肉苁蓉有效成分提取集成方法的研究

武汉植物学研究!""#$!%&’()*!’+*#", ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, -./0123.45/6217.8219:23;<=<20:6肉苁蓉有效成分提取集成方法的研究欧阳杰$赵兵$王晓东$王玉春&中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室$北京%""">"(摘要)研究了肉苁蓉&?@A B C D E F G H G A G I B@E J K CL M N M OP(中有效成分苯乙醇糖甙类化合物Q甜菜碱和肉苁蓉多糖提取的集成方法R肉苁蓉先后用甲醇和水超声破碎提取$然后经大孔吸附树脂S T U>柱和强酸型阳离子交换树脂""%V W柱洗脱以及X Y Z[P\Y]^U W*凝胶柱层析$可以分别得到苯乙醇糖甙类化合物*!_#‘a Q甜菜碱%!*_’‘a和肉苁蓉多糖!b_*‘a$其回收率分别为’b_b cQ d!_d c和*#_*cR该法的优点是将肉苁蓉中#种有效成分的提取方法集成起来$具有经济Q高效的特点R关键词)肉苁蓉e苯乙醇糖甙类化合物e甜菜碱e肉苁蓉多糖e提取中图分类号)f g b’e g!>b M!文献标识码)S文章编号)%"""U b W"h&!""#("’U"*!’U"*i jk j l m n o p l m qrm l s t qu t o l s m v w l o p x l y t jt u v u u m x l y z m{|}~l p j x m~u o t!"9=821:6<#<=<089:.32$%L S&^’(Y$)*S$T(+a$,S&^h(P-U.-+a$,S&^L/U N[/+&0B C B G1G23C4J I C B J I2J56@J E F G7@E C K8D9@D G G I@D9$:D A B@B;B G J5<I J E G A A8D9@D G G I@D9$=F G?F@D G A G>E C H G72J50E@G D E G A$T Y(?(+a%""">"$N[(+P(i}~l o p x l)S+(+@Y a A P@Y\‘Y@[-\B-A@[YY]@A P C@(-+-B Z[Y+D E Y@[P+-(\a E D C-F(\Y F&G Y^($H Y@P(+Y P+\Z-E D F P C C[P A(\Y B A-‘?@A B C D E F G H G A G I B@E J K C I P F(+J Y F@(a P@Y\M^A P+/E P A?M H G A G I B@E J K C I P F@A Y P U @Y\I(@[‘Y@[P+-E P+\I P@Y A/+\Y A/E@A P F-+(CI P J Y$P+\@[Y+@[Y B(E@A P@Y I P F Z P F F Y\@[A-/a[‘P C A-A Y@(C/E P A A Y F(+&S T U>(C-E/‘+$F@A-+a U P C(\(C C P@(-+Y]C[P+a Y A Y F(+&""%V W(C-E/‘+P+\ X Y Z[P\Y]^U W*C-E/‘+F/C C Y F F(J Y E D M K A-‘I[(C[*!_#‘a G Y^$%!*_’‘a H Y@P(+Y P+\!b_*‘a ?M H G A G I B@E J K CZ-E D F P C C[P A(\Y I Y A Y-H@P(+Y\$P+\@[Y A Y C-J Y A DI Y A Y’b_b c$d!_d c P+\*#_*cA Y F Z Y C@(J Y E D ML m M N t o q~)?