感染时其症状轻重不一，可累及全身多个系统，引发多种疾病，主要有传染性单核细胞增多症（ＩＭ）、慢性活动性EB病毒感染（ＣＡＥ－ＢＶ）和噬血淋巴组织细胞增生症（ＨＬＨ）。
很多时候能早期诊断，给临床治疗带来困难，本文就ＥＢ病毒感染相关疾病及临床检测研究进展综述如下。
EB病毒简介。
EB病毒属于疱疹病毒，γ亚科，于１９６４年在非洲儿童的霍奇金病组织培养中发现。
基本结构为核样物、衣壳和包膜３个部分。
EB病毒感染可以出现典型的ＩＭ体征及其他复杂的临床表现或隐性感染。
有文献报道，发展中国家儿童 EB病毒感染的高峰年龄在２～６岁，而发达国家多见于青少年，发病年龄在１０～２０岁。
Ｂ淋巴细胞是其感染的主要宿主细胞，感染的Ｂ淋巴细胞可表达一系列 EB病毒特异性抗原分子，诱导机体产生免疫反应。
近年发现ＥＢ病毒亦可感染上皮细胞、自然杀伤细胞等，引发相关的疾病。
EB病毒感染相关疾病。
①肿瘤性疾病ＥＢ病毒感染与某些肿瘤的发生和发展密切相关，如Ｂｕｒｋｉｔｔ′ｓ淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金病和成人Ｔ细胞淋巴瘤等。
近年来，越来越多的学者把研究重点转移到ＥＢ病毒感染与其他肿瘤之间的相关性，１９９３年，Ｔｏｋｕｎａｇａ等将胃癌细胞内存在 EB病毒者（以 EB病毒基因组中的ＥＢＥＲ阳性为标准）定义为 EB病毒相关胃癌（ＥＢＶａＧＣ）。
目前研究结果显示，约１０％的胃癌组织 EB病毒阳性，ＥＢ病毒感染在胃癌发生和发展中的作用也愈来愈受到重视。
有报道 EB病毒在子宫颈癌中也有表达。
有研究发现， EB病毒感染也与乳腺癌和肺癌等肿瘤发病有一定的相关性。
②慢性活动性 EB病毒感染 EB病毒感染多为急性感染，可无症状或表现为ＩＭ，但是在免疫力低下的患儿，ＥＢ病毒感染后可出现慢性或复发性ＩＭ样症状，伴随ＥＢ病毒抗体的异常改变，称为慢性活动性ＥＢ病毒感染（ＣＡＥＢＶ）。
目前ＣＡＥ－ＢＶ可分为两大类：一类为慢性ＥＢ病毒感染（ＣＥＢＶ），即由ＥＢ病毒引起的具有持续性或复发性ＩＭ样的临床表现，但不伴有异常升高的与ＥＢ病毒复制抗原相关的抗体滴度，预后良好；另一类为严重ＣＡＥＢＶ（ＳＣＡＥＢＶ），具有更严重的多系统并发症和血液学异常表现，以及异常升高的ＥＢ病毒相关抗原的抗体滴度，预后差。
EB病毒6项抗体联合检测在临床诊断中的应用
分析仪的不精密度、正确度、携带污染率、临床可报告范围、仪器模式间比对、生物参考区间及仪器分类与人工分类比对等性能指标进行验证，得出以下结论：（１）该仪器精密度高、重复性好，本次精密度验证试验血常规各项指标的批内不精密度和总不精密度均符合评价标准，精密度良好。
（２）本检测系统室间质评成绩合格。
（３）携带污染率小，各项携带污染率均符合仪器的性能要求。
（４）各检测指标的线性试验结果表明，检测系统具有良好的线性，ａ值均在１．００±０．０５范围内，ｒ２≥０．９５，符合要求，各指标线性范围有效。
（５）仪器自动模式与手动模式之间比对结果符合要求，验证通过。
（６）检测系统结果均至少有９５％数据分布在现行生物参考区间内，验证通过。
（７）仪器分类与人工分类比对结果符合要求，验证通过。
综上所述，本室西门子ＡＤＶＩＡ ２１２０ｉ全自动五分类血细胞分析仪通过了对不精密度、可比性、线性范围、临床可报告范围、携带污染率、生物参考区间、不同进样模式间比对、仪器分类与手工分类比对等性能指标的验证，性能良好，可用于临床标本的检测。
