分子诊断技术ppt课件
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分子诊断与基因检测的临床应用ppt课件
• 分子诊断及基因诊断在遗传学中的应用进展 • 分子诊断及基因诊断在肿瘤学中的应用进展
本标准适用于已投入商业运行的火力 发电厂 纯凝式 汽轮发 电机组 和供热 汽轮发 电机组 的技术 经济指 标的统 计和评 价。燃 机机组 、余热 锅炉以 及联合 循环机 组可参 照本标 准执行 ，并增 补指标 。
基因与肿瘤细胞生物学各个方面均有关
细胞增殖 血管新生
与细胞外基质的黏附 局部侵犯
进入血管内、存活、 外渗
未知功能的基因 (25)
与细胞外基质的黏附 细胞增殖
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分子诊断及基因检测 在临床中应用的进展
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文献检索及学术趋势
检索策略：查询2012-2018年间，以“gene diagnostic” or “molecular diagnostic”为关键词；主要查找遗传学领域文献和肿瘤学领域的文献，发 表文献量较大，在两个领域中均有广泛应用
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基因与肿瘤细胞生物学各个方面均有关
细胞增殖 血管新生
与细胞外基质的黏附 局部侵犯
进入血管内、存活、 外渗
未知功能的基因 (25)
与细胞外基质的黏附 细胞增殖
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分子诊断及基因检测 在临床中应用的进展
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文献检索及学术趋势
检索策略：查询2012-2018年间，以“gene diagnostic” or “molecular diagnostic”为关键词；主要查找遗传学领域文献和肿瘤学领域的文献，发 表文献量较大，在两个领域中均有广泛应用
本标准适用于已投入商业运行的火力 发电厂 纯凝式 汽轮发 电机组 和供热 汽轮发 电机组 的技术 经济指 标的统 计和评 价。燃 机机组 、余热 锅炉以 及联合 循环机 组可参 照本标 准执行 ，并增 补指标 。
分子诊断的临床应用课件
分子诊断的临床应用
结 果 95例患者的尿沉渣形态学检查，35例患者的尿沉
尿液中BK病毒核酸定量检测14例尿液中检测到BKV DNA，病毒载量为4×103～2×109/ml，平均为5.6×105/ml。发生病毒尿的中位时间为移植术后14个月。
分子诊断的临床应用
尿液中BK病毒核酸定量检测分子诊断的临床应用42
分子诊断的临床应用
decoy细胞分子诊断的临床应用36
巴氏染色的decoy细胞
未经染色的decoy 细胞
分子诊断的临床应用
巴氏染色的decoy细胞未经染色的decoy 细胞分子诊断的
BK病毒感染的检测
BK病毒的检测血、尿中BK病毒核酸定量检测尿液中decoy细胞检查尿沉渣涂片原位杂交组织病理学检查（判断肾脏间质性肾病）
分子诊断的种高危型HPV。分子诊断的临
细胞学检查结果为意义不明确的非典型细胞时，HPV基因的检测能预测受检者患宫颈癌的风险。细胞学检查+HPV基因的检测是宫颈癌前病变和宫颈癌筛查的最佳方法，成为预防宫颈癌的关键。
分子诊断的临床应用
细胞学检查结果为意义不明确的非典型细胞时，HPV基因的检测能
分子诊断的临床应用
DNA重组技术(DNA recombination)
分子诊断不仅能早期对疾病作出确切的诊 断，也能确定个体对疾病的易感性，判别 致病基因携带者并对疾病的分期、分型、 疗效监测和预后作出判断。分子诊断已成为实验诊断学的一个重要组 成部分，成为一门新的学科。Molecular diagnosis Molecular diagnostics
在美国，10岁以上的正常人群中60%～80%有BK病毒感染史。感染的病毒多潜伏于肾小管上皮细胞和尿道上皮细胞中。BK病毒重新激活大部分是由于免疫机制缺陷或大量使用免疫抑制剂后。
