实验三 PCR技术及产物鉴定
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
PCR反应五要素
引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
实验步骤 •配置PCR反应液于PCR管中
反应液加毕, 混匀，最后瞬时离心把反应液全部 集中于PCR管底部。
２.PCR反应：按以下条件进行PCR反应
94℃ 55℃ 72℃
30 sec 30 sec 30 sec
28 Cycles
3.电泳（鉴定） 反应结束后，取3μl反应液，加入少量Loading
buffer混匀，进行1％的琼脂糖凝胶电泳（150V）。 （Marker由老师操作）。
4.结果观察 取出凝胶，在凝胶成像仪内观察扩增结果（约为
500bp DNA片段）。
思考题
简述以下PCR技术原理及主要应用 原位PCR 定量PCR
反转录PCR 巢Байду номын сангаасPCR 多重PCR
下次实验
PCR产物回收及鉴定
实验三 PCR技术及产物鉴定
实验原理
PCR（polymerase chain reaction）即聚合酶 链式反应。其基本原理类似于DNA的天然复制过程， 其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时 间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解 离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应 作准备；
②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性 成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链 的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶 的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱 基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。重复循环变性--退火--延伸 三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这 种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大 几百万倍。
引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
实验步骤 •配置PCR反应液于PCR管中
反应液加毕, 混匀，最后瞬时离心把反应液全部 集中于PCR管底部。
２.PCR反应：按以下条件进行PCR反应
94℃ 55℃ 72℃
30 sec 30 sec 30 sec
28 Cycles
3.电泳（鉴定） 反应结束后，取3μl反应液，加入少量Loading
buffer混匀，进行1％的琼脂糖凝胶电泳（150V）。 （Marker由老师操作）。
4.结果观察 取出凝胶，在凝胶成像仪内观察扩增结果（约为
500bp DNA片段）。
思考题
简述以下PCR技术原理及主要应用 原位PCR 定量PCR
反转录PCR 巢Байду номын сангаасPCR 多重PCR
下次实验
PCR产物回收及鉴定
实验三 PCR技术及产物鉴定
实验原理
PCR（polymerase chain reaction）即聚合酶 链式反应。其基本原理类似于DNA的天然复制过程， 其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时 间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解 离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应 作准备；
②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性 成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链 的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶 的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱 基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。重复循环变性--退火--延伸 三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这 种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大 几百万倍。