参考文献［１］中国合格评定国家认可委员会．ＩＳＯ１５１８９医学实验室质量和能力认可准则［Ｓ］．北京：中国合格评定国家认可委员会，２０１２．［２］Ｈｅｄｌｅｙ ＢＤ，Ｋｅｅｎｅｙ Ｍ，Ｃｈｉｎ－Ｙｅｅ Ｉ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｉｔｉａｌ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｅｖａｌ－ｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＵｎｉＣｅｌ（Ｒ）ＤｘＨ ８００Ｃｏｕｌｔｅｒ（Ｒ）ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎａｌｙｓｉｓｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｈｅｍａｔｏｌ，２０１１，３３（１）：４５－５６．［３］叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程［Ｍ］．３版．南京：东南大学出版社，２００６：４９６．［４］Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ．ＥＰ５－Ａ２Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｄｅｖｉｃｅｓ［Ｓ］．Ｗａｙｎｅ，ＰＡ，ＵＳＡ：ＮＣＣＬ，１９９９．［５］中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会．ＷＳ／Ｔ４０６－２０１２临床血液学检验常规项目分析质量要求［Ｓ］．北京：中国标准出版社，２０１２．［６］Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ．ＥＰ６－Ａ Ｅ－ｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｏｆ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ：ａ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ［Ｓ］．Ｗａｙｎｅ，ＰＡ，ＵＳＡ：ＮＣＣＬＳ，２００３．［７］Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ．ＥＰ１０－Ａ２Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍｅｔｈｏｄｓ［Ｓ］．Ｗａｙｎｅ，ＰＡ，ＵＳＡ：ＮＣＣＬＳ，２００２．［８］王治国．临床检验方法确认与性能验证［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００９．（收稿日期：２０１５－１０－２６）△ 通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｘｙａｎｇ１７＠１６３．ｃｏｍ。
PCR精准检测儿童EB病毒感染的临床研究及推广
世界最新医学信息文摘 2018年第18卷第69期 151 PCR精准检测儿童EB病毒感染的临床研究及推广吕敬斌（密山市人民医院分子生物实验室，黑龙江 鸡西 158300）摘要：目的探讨分析PCR精准检测对儿童EB病毒感染的临床诊断研究与推广。
方法选取我院从2017年1月至2017年12月收治的600例儿童EB病毒感染者作为本次临床研究对象，随机分为对照组（n=300）与观察组（n=300）；对照组患儿行血清学检测方式，观察患儿行PCR精准检测，观察患儿血清学检测与核酸EBV-DNA检测阳性率。
结果对照组患儿在血清学检测中患NA IgG的阳性率最低，而观察组患儿行PCR精准检测方式其EBV-DNA阳性率高于全血EBV-DNA阳性率，差异有统计学意义（P<0.05）。
结论对儿童EB病毒感染者行PCR精准检测，在临床检测中准确率更高，值得广泛应用和推广。