结 果 95例患者的尿沉渣形态学检查，35例患者的尿沉
尿液中BK病毒核酸定量检测14例尿液中检测到BKV DNA，病毒载量为4×103～2×109/ml，平均为5.6×105/ml。发生病毒尿的中位时间为移植术后14个月。
分子诊断的临床应用
尿液中BK病毒核酸定量检测分子诊断的临床应用42
分子诊断的临床应用
decoy细胞分子诊断的临床应用36
巴氏染色的decoy细胞
未经染色的decoy 细胞
分子诊断的临床应用
巴氏染色的decoy细胞未经染色的decoy 细胞分子诊断的
BK病毒感染的检测
BK病毒的检测血、尿中BK病毒核酸定量检测尿液中decoy细胞检查尿沉渣涂片原位杂交组织病理学检查（判断肾脏间质性肾病）
分子诊断的种高危型HPV。分子诊断的临
细胞学检查结果为意义不明确的非典型细胞时，HPV基因的检测能预测受检者患宫颈癌的风险。细胞学检查+HPV基因的检测是宫颈癌前病变和宫颈癌筛查的最佳方法，成为预防宫颈癌的关键。
分子诊断的临床应用
细胞学检查结果为意义不明确的非典型细胞时，HPV基因的检测能
分子诊断的临床应用
DNA重组技术(DNA recombination)
分子诊断不仅能早期对疾病作出确切的诊 断，也能确定个体对疾病的易感性，判别 致病基因携带者并对疾病的分期、分型、 疗效监测和预后作出判断。分子诊断已成为实验诊断学的一个重要组 成部分，成为一门新的学科。Molecular diagnosis Molecular diagnostics
在美国，10岁以上的正常人群中60%～80%有BK病毒感染史。感染的病毒多潜伏于肾小管上皮细胞和尿道上皮细胞中。BK病毒重新激活大部分是由于免疫机制缺陷或大量使用免疫抑制剂后。
现代分子诊断技术ppt课件
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4
• 非放射性杂交检测系统： 通过酶促反应将某种底物转变成生色物质或化学
发光物质而达到放大信号的目的 • 采用将生物素（biotin）标记的核苷酸掺入DNA的方
法制备探针 • 生物素标记的DNA在室温下至少可保存一年 • 检测发光和颜色变化可在几小时内完成
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5
生物素 B
探针
目的DNA
B
加入链霉素抗生物蛋白
加入生物素标记的碱性磷酸酶
B
B AP
加入不同的生色或化学发光底物
B
B AP
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6
荧光标记的引物直接进行PCR检测
引物1
DNA
PCR
引物2
荧光染料
层析
游离引物
荧光检测
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7
• 分子夹心探针检测
分子夹心探针 (没有荧光)
荧光团
猝灭剂
与目的DNA杂交
• 每个重复序列在300个核苷酸长度之内，由于高度重复，序 列经过超离心后以卫星带出现在主要DNA带的附近，所以也 称卫星DNA，其中的重复序列单元则称为“小卫星DNA”
• “小卫星”具有高度的可变性，但在“小卫星DNA “中有 一小段序列则在所有个体中都一样，称为“核心序列”。如 果把核心序列串联起来作为分子探针与不同个体的DNA进行 分子杂交，就会出现各自特有的杂交图谱。它们与人的指纹 一样具有专一性和特异性，因此称作“DNA指纹”
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10
例一：疟疾的分子诊断：
• 检测是否存在疟原虫
1. 抽取血样进行镜检 2. 免疫诊断:ELISA检测疟原虫蛋白或抗体
无法区分是以前感染还是现在感染
分子诊断技术的临床应用ppt课件
二、PCR概述
PCR技术能在一个试管内将所要研究的 目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至 十万乃至百万倍，使肉眼能直接观察和判 断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细 胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴 定。
