双抗配置方法

细胞培养用青霉素-链霉素(Penicillin-Streptomycin for Cell Culture)为粉剂，是最常用的细胞培养用抗生素(即通常所谓的双抗)。

在细胞培养液中推荐的青霉素的工作浓度为100U/ml，链霉素的工作浓度为0.1mg/ml。一个包装的细胞培养用青霉素-链霉素可以配制80L细胞培养液。

大家好，我的双抗颜色变了，以前都是买的，现在想配制一些，具体应该怎么配制呢？请教各位。谢谢！

双抗的配置：

用1X浓度的盐溶液配置成100X或者200X的贮存液（一般用100X），分装成小瓶，冰冻保存。使用前根据培养液的量，加入到培养瓶内，每小瓶最好一次用完。

青霉素与链霉素在培养液中的用量分别为100U/ml培养液与100ug/ml培养液（100U/ml）。

我的配置方法：

100ml瓶内，装入90ml1640 10ml小牛血清，再向内加入100W单位链霉素（一小瓶链霉素就是100W单位）。然后去除20ml液体，剩余80ml，然后用这80ml 液体来溶解80W单位的青霉素（一小瓶青霉素是80W单位）。但使用之前请看明白各位用的青霉素和链霉素每小瓶都是多少单位的，别用错哦。然后80ml分装成80小瓶就行了。

最简单的方法：

临床应用的注射用青霉素是80万单位/瓶，硫酸链霉素是100mg/瓶。

向青霉素瓶中加4ml超纯水，硫酸链霉素瓶中加5ml超纯水，分别溶解。

然后取4ml硫酸链霉素溶液放入青霉素瓶中，混匀，就配成1000X的双抗溶液啦，过滤除菌后分装到1.5ml的试剂保存管中-20度冻存。

1000X的双抗在培养基中加入液体量少，对培养基的扰动小。而且使用灵活，还可以做其他用途。配制一次成本不到10元钱。

呵呵，我还要懒~~！！

把适量无菌PBS分别溶解青霉素和链霉素，是用无菌一次性的针管溶解的~~！！

然后把它们转移到消毒好的小广口瓶中，慢慢的把PBS加到80ml即可~~！！

这样青霉素的正好是1W单位/ml，链霉素浓度高了点，但对细胞没什么影响~~！！

把配好的双抗分装，不用的冻起来好了~~！！

对一般细胞0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)

配方：100ml PBS,0.25g胰酶

步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O

/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)

2 称胰酶0.25g

3 加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜

低速搅拌0.5h冰浴中

4 调PH7.4

5 仍在冰浴中

6 过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完

tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，

酶就变性了。低温，防止酶失活

对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)

tip:因为EDTA可以络合Ca2+，增加消化效力