关键词：PCR精准检测；儿童EB病毒感染；推广应用中图分类号：R450 文献标识码：B DOI: 10.19613/ki.1671-3141.2018.69.115本文引用格式：吕敬斌.PCR精准检测儿童EB病毒感染的临床研究及推广[J].世界最新医学信息文摘,2018,18(69):151.0 引言EB病毒感染（Epstein-Barr Virus, EBV）作为一类临床中常见的疱疹类双链DNA病毒，呈全球性分布[1]，且会一直居于感染者体内，而根据EBV的感染时间、特异性抗体谱可以将其分为既往与原发感染、再激活三类；主要是通过唾液传播导致病毒感染，由于儿童抵抗力低，导致这样无症状的感染一般高发于孩童；当前对于EBV感染的临床诊断方式多通过血清学检测和PCR精准检测，血清学检测是常用的一种诊断方式，PCR精准检测特异性较强、敏感性高，在临床诊断中应用越来越广泛；因此，本文根据血清学与PCR不同诊断方式作对比分析，研究PCR精准检测对儿童EB病毒感染的临床应用与所具备的推广性。
EB病毒抗体诊断方法研究进展
EB病毒抗体诊断方法研究进展作者：吴尚文来源：《中国当代医药》2013年第08期[摘要] EB病毒与鼻咽癌密切相关，通过检测血清EB病毒抗体可为鼻咽癌筛查和早期诊断提供辅助性指标。
近年来，各种血清EB病毒抗体检测方法相继产生，全文就EB病毒抗体诊断方法研究进展作一综述。
[关键词] EB病毒；鼻咽癌；抗体诊断；研究进展[中图分类号] R446.6 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）03（b）-0021-02EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是一种能普遍感染人类且与多种恶性肿瘤发病有密切关系的DNA病毒。
由于人类容易感染EB病毒，EB病毒感染导致的相关疾病，特别是恶性肿瘤的发病越来越受到研究人员的关注。
自外国医学研究人员Old LJ等[1]报告使用免疫扩散实验确认EB病毒和鼻咽癌的血清学有关以来，后来诸多研究均发现抗EB病毒壳抗原的免疫球蛋白对鼻咽癌诊断有特异性。
近年来，随着检验技术的发展和在临床上的大量应用，国内外学者对鼻咽癌患者血清EB病毒抗体诊断方法作了大量研究。
1 血清EB病毒抗体诊断方法研究进展1.1 EB病毒不同检测方法长期的临床研究发现EB病毒感染人体后，被病毒感染的人体细胞具有EB病毒的基因组，并产生相应的各种抗原，已确定的被病毒感染细胞可合成抗原有：①核抗原（EB virus asso-ciated nuclear antigen，EBNA）；②膜抗原（membrane antigen of Epstien-Barr virus，MA）；③早期抗原（early intracellular antigen，EA）；④衣壳抗原（EB virus cap sid antigen，VCA）；⑤淋巴细胞识别膜抗原（LYDMA）。
由于抗原产生后机体会出现相应的抗体，通过血清EB病毒抗体的检测可为临床诊断提供依据，目前有大量报道显示测定单个EB病毒抗原的抗体相比联合测定多个抗体对鼻咽癌的诊断的特异性及灵敏度偏低，不能为临床诊断提供准确的数据，为提高检验的准确性，现多采用多个抗体联合检测及联合分析的方法。
EB病毒感染机制及其检测方法
03 EBV流行病学研究
a 地域分布
• 世界性，分布广泛 • 散发性，四季皆可
c 传播途径
• 飞沫传播 • 血液传播或性传播
b 传染源
• 病毒携带者 • 患者
d 易感人群
• 不论种族、性别，20岁以下女性略多 • 感染率高，大多呈潜伏状态
贰
EBV感染致病机制
Pathogenic mechanism of EB virus infection
04 检测方法—原位杂交（EBER）
EBER定位：细胞核 常用检测组织：鼻咽癌、 淋巴瘤及胃癌组织等
04 检测方法—原位杂交（EBER）
原位杂交
• 细胞形态保持较好
优点 • 细胞定位准确：细胞核，少数细胞浆亦着色
• 稳定性好、特异性高
• 对病理诊断具有重要的参考价值
• 组织和细胞中EBV检测的金标准
潜伏性感染
多见于EBV相关的恶性肿瘤
EBNA：核相关肿瘤抗原 LMPs：EBV潜伏膜蛋白
03 EBV感染机制----免疫逃逸机制
潜伏期EBV基因表达下调
01
抑制Th1免疫应答 06
02 干扰抗原加工和提呈
调节CTL免疫应答 05