PCR 发展简史
1983 Mullis于12月16日成功发明了PCR 1985 关于PCR 的文章首次由 Mullis及其同事等人 在
测 优生优育项目诊断：人巨细胞病毒（HCMV）、单纯疱
疹病毒（HSV）、弓形虫（TOX）、风疹病毒（RUB） 其它病原体检测：结核杆菌、肺炎支原体、EB病毒、
伤寒杆菌、幽门螺旋杆菌等
常规结核病实验室诊断方法及不足
1. 痰涂片作抗酸染色：阳性率低 、费时 2. 细胞培养“金标准”：周期太长(4-8W) 3. 血清学诊断：
的平衡点。
总结
分子诊断学的快速发展，得益与分子诊断技术 的日新月异。1990年启动的人类基因组计划的完 成经历了十三年的时间，而2007启动的1000人基 因组计划的完成却只用了3年，人类了解自然密 码的速度正在跨上快速列车。检验医学以提供精 密准确的数据服务于临床，而分子诊断技术正逐 渐成为临床实验室的常规应用技术，这将为检验 医学的发展提供巨大的机遇与挑战。
PCR技术
PCR核心技术是从水栖高温菌中
分离到能耐高温的Taq酶，使扩增反
应不需要每一个循环加一次DNA聚合
酶，从而实现了自动化，使应用领
域迅速扩大，PCR技术成为了分子生
物学中的一项突破性技术。
PCR概述——2000至2013年发表论文篇
30%
32%
PCR＋遗传分析
PCR＋临床诊断
PCR＋肿瘤研究
二 肿瘤相关基因表达的检测： 1、包括癌基因、抗癌基因 2、肿瘤转移基因 3、转移抑制基因
PCR分子诊断技术PPT课件
PCR临床意义：
快速确诊是否有病毒、细菌等致病性微生物感染；
了解体内感染的数量、复制程度，是否具有传染性；
对临床治疗的用药监测，有无好转或耐药情况，如 产生耐药，如何指导用药种类及计量等。
PCR的发展趋势
随着临床分子生物学的不断发展，DNA测序技术已 逐渐成熟，可为临床疾病的分子诊断提供更精确的判 定依据，现由一代测序技术已发展至三代测序技术， 为医疗领域带来更方便、快捷的检测手段。
1
脱氧核甘三磷酸（dNTP） 标准PCR反应体系中包含4种等物质的量浓度的脱氧核甘三磷
酸，即dATP、dTTP、dCTP和dGTP。 二价阳离子
所有的热稳定DNA聚合酶都要求有游离的二价阳离子，常用 的是Mg2＋，Mn2+ 缓冲液
维持PCR反应体系中的PH，使用Tris－Cl缓冲液。 一价阳离子
4.仪器使用的注意事项：放置水平、有稳定的电压并 连接地线（配备UPS不间断电源）、保证正常运行的 室温温度不超过15-25，仪器要放置在通风、散热较好 的区域，远离水源、火源、有腐蚀性物质及磁场感染 等环境影响。
5.仪器的维护与保养：在日常实验结束，仪器冷却后 对仪器表面进行正常维护及保养工作；使用中应小心 热盖与反应槽的污染，并定期使用95%的乙醇进行擦 拭，如被污染严重应先使用中性消毒液进行处理；每
PCR实验室质量管理体系的建立
依据 国内《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》和ISO15189认可： CNAS CL02《医学实验室质量和能力认可》的准则和美国CAP认证 的PCR分子实验室要求等相关规定，建立标准、规范化的实验室 质量管理体系内容。
体系结构 质量手册：阐明实验室的质量方针、并描述质量体系的文件， 包括实验室的质量方针、目标、组织结构及质量体系要求等。 程序文件：对实验室工作流程的文件化描述，包括目的、范围、 职责及具体工作流程等。
分子诊断策略与常用技术PPT(共23页)
•
29、人生就像一道漫长的阶梯，任何人 也无法 逆向而 行，只 能在急 促而繁 忙的进 程中， 偶尔转 过头来 ，回望 自己留 下的蹒 跚脚印 。
•
30、时间，带不走真正的朋友；岁月， 留不住 虚幻的 拥有。 时光转 换，体 会到缘 分善变 ；平淡 无语， 感受了 人情冷 暖。有 心的人 ，不管 你在与 不在， 都会惦 念；无 心的情 ，无论 你好与 不好， 只是漠 然。走 过一段 路，总 能有一 次领悟 ；经历 一些事 ，才能 看清一 些人。
