临床微生物学与检验第三章细菌感染的病原学诊断

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第四节 细菌的非培养检测方法
二、分子生物学检测 （一）核酸杂交
DNA可进行变性、复性、杂交。我们利用这一 特性，制备特定序列DNA片段，进行标记后用作 探针，在一定条件下，按照碱基互补配对原则与 标本中已变性的细菌DNA进行杂交，通过检测杂 交信号确定是否发生杂交反应，从而鉴定标本中 有无相应的病原菌基因。
8 ． CAMP试验 在链球菌中，只有B群
链球菌CAMP试验阳性， 故可作为特异性鉴定。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（五）抑菌试验 1． O/129抑菌试验
用于弧菌科的属间鉴别，弧菌属、邻单胞菌属 对O/129敏感，而气单胞菌属耐药。 2．杆菌肽试验 用于A群链球菌与非A群链球群的鉴别。 3．奥普托欣（Optochin）试验 主要用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别。
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第四节 细菌的非培养检测方法
一、免疫学检测 （二）抗体检测
抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价的 升高。因此用已知的细菌或其特异性抗原检测病人 血清中有无相应抗体及其效价的动态变化，可作为 某些传染病的辅助诊断。主要适用于抗原性较强的 致病菌和病程较长的感染性疾病。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
2．氧化―发酵试验（O/F试验） 主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴
别，前者均为发酵型，而后者通常为氧化型 或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的 鉴别。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
3．β―半乳糖苷酶试验（ONPG试验） 迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为
阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验 主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
4．七叶苷水解试验 主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别。
5．甲基红试验 主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌。
6．V―P试验 本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的 细菌，后者通常为阴性。
革兰阳性球菌
革兰阴性杆菌
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第二节 细菌的形态学检查
2．抗酸染色 （acid-fast stain） 可将细菌分为两大类： 即-抗酸性细菌 -非抗酸性细菌
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第二节 细菌的形态学检查
3．荧光染色 （1）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察
结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。 （2）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白
初步识别和分类 4.通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊
断和治疗疾病有一定的参考意义
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第二节 细菌的形态学检查
一、不染色标本 1.细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态
下细菌的动力及运动状况 2.常用的方法有压滴法和悬滴法
有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显 的方向性位移
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（三）碳源和氮源利用试验 1．枸橼酸盐利用试验
用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。 2．丙二酸盐利用试验
肠杆菌科中属间及种的鉴别。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（四）各种酶类试验 1．氧化酶试验
主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别。 2．过氧化氢酶试验（触酶试验）
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第四节 细菌的非培养检测方法
二、分子生物学检测 （一）核酸杂交
1. 探针的种类 （1）全染色体DNA探针 （2）染色体克隆片段DNA探针 （3）质粒DNA探针 （4）rRNA基因探针 （5）寡核苷酸探针
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第四节 细菌的非培养检测方法
2．核酸杂交在临床细菌检测中的应用 （1）细菌分类鉴定 （2）细菌快速鉴定 （3）细菌耐药性的检测 （4）细菌毒素的检测 （5）细菌流行病学调查
平板等
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
3．鉴别培养基（diferential medium） 糖发酵管、克氏双糖铁 琼脂（KIA）、伊红-镁 蓝琼脂和动力-吲哚-尿素 （MIU）培养基等。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
4．选择培 （selective medium） SS琼脂使致病的沙门菌、 志贺菌容易分离到
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（三）培养基的选择 从血液、骨髓中
分离病原菌用血液增 菌培养基
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
二、分离及培养 （一）细菌的分离
1．平板划线分离法 2．斜面接种法 3．液体接种法
4．穿刺接种法 5．倾注平板法 6．涂布接种法
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
一、培养基的种类和选择 培养基（culture medium）
是由人工方法配制而成的， 专供微生物生长繁殖使用 的混合营养物制品。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
(一)培养基的组成成分 1．营养物质
蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、 无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子 2．凝固物质 琼脂、明胶、卵白 3．抑制剂和指示剂
二、染色标本 （一）常用染料 1．碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等 2．酸性染料：有伊红、刚果红等 3．复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有
瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青） 等；荧光染料有荧光标记的抗体
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第二节 细菌的形态学检查
（二）常用的染色方法 1．革兰染色（gram stain）
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
1．基础培养基 含有基础生长所需的基本
营养成分，最常用的是肉浸 液，俗称肉汤（broth），主 要成分含牛肉浸液和蛋白胨。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
2．营养培养基（nutrient medium） 最常用的是血琼脂平板、巧克力血
用于革兰阳性球菌的初步分群。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
3．硝酸盐还原试验 本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细
菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、 嗜麦芽假单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌 氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（二）培养基种类 1．基础培养基（based medium） 2．营养培养基（nutrient medium） 3．鉴别培养基（diferential medium） 4．选择培养基（selective medium） 5．特殊培养基（special medium）
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第四节 细菌的非培养检测方法
（二）聚合酶链反应 （ polymerase chain reaction,PCR ）
1. 特异性DNA体外扩增技术 2. 特异、灵敏、快速、操作简便 3. 广泛应用于细菌的鉴定
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第四节 细菌的非培养检测方法
PCR在临床细菌检测中的应用 1. 细菌的快速检测 2. 细菌毒素的检测 3. 细菌耐药性的检测 4. 细菌流行病学调查
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
4．尿素分解试验 主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。
5．苯丙氨酸脱氨酶试验 主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、
普罗菲登斯菌属和摩根菌属细菌均为阳性，肠 杆菌科中其他细菌均为阴性。
6．氨基酸脱羧酶试验 主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。
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喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。
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第二节 细菌的形态学检查
4.鞭毛染色 可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数
量，在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中 很重要。 5.异染颗粒染色
用于白喉棒状杆菌染色。
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第二节 细菌的形态学检查
6.芽胞染色： 绿色部分 为芽胞
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验 1．明胶液化试验
主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。
2．吲哚(靛基质)试验 主要用于肠杆菌科细 菌的鉴定。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
3．硫化氢试验 培养基：醋酸铅培养基 应用：主要用于肠杆菌 科中属及种鉴别
第三章 细菌感染的病原学诊断
褚云卓
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本章内容
第一节 标本的采集和处理原则 第二节 细菌的形态学检查 第三节 细菌的分离培养和鉴定 第四节 细菌的非培养检测方法
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５.病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全 防护
６.标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装 好，防止送检过程中倒翻或碰破流出
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（二）细菌培养方法 1．需氧培养法 2．二氧化碳培养法 3．厌氧培养法
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
三、生化反应和鉴定 （一）碳水化合物的代谢试验
1. 糖（醇、苷）类发酵试验 是鉴定细菌最主要和最基