03 干扰细胞因子作用
04
抑制宿主细胞凋亡
04 EB病毒参与肿瘤发生发展的分子机制
e 结果观察
胞膜及胞浆阳性
不同疾病免疫组化检测结果
LPM1
NSCHL-LMP1
NK/T-LMP1
03 检测方法—免疫组化
优点 • 简便易行 • 成本较低 • 细胞定位准确
免疫组化
不足
• 稳定性、特异性低 • 易出现假阴性 • 病理诊断参考价值不高 • 阳性率低
EBV血清学诊断及临床应用PPT精品课件
Thanks & any questions
positive reaction
EBNA negative reaction
Virus serology IIFT EBV亲合力检测
Test A 样本缓冲液温育
样本温育(两次) 清洗
Test B 尿素溶液温育
Test A
Test B
清洗 酶结合物温育
Test A
Test B
滴度改变
清洗
滴度相似
低亲合力抗体:
Anti-EBV antibodies: Anti-EBV-EA (IgG)
antibody titer
[weeks]
[months]
symptoms
course of disease
Anti-EBV antibodies: Anti-EBNA (IgG)
antibody titer
[weeks]
M
重组EA-D
• IFT
靶抗原
抗体类型 抗原及来源
CA
IgA/IgG/IgM 表达细胞
EA
IgA/IgG
表达细胞
CA+EA IgA/IgG
表达细胞
EI 2791 EI 2795
FI 2791-2
CA/EA
欧蒙EBV产品线
可实现一次检测多个指标 - EBV Sequence IIFT - ELISA VCA, EBNA, EA - EUROLINE EBV Profile 2
• 方案1：CA-IgA、EA-IgA同时检测，最大限度保证检出率与可靠性。
• 方案2： CA-IgA用于初筛，必要时采用EA-IgA用于验证。
欧蒙解决方案
小儿咽拭子EB病毒DNA-PCR临床应用
肺部 罗音 明显减 少 ， 液 由黏 稠变 稀薄 ， 痰 痰量 明显 减 少 ； 有效 ： 咳嗽 、 咯痰 、 呼 吸困难 症状好 转 ， 部罗 音 减 少 ， 液 由 粘 稠变 稀 薄 ， 量仍 较 多 ； 肺 痰 痰 无 效： 嗽、 咳 咯痰 、 呼吸 困难症 状 无好 转 ， 肺部 罗 音无 减 少 ， 痰液 黏 稠 、 多 。 量 以显 效 、 有效 病例 数计 算 总有效率 。 １ ４ 运 动耐 力评 价标 准 ： 用 ６ｍｉ ． 采 ｎ步 行距 离 评 价运 动 能力 评 定 ， 试验 在具 有急 救条 件 的病 区封 闭走 廊 内进 行 。６ ｉ ｍ ｎ步行 距 离 试验 中患 者 自行决 定运 动强 度 ， 中途可 以休息 。 测试 工 作 由经 过 专业 培 训 的技 术 人员 完成 ， 整个 过程 中避免 不规 范 的语 言鼓 励 ＿ 。 ３ ］ １ ５ 统计 学分析 ： 量 资料 均 以 （ 土ｓ ． 计 ｘ ）表 示 ， 疗 前后 采 用 ｔ 治 检 验 ， 问 比较采 用 Ｔ 分析 ， Ｐ＜０ ０ 表示 差 异有统 计学 意义 。 组 。 以 ．５
改变。
加 入荧光 基 因 ， 利用 时荧 光 信号 积 累 的实 时 检 测 来监 测 整 个 Ｐ Ｒ过 程 ， Ｃ 最 后通 过核 正 曲线 对 未知模 版进 行定 量分 析 。
２ 结 果
２ １ 咽拭子 Ｅ ． Ｂ病毒 ＤＮＡ —Ｐ Ｒ在呼 吸道疾 病 的检 出率见 表 １ Ｃ 。
EB病毒感染的实验室诊断方法及合理运用课件
• 1964年发现，DNA病毒，疱疹 病毒
• 人群感染率高，终身潜伏感染， 具有感染-潜伏-活化的特性
• 肿瘤相关病毒，每年EBV相关 肿瘤死亡病例达15-20万
• 与很多疾病相关，几乎可引起 所有脏器和组织的相关疾病
• 细胞免疫非常重要
Khan G et al. Infectious Agents and Cancer, 2014, 9:38.