等位基因特异寡核苷酸探针（ASO）
引物1 5’
点突变（C to T）
探针1 3’
G
3’
引物2 5’
探针2 3’
5’
A
限制性片段长度多态性分析（RFLP） ➢ 原理
指DNA序列上发生一个变异后获得或丢失了一 限制性识别位点，使DNA限制性片段长度发生 变化，在人群中形成两种或两种以上的限制性 类型 利用特定限制性识别位点进行基因分析
•
25、你不能拼爹的时候，你就只能 去拼命 ！
•
26、如果人生的旅程上没有障碍，人还 有什么 可做的 呢。
•
27、我们无法选择自己的出身，可是我 们的未 来是自 己去改 变的。 励志名 言：比 别人多 一点执 着，你 就会创 造奇迹
•
28、伟人之所以伟大，是因为他与别人 共处逆 境时， 别人失 去了信 心，他 却下决 心实现 自己的 目标。
•
31、我们无法选择自己的出身，可是我 们的未 来是自 己去改 变的。
•
32、命好不如习惯好。养成好习惯，一 辈子受 用不尽 。
•
33、比别人多一点执着，你就会创造奇 迹。
•
50、想像力比知识更重要。不是无知 ，而是 对无知 的无知 ，才是 知的死 亡。
《分子诊断技术》课件
2010年代至今
随着生物信息学和人工智能技 术的发展，分子诊断技术不断 优化和升级，应用领域也不断
拓展。
02
分子诊断技术的基本原理
核酸的提取与纯化
核酸提取
核酸提取与纯化的重要性
是指从生物样本中分离和纯化核酸的 过程，是分子诊断技术中的基础步骤 。
是确保后续分子诊断实验结果准确性 和可靠性的关键。
案例三
总结词
SNP分型技术有助于个体化医疗的实现，为 患者提供更加精准的治疗方案。
详细描述
SNP分型技术可以对个体的基因变异进行精 细分析，预测个体对不同药物的反应和代谢 情况，为医生制定个体化的治疗方案提供科
学依据，提高治疗效果并减少副作用。
THANKS
感谢观看
特点
高灵敏度、高特异性、早期诊断、个性化治疗指导等。
分子诊断技术的应用领域
遗传性疾病诊断
通过对基因突变进行检测，对遗传性 疾病进行早期发现和干预。
肿瘤诊断与监测
通过对肿瘤相关基因和蛋白质的检测 ，对肿瘤进行早期发现、诊断、分期 、预后评估和复发监测。
感染性疾病诊断
通过对病原体基因和蛋白质的检测， 对感染性疾病进行快速诊断和用药指 导。
01
02
03
个性化医疗
结合基因组学、蛋白质组 学等技术，实现个体化、 精准化的诊断和治疗。
无创检测
研究无创或微创的分子诊 断技术，减少对患者的创 伤和痛苦。
实时监测
实现实时、动态的分子诊 断监测，及时发现病情变 化，为治疗提供及时反馈 。
05
案例分析
案例一：基因突变检测在肺癌诊断中的应用
总结词
基因突变检测在肺癌诊断中具有重要意义，有助于早期发现和个性化治疗。
随着生物信息学和人工智能技 术的发展，分子诊断技术不断 优化和升级，应用领域也不断
拓展。
02
分子诊断技术的基本原理
核酸的提取与纯化
核酸提取
核酸提取与纯化的重要性
是指从生物样本中分离和纯化核酸的 过程，是分子诊断技术中的基础步骤 。
是确保后续分子诊断实验结果准确性 和可靠性的关键。
案例三
总结词
SNP分型技术有助于个体化医疗的实现，为 患者提供更加精准的治疗方案。
详细描述
SNP分型技术可以对个体的基因变异进行精 细分析，预测个体对不同药物的反应和代谢 情况，为医生制定个体化的治疗方案提供科
学依据，提高治疗效果并减少副作用。
THANKS
感谢观看
特点
高灵敏度、高特异性、早期诊断、个性化治疗指导等。
分子诊断技术的应用领域
遗传性疾病诊断
通过对基因突变进行检测，对遗传性 疾病进行早期发现和干预。
肿瘤诊断与监测
通过对肿瘤相关基因和蛋白质的检测 ，对肿瘤进行早期发现、诊断、分期 、预后评估和复发监测。
感染性疾病诊断
通过对病原体基因和蛋白质的检测， 对感染性疾病进行快速诊断和用药指 导。
01
02
03
个性化医疗
结合基因组学、蛋白质组 学等技术，实现个体化、 精准化的诊断和治疗。
无创检测
研究无创或微创的分子诊 断技术，减少对患者的创 伤和痛苦。
实时监测
实现实时、动态的分子诊 断监测，及时发现病情变 化，为治疗提供及时反馈 。
05
案例分析
案例一：基因突变检测在肺癌诊断中的应用