@A B C D E F G H G A G I B@E J K C e G[Y+D E Y@[P+-(\a E D C-F(\Y F e T Y@P(+Y e G-E D F P C C[P A(\Y e O]@A P C@(-+肉苁蓉&?@A B C D E F G H G A G I B@E J K CL M N M OP(为列当科肉苁蓉属多年生高等寄生植物$其味甘咸微辛酸Q微温$在P神农百草经Q中列为上品$具有补肾益精Q润肠通便和延缓衰老等功效$被誉为R沙漠人参S R 肉苁蓉中主要的活性成分是苯乙醇糖甙类化合物&G[Y+D E Y@[P+-(\a E D C-F(\Y F$G Y^(Q肉苁蓉多糖和甜菜碱R其中G Y^主要包括海胆甙Q麦角甾甙Q!T U乙酰麦角甾甙和肉苁蓉甙S R这几种有效成分的药理作用各不相同$G Y^的主要作用是调节内分泌$促进代谢和强壮作用以及清除自由基和抗衰老作用e肉苁蓉多糖可以增强机体的免疫功能e甜菜碱具有抗脂肪肝和抗肿瘤以及扩张外周血管和降压作用U%$!V R 目前在中药有效成分的提取中$一般都是单独研究一种主要有效成分的提取方法$而将多种有效成分综合考虑$进行集成化提取的研究较少R笔者研究肉苁蓉中#种有效成分苯乙醇糖甙类化合物Q肉苁蓉多糖和甜菜碱提取的集成方法$以达到经济Q高效的目的R收稿日期)!""#U"b U%"$修回日期)!""#U"*U!#R作者简介)欧阳杰&%d W%W($男$湖南安仁人$博士研究生$主要从事植物细胞培养和天然产物提取研究R 万方数据!材料与方法!"!材料!"!"!植物材料将肉苁蓉肉质茎于烘箱中#$%烘&’()用粉碎机粉碎)过’$目筛)干燥处储存备用*!"!"+化学试剂和仪器苯乙醇糖甙标准品由本实验室按堵年生,-.的方法自制*化学试剂/012(34156789:;(3<=3>?3公司@A大孔吸附树脂B C7D A强酸型阳离子交换树脂$$E F8:南开大学树脂厂@)其它化学试剂均为分析纯*实验仪器/超声波细胞粉碎机:G H I I7&J)宁波新芝科器研究所@A89&分光光度计:上海精密科学仪器厂@)&9=K层析柱规格为E>=F’9>=*!"+方法!"+"!苯乙醇糖甙类化合物的含量测定;16在--&L=处有强吸收峰,’.)由此可绘制标准曲线)标准曲线方程为/M J--&L=N$O$$D9P$O$E&&D Q E:Q E/苯乙醇糖甙的浓度)R S T=K@*将肉苁蓉提取液浓缩至膏状)加适量水溶解)经乙酸乙酯脱脂后)用正丁醇萃取*浓缩萃取液)稠膏再用水混悬)通过大孔吸附树脂B C7D*先后用水和甲醇洗脱)收集甲醇部分)然后稀释适当倍数)测定其在--&L=下的M J值)即可计算出肉苁蓉中;16的提取量*!"+"+肉苁蓉多糖的含量测定苯酚7硫酸法)以无水葡萄糖为对照品,9.*标准曲线方程为/M J’I$L=N U$O$E-’I P E&O9E-8E Q&:Q&/多糖的浓度) R S T=K@*!"+"V甜菜碱的含量测定按比色法测定,#.*分别吸取浓度为&=S T=K的标准甜菜碱溶液E A&A-A ’A9=K于&9=K带塞试管中)不足9=K的用蒸馏水补足至9=K*滴加E$=K雷氏盐:W1?L1>X1Y3Z[@饱和溶液)将混合液在冰水中冷却E()然后在真空下用玻璃砂芯漏斗过滤*用无水乙醚洗:-F&=K@试管和沉淀*沉淀中的乙醚挥发干后)用8$\丙酮溶解并移至&9=K容量瓶中)并用其定容至&9=K)摇匀)在9&9L=处以8$\丙酮为空白测定吸光度)绘制标准曲线*标准曲线方程为/M J9&9L=N$O$$#8#P $O$’9E E Q-:Q-/甜菜碱的浓度)=S T=K@*测定提取液中的甜菜碱时)取9=K提取液到&9=K三角瓶中)加蒸馏水E$=K)调2]E O$)定容至&9=K容量瓶中*取9=K上述溶液)按标准曲线操作* !"