Rev. Med. Virol. 2008; 18: 305–319
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
EBV感染的流行病学
• 在我国，EBV的原发感染的高峰年龄在儿童，10岁时 90%以上血清阳性转化
EBV血清抗体阳性转化 率
1
0.8 百 0.6
CA-
分
迟，有的持续缺失或长时间存在 3、12%-17%大于16岁的青少年原发EBV感染后不能检测到CA-IgM 抗
体，且4岁以下幼儿CA-IgM抗体水平低，持续时间短，易见假阴性 结果
Gao Li wei, et al. Chin J Evid Based Pediatr, 2011,6(6):467-470. Robertson P, J Med Virol, 2003,70(4): 617-623
N Engl J Med. 2010;362:1993-2000 World J Pediatr, 2011, 7(1): 45-49
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实验室指标三: EBV特异性抗体
• EBV-CA-IgM 检测
1、近期EBV感染的指标，广泛应用于临床 2、EBV感染的血清学反应复杂多样，有的病例抗EBV-CA-IgM产生 延
EB病毒DNA检测在鼻咽癌中的应用及研究进展
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００１６，Ｃｈｉｎａ． 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＮＰＣ）ｉｓａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍａｌｉｇｎａｎｃｙｗｉｔｈｕｎｅｖｅｎｗｏｒｌｄｗｉｄｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｈｉｇｈ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅｉｎｓｏｕｔｈｅｒｎＣｈｉｎａａｎｄＳｏｕｔｈｅａｓｔＡｓｉａ．ＳｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔＥｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ（ＥＢＶ）ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｓ ｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ａｎｄｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｅｖｅｌｏｆＥＢＶ－ ＤＮＡｗｉｌｌｃｈａｎｇｅｒｅｇｕｌａｒｌｙｄｕｒｉｎｇｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，ｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ＥＢＶ－ＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｉｓ ｏｆｇｒｅａｔｖａｌｕｅｉｎｅａｒｌｙｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，ｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｔｕｍｏｒｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅｏｒｄｉｓｔａｎｔｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ，ａｎｄｉｎｄｉｖｉｄ ｕａｌｉｚｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ．ＴｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆＥＢＶ－ＤＮＡ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｉｎｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａａｒｅｒｅｖｉｅｗｅｄ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，Ｅｐｓｔｅｉｎ－ＢａｒｒｖｉｒｕｓＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ＭｏｄｅｒｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２０１９，２７（２１）：３９０２－３９０５