总结词
基因突变检测在肺癌诊断中具有重要意义，有助于早期发现和个性化治疗。
《分子诊断技术》课件
1
个性化治疗
通过分析患者基因组信息，为个体提供个性化的治疗方案。
2
药物研发
分子诊断技术可用于药物研发和评价，提高研发效率和成功率。
3
疾病监测
可以通过分子诊断技术对患者的疾病状态进行监测和评估。
分子诊断技术的未来发展
基因组测序技术
随着测序技术的发展，基因组测 序将变得更加便宜和快速。
人工智能
下一代测序技术
分子诊断技术的优势
1 高精度
分子诊断技术可以提供高精度的检测结果， 准确性非常高。
2 快速
相比传统检测方法，分子诊断技术具有更快 的检测速度，可以节约时间。
3 敏感性
分子诊断技术可以检测到非常低浓度的目标 分子，具有很高的检测敏感性。
4 可靠性
分子诊断技术的结果可靠，不易受到外部因 素的影响。
分子诊断技术在医学中的应用
《分子诊断技术》PPT课 件
分子诊断技术是一种以分析和检测基因和蛋白质水平为基础的先进医学技术， 可以帮助我们更准确地诊断疾病。
什么是分子诊断技术
分子诊断技术是一种基于分析和检测生物体分子结构和功能的先进技术，包 括DNA、RNA和蛋白质等分子的检测和分析。
分子诊断技术的原理
核酸检测
通过PCR、DNA测序等技术对基因组进行分析和检测。
将人工智能应用于分子诊断技术， 可以提高数据分析和结果解读的 效率。
下一代测序技术的发展将进一步 推动分子诊断技术的应用和发展。ห้องสมุดไป่ตู้
总结和展望
分子诊断技术在医学领域的应用前景广阔，将为疾病预防、治疗和监测提供 更准确、快速和个性化的方法。
蛋白质检测
通过质谱和免疫技术等对蛋白质进行定量和鉴定。
分子诊断策略与常用技术PPT课件( 23页)
三、分子诊断常用技术
核酸分子杂交技术 等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific
oligonucleotide, ASO) DNA限制性长度多态性(restriction
fragment length polymorphism, RLFP)分析 PCR-SSCP DNA测序 DNA芯片技术
RLFP分析法
RFLP分析
优点 • 分辩率高，无需标记,重复性好，简便快速直观 • 主要用于核酸变异分析比较, 微生物的分群分型， 癌基因分析，遗传病的诊断等。 局限
只能应用突变引起限制性酶切位点改变筛选，检测 效率低。
PCR/单链构象多态性分析（SSCP）
原理
将经扩增的DNA片段变性形成单链，由于序列不同，单 链构象就有差异，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁移率 不同，通过与标准物的对比，即可检测出有无变异。
等位基因特异寡核苷酸探针（ASO）
引物1 5’
点突变（C to T）
探针1 3’
G
3’
引物2 5’
探针2 3’
5’
A
限制性片段长度多态性分析（RFLP） 原理
指DNA序列上发生一个变异后获得或丢失了一 限制性识别位点，使DNA限制性片段长度发生 变化，在人群中形成两种或两种以上的限制性 类型 利用特定限制性识别位点进行基因分析
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
MstⅡ酶切位点(CCTNAGG)
GAG → GTG ↓
谷Aa→缬Aa 5´
3´
1.15kb
×
正常基因
5´
3´
1.35kb
突变基因
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
分子诊断学--绪论、感染性疾病的分子诊断 ppt课件
ppt课件 39
ppt课件
40
2003年4月，德国汉堡Bernhard-Nocht热带医学 研究所学者Drosten等用随机扩增技术，获得一段 长度为300bp的核苷酸序列。 根据这段序列，建立了检测新冠状病毒的常规 和实时定量PCR技术。
( on April 10, 2003）
ppt课件 18
2. There are two main kinds of molecular