+"^苯乙醇糖甙和甜菜碱提取溶剂的选择准确称取肉苁蓉粉末各E O$S)分别加入#$=K甲醇A #$=K乙醇和#$=K水)室温下浸提)分别于&A’A D AE#A&’A-&(时测;16和甜菜碱的提取量* !"+"_肉苁蓉有效成分提取的集成方法将E S肉苁蓉粉末加#$=K甲醇进行超声波破碎浸提:#$$‘破碎&$=?L@)浸提液过滤后得滤液和滤渣)滤液减压浓缩至膏状)用E$=K水混悬后过大孔吸附树脂:B C7D@柱)先用水洗脱)然后再用甲醇洗脱*将含有;16的甲醇洗脱液集中)减压浓缩后即得苯乙醇糖总甙*将水洗脱液:&$=K@和滤渣合并在一起)再加’$=K蒸馏水)再次进行超声波破碎浸提:#$$‘破碎&$=?L@)过滤*滤液:共#$=K@过强酸型阳离子交换树脂:$$E F8@柱)先用’$=K蒸馏水洗脱)再用#$=K的&=a Z T K]Q Z洗脱*将含有甜菜碱的]Q Z洗脱液集中)再减压浓缩干燥可得到甜菜碱盐酸盐*水洗脱液经01b3S法除蛋白)活性炭脱色后加乙醇沉淀)沉淀物即为肉苁蓉粗多糖*粗多糖用E$=K水溶解后)过012(34156789凝胶柱层析)用蒸馏水洗脱)收集含多糖的洗脱液)即为肉苁蓉多糖*+结果与讨论+"!不同溶剂对苯乙醇糖甙和甜菜碱提取的影响不同溶剂对苯乙醇糖甙和甜菜碱提取的影响结果如图E和图&所示*甲醇对肉苁蓉中;16的提取率远高于乙醇和水*甲醇在室温下浸提D(后)肉苁蓉中的;16的提取量为#8O9=S T S c水对甜菜碱的提取效果明显好于甲醇)D(后测得甜菜碱的提取量E-$O D=S)而甲醇浸提甜菜碱的提取量为I I O D=S)甲醇的提取量为水提取的8#O-\*因此在提取肉苁蓉中;16时以甲醇作提取溶剂)而提取肉苁蓉有效成分提取集成方法的研究万方数据图强酸性阳离子交换树脂对甜菜碱的洗脱曲线卷万方数据后过滤!在滤液中加入"#$%&的’()乙醇*+,下静置-+.*/$$$01%23离心"(%23*收集沉淀*烘干后得肉苁蓉粗多糖//4#%5!67876肉苁蓉多糖的精制将64849得到的粗多糖溶液用"$%&水溶解*过:;<.=>;?@A B(凝胶柱层析*以C$%&蒸馏水洗脱*流速为$4(%&1%23*每管(%&*洗脱曲线如图(所示!将肉苁蓉多糖洗脱峰/DC管集中*减压浓缩干燥后可得肉苁蓉多糖-+4(%5!由索氏抽提法E"$$,*#.F测得肉苁蓉多糖的含量为+(4#%515*因此多糖的回收率为(/4()!肉苁蓉中有效成分苯乙醇糖甙G甜菜碱和肉苁蓉多糖的集成提取方法如图C所示!经过集成提取*可图H I J K L M N J OP Q R H 凝胶柱层析洗脱曲线肉苁蓉有效成分提取集成方法的研究万方数据以从!"肉苁蓉中分离到#$%&’"苯乙醇糖甙类化合物(!$#%)’"甜菜碱和$*%#’"肉苁蓉多糖+其回收率分别为)*%*,(-$%-,和#&%#,.参考文献/0!1李琳琳+王晓雯+王雪飞+等2肉苁蓉总苷的抗脂质过氧化作用及抗辐射作用0312中国中药杂志+!--4+556)7/&)*&)420$1薛德钧+章明+吴小红+等2肉苁蓉抗衰老活性成分的研究0312中国中药杂志+!--#+586!!7/)94)9-20&1堵年生+王泓+易杨华2肉苁蓉中苯乙醇甙类化合物的分离和鉴定0312天然产物研究与开发+!--&+:6*7/#920*1堵年生+刘峻岭2大孔吸附树脂;;紫外分光光度法测定肉苁蓉苯乙醇糖甙类的含量0312天然产物研究与开发+!--&+:6&7/&<&&20#1张惟杰2复合多糖生化研究技术0=12上海/上海科技出版社+!--#2)420)1李优琴+高家骅+周维仁+等2比色法测定合成甜菜碱的含量0312江苏农业学报+!---+>:6$7/!$4!$92<&#武汉植物学研究第$!卷万方数据。