盐析法沉淀蛋白质的原理
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盐析法沉淀蛋白质的原理如下:
蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质和水周围的亲水基团形成的水合膜的程度,以及蛋白质分子带电的条件。当蛋白质溶液中加入中性盐时,中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质,因此蛋白质分子周围的水合膜减弱甚至消失。同时,在蛋白质溶液中加入中性盐后,由于离子强度的变化,蛋白质的表面电荷被大量中和,这导致蛋白质溶解度降低以及蛋白质分子的聚集和沉淀。在某些情况下,最好添加饱和溶液。但是添加固体和添加液体实际上是相同的。仅当固体相对于液体时,体积才会减小,浓度才会增大。
考虑到少量的蛋白质溶液,当添加饱和硫酸铵溶液时,硫酸铵溶液的质量分数仅降低一点。当添加固体时,因为温度恒定,所以硫酸钠的溶解度是确定的。因此,添加的硫酸钠固体最终变成饱和溶液和不再溶解的固体。当添加饱和溶液时,不必担心pH值,但是当添加固体时,它仅比饱和溶液的pH值大一点,即使可以忽略不计。
使用固体的优点是液体的体积几乎不变,蛋白质溶液的体积不变,每单位体积的可溶性蛋白质也不变,并且由于存在硫酸铵,溶解度降低并沉淀。添加液体会增加溶液的体积。这样,尽管存在硫酸铵,但由于溶质恒定且溶剂增加,因此不可避免地该溶液中蛋白质的可溶性量会增加。