techniques which are used to molecular
diagnosis of infection disease, amplifying DNA probe signals and amplifying target DNA fragment. amplify：放大；probe：探针
ppt课件
19
3. Associated with conventional diagnosis
methods, molecular diagnosis can be used
to diagnose infection disease induced by virus, bacteria, leptospira螺旋体, chlamydia 衣原体, mycoplasma支原体 and rickettsia立 克次体, etc.
ppt课件
8
分子诊断学的任务
阐明疾病发生、发展的分子机制； 分子诊断指标； 建立检测方法
ppt课件
9
分子诊断学的特点
属于病因学诊断，特异性高； 对某些基因变异做出判断； 有更好的发展前景
ppt课件
10
Section 2 分子诊断学的历史、现状和未来
ppt课件
ppt课件
40
2003年4月，德国汉堡Bernhard-Nocht热带医学 研究所学者Drosten等用随机扩增技术，获得一段 长度为300bp的核苷酸序列。 根据这段序列，建立了检测新冠状病毒的常规 和实时定量PCR技术。
( on April 10, 2003）
ppt课件 18
2. There are two main kinds of molecular
techniques which are used to molecular
diagnosis of infection disease, amplifying DNA probe signals and amplifying target DNA fragment. amplify：放大；probe：探针
ppt课件
19
3. Associated with conventional diagnosis
methods, molecular diagnosis can be used
to diagnose infection disease induced by virus, bacteria, leptospira螺旋体, chlamydia 衣原体, mycoplasma支原体 and rickettsia立 克次体, etc.
ppt课件
8
分子诊断学的任务
阐明疾病发生、发展的分子机制； 分子诊断指标； 建立检测方法
ppt课件
9
分子诊断学的特点
属于病因学诊断，特异性高； 对某些基因变异做出判断； 有更好的发展前景
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10
Section 2 分子诊断学的历史、现状和未来
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5
核酸分子杂交示意图 核酸分子核酸分子杂交技术
斑点杂交（spot blot hybridization）
凝胶电泳印迹转移杂交（Southern blot hybridization)
原位杂交（in-situ hybridization）
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11
基因芯片技术原理
大规模集成的固相杂交
基本原理是核酸分子杂交，即依据DNA 双链碱基互补配对、变性和复性的原理
以大量已知序列的寡核苷酸、 cDNA或基因片段作探针，检测 样品中哪些核酸序列与其互补， 然后通过定性、定量分析得出待 测样品的基因序列及表达的信息
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12
基因芯片的作用原理
在适当温度、盐浓度下，双链能按硷基互 补配对原则(A-T,C-G)复性而重新成为双链 核酸。
用已知序列的单链核酸，经标记制成核酸 探针，与变性后的待测标本核酸进行杂交， 通过检测标记探针的信号，可判断标本是 否存在与探针互补杂交的同源核