实时荧光定量检测EB病毒在临床中的应用
实时荧光定量检测EB病毒在临床中的应用作者：李玉香解丽丽林丽付杰张睿来源：《中外医疗》2011年第11期【摘要】目的探讨EB病毒(EBV)荧光定量分析,在儿科上呼吸道感染群体和来自肝损害患者标本的的临床诊断、治疗中的意义。
方法检测EB病毒标本102例,病毒拷贝量在103/mL以上32例,阳性率为31.3%。
其中儿科患者91例,病毒拷贝量在103/mL以上26例,阳性率为28.5%,所测阳性病例中2例为传染性单核细胞增多症;消化科10份标本,病毒拷贝量在103/mL 以上6例,阳性率为60%,其中3例为肝损害。
结果32例阳性患者经对症治疗后复查,27例拷贝量在103/mL以下,其余5例拷贝量亦有明显下降。
结论对标本中病毒进行定量检测,具有更高的特异性,可真实反映出患者体内病原体拷贝数的高低和复制情况,有助于判断疾病预后,选择治疗方案及监测治疗效果。
【关键词】荧光检测EBV 应用价值【中图分类号】 R446.1【文献标识码】 A【文章编号】 1674-0742(2011)04(b)-0103-01EB病毒长期潜伏在淋巴细胞内,以环状DNA形式游离在胞浆中,并整合天染色体内。
EB病毒在人群中广泛感染。
根据血清学调查,我国3～5岁儿童EB病毒vca-lgG抗体阳性率达90%以上,幼儿感染后多数无明显症状,或引起轻症咽炎和上呼吸道感染。
青年期发生原发感染,约有50%出现传染性单核细胞增多症。
主要通过唾液传播,也可经输血传染。
EB病毒在口咽部上皮细胞内增殖,然后感染B淋巴细胞,这些细胞大量进入血液循环而造成全身性感染。
并可长期潜伏在人体淋巴组织中,当机体免疫功能低下时,潜伏的EB病毒活化形成得复发感染。
由EBv感染引起或与EBv感染有关疾病主要有传染性单核细胞增多症、非洲儿童淋巴瘤(即burkitt淋巴瘤)、鼻咽癌。
1实验(1)标本来源:消化内科肝损害(肝脾肿大)、恶心发热患者的标本,儿童发热、咽痛、淋巴结肿大或上呼吸道感染的儿科患者血标本10份。
《EB定量检测》课件
三、EB定量检测实验操作流程
1 准备实验材料
2 样品制备
收集所需的实验材料， 包括EB试剂盒、DNA 样品等。
进行样品处理、提取 DNA，并进行质量检 测。
3 DNA扩增
通过PCR反应扩增待定 量的DNA片段。
4 EB定量检测实验
5 数据分析处理
按照EB定量检测实验的步骤进行操作， 获取定量结果。
优点
• 高灵敏度 • 快速、准确 • 适用于多种实验条件
缺点
发展趋势
• 对质量控制要求高 • 需要专业设备和知识 • 存在一定的误差和风险
探讨EB定量检测技术在高 通量、自动化和便携等方 面的发展趋势。
六、总结
本次课程学习重点回顾
概述本课程的重要内容，回顾所学习的重点知识。
推广与应用前景展望
探讨EB定量检测技术在实际应用中的推广前景和潜在应用领域。
学习建议和后续拓展
给出学习EB定量检测技术的建议，并提供拓展学习资源。
七、参考文献
• 相关文献和资料的引用和推荐
对实验数据进行分析、处理和解读，得 出最终定量结果。
四、EB定量检测的应用案例
作为基因检测工具
介绍EB定量检测在基因检测中的应用，如基因突变检测等。
应用于鉴别诊断
探讨EB定量检测在鉴别诊断领域的应用情况，如病原微生物检测等。
应用于鉴定母源或父源
详细描述EB定量检测在亲子鉴定等领域的应用案例。
五、EB定量检测技术的优缺点与发展 趋势
二、EB定量检测的步骤
1
DNA扩增
2
通过PCR技术扩增待定量的检测目
标DNA片段，提高检测灵敏度。
3
数据分析
4
对实验获取的数据进行分析和解读， 得出定量结果。
EB病毒PCR定量检测ppt课件
二十世纪末被国际抗癌联盟列为Ⅰ类致癌物
3
二、 EB病毒相关疾病
肿瘤性疾病 Burkitt’s lymphoma 伯基特淋巴瘤 （地方性，
100%） Hodgkin’s lymphoma霍奇金淋巴瘤（40%） Nasopharyngeal carcinoma鼻咽癌（地方性，
7
四、血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷 -----术后监控
Clin Cancer Res. 2003 Aug 15;9(9):3254-9.
8
四、血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷 ------复发监控
复发监控
N Engl J Med. 2004 Jun 10;350(24):2461-70.
9
OS vs Plasma EBV DNA
100%） Gastric carcinoma胃癌（10%） 非肿瘤性疾病 Infectious mononucleosis传染性单核细胞增多
症（100%）
4
三、EB病毒与鼻咽癌
鼻咽癌（NPC）属于地方性肿瘤，约80%的患者 分布于中国华南地区及东南亚地区，发病率约为 20-30/100 000人,广东省的发病率最高,又称“广东 瘤”
Head Neck. 2012 Aug;34(8):1064-70
10
五、上市产品情况
公司
类型 灵敏度 线性范围
样品类型
之江生物 定性
全血
样本用量
艾康生物 定量 普瑞康生物 定量
100IU/ml
全血 血清或血浆
圣湘生物 定量
400拷贝/毫升 4.0×102~4.0×109
实时荧光定量检测EB病毒在临床中的应用
103CH INA FO REIGN MEDIC AL TRE ATMENT 中外医疗临 床 医 学EB病毒长期潜伏在淋巴细胞内,以环状DNA形式游离在胞浆中,并整合天染色体内。
EB病毒在人群中广泛感染。
根据血清学调查,我国3～5岁儿童EB病毒vca-lgG抗体阳性率达90%以上,幼儿感染后多数无明显症状,或引起轻症咽炎和上呼吸道感染。
青年期发生原发感染,约有50%出现传染性单核细胞增多症。
主要通过唾液传播,也可经输血传染。
EB病毒在口咽部上皮细胞内增殖,然后感染B淋巴细胞,这些细胞大量进入血液循环而造成全身性感染。
并可长期潜伏在人体淋巴组织中,当机体免疫功能低下时,潜伏的EB病毒活化形成得复发感染。
由EBv感染引起或与EBv感染有关疾病主要有传染性单核细胞增多症、非洲儿童淋巴瘤(即burkitt淋巴瘤)、鼻咽癌。
1 实验(1)标本来源:消化内科肝损害(肝脾肿大)、恶心发热患者的标本,儿童发热、咽痛、淋巴结肿大或上呼吸道感染的儿科患者血标本10份。
91例为儿科以发热、咽炎、腹泻或上呼吸道感染入院。
(2)仪器:7300实时荧光定量PCR仪。
(3)试剂:广州达安基因公司产EBV试剂盒及配套耗材。
(4)操作:抽取患者静脉血2mL,用EDTA-Na 2抗凝,用淋巴细胞分离液分离抗凝血中淋巴细胞,再用D N A 提取液提取淋巴细胞中的E BV —D NA 为模板进行扩增检测。
2 结果检测EB病毒标本102例,病毒拷贝量在103/mL以上32例,阳性率为31.3%,其中儿科患者91例,病毒拷贝量在103/mL以上25例,阳性率为27.4%。
所测阳性病例中2例为传染性单核细胞增多症;消化科10份标本,6例病毒拷贝量在103/mL以上,阳性率为30%,其中3例为肝损害。
32例阳性患者经对症治疗后复查,27例拷贝量在103/mL以下,其余5例比初次检测拷贝量亦有明显下降。
3 讨论(1)EB病毒一般潜伏期为4～7周。
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➢ 在机体免疫功能下降和某些因素触发下，潜伏的EBV可以 被再激活，引起病毒复制及临床疾病。
➢ Burkitts淋巴瘤 何奇金淋巴瘤
EBV感染的抗原表达
EBV溶解性感染期，可表达：
早期抗原（EA）： • EA/R和EA/D（具DNA多聚酶活性）； • EA出现表明EBV活跃增殖，EA抗体出现在感染早期；
衣壳蛋白（VCA） • 晚期表达的结构蛋白 • VCA-IgM出现在急性感染早期，VCA-IgG出现在急性感染期并 持续存在
和/或受累组织包括外周血检测到EBV基因组 3）慢性疾病不能以其他已知的疾病解释
Okana M, et al. Proposed guidelines for diagnosing chronic active Epstein-Barr virus infection. America J Hematol.2005,80:64-69
EBV感染的血清学诊断
传统检测策略的问题
5%新近EBV感染不出现CA-IgM抗体
在罕见的病例中抗CAIgM会持续存在
约20-30%的新近感染不出现EAIgG抗体
抗EBNA-IgG抗体可能呈现阴性，由于： - 慢性活动性EBV感染 - 细胞免疫被抑制
EBV感染的血清学诊断
抗VCA-IgM和IgG可以同时出现，通 常IgG出现较IgM晚，但偶尔较IgM 出现早1~2周，抗VCA-IgM几周后检 测不到
脾肿大、眼睑水肿和皮疹、上腭粘膜出血点 皮疹经常发生于使用氨苄西林、阿莫西林和一些β内酰胺类抗生素1
周后，发生率90% 并发症：粒细胞减少、血小板减少、脾破裂、扁桃体肥大致气道阻塞
、暴发性肝炎、溶血性贫血、再生障碍性贫血、中枢神经系统疾病
慢性活动性EBV感染, CAEBV chronic active EBV infection
EB病毒检测技术进展及临床应用文稿演示
概述
➢ 传播途径：EBV感染主要通过唾液接触传播，也可通过 血液传播；
➢ 人感染EBV后建立终身潜伏感染，人群感染率超过90%。 ➢ 1-6岁儿童、14-20岁青少年及年轻成年人高度易感，发
展中国家EBV感染多发生在儿童早期。
病原学
疱疹病毒科，γ疱疹病毒亚科，淋 巴隐病毒属，人疱疹病毒4型
膜抗原（MA）： • 细胞表面包膜糖蛋白（MA gp350/220,gp85)，是EBV的中和性 抗原 • 抗MA-IgM可用于早期诊断
EBV感染的抗原表达
EBV潜伏感染期，选择性表达早期抗原以及：
核抗原（EBNA-1,-2,-LP,-3A,-3B,-3C）：
• 为DNA结合蛋白，在感染的B细胞核内； • EBNA-1与感染有关，EBNA-2与细胞转化和永生化有关； • EBNA抗体出现在感染晚期。
肿大、持续性肝炎、广泛性淋巴结肿大 EBV感染的NK和T细胞克隆扩增在CAEBV具有重要意义 通常是一种肿瘤前状态或者与严重免疫缺陷有关，可进一
步引起EBV相关的T/NK细胞增殖性疾病 预后差，病死率高
CAEBV的诊断标准
1）持续性或反复发作的IM样症状 2）异常升高的抗VCA-IgG和EA-IgG
EBV常见相关疾病
➢ 传染性单核细胞增多症 （Infectious mononucleosis,IM)
➢ 慢性活动性EB病毒感染 （Chronic active EBVinfection，CAEBV）
➢ EB病毒相关性嗜血细胞综合征 （EBV-associated hemophagocytic syndrome, EBVAHS)
抗EA-IgG在发病后3-4周后升高， 3~4月后检测不到
抗EBNA-1-IgG在发病后3~4周被检 测到，持续终身，部分慢性EBV感 染者检测不到
抗VCA-IgG和抗EBNA-1-IgG终生持 续阳性
EBV常见相关疾病
传染性单核细胞增多症(IM) infectious mononucleosis
球形双链DNA病毒，基因组平均 大小约为172 kb
EBV致病机制
➢ 原发EBV感染时，EBV先是在口咽部上皮细胞内增殖， 然后感染附近的B淋巴细胞，受到感染的B淋巴细胞进 入血液循环可以造成全身性感染。
➢ EBV原发感染后，大多数无临床症状，尤其是6岁以 下幼儿大多表现为隐性或轻型发病，但在儿童期、青 春期和青年期 ，约50%的原发性感染均表现为IM。
1975年Horwitz首次描述一些持续性IM患者血清存在高滴 度的抗EBV-VCA和EA抗体
1982年Tobi进一步描述并证实该病 1984年被称为慢性单核细胞增多样综合征 1986年被定义为慢性症状性EBV感染 1991年被称为慢性活动性EBV感染
CAEBV
发生于儿童或年轻成年人 该病表现为慢性或反复的单核细胞增多样症：发热、肝脾
➢ 特指由EBV感染引起的发热、咽炎和淋巴结肿大的综合征 ➢ 1889年被首次描述为“glandular fever” ➢ 1920年正式定义为IM ➢ 1932年发现嗜异性凝集实验 ➢ 1968年实验室工作人员感染EBV，出现IM临床症状和嗜
异性凝集抗体，明确EBV是IM的病原
IM临床表现
25-30%的青少年和<30岁的成年人原发感染EBV后表现IM 儿童时期EBV感染多为亚临床型或不典型症状 临床症状：发热、淋巴结肿大、扁桃体炎（灰白色渗出）、咽炎、肝
潜伏膜蛋白（LMP-1,-2A,-2B）：
• 在感染B细胞表面，与细胞恶化有关，
未翻译的转录物BARF0和EBER EBNA-3、EBNA-2、LMP-1是EBV-CTL CD8+的主要目标
原发性EBV感染过程中首先产生针对 衣壳抗原（capsid antigen, VCA） IgG和IgM，在急性感染的晚期，抗 早期抗原（early antigen, EA）抗体 出现在恢复期晚期，抗核抗原 （nuclear antigen, NA）抗体产生， 抗VCA-IgG和抗NA-IgG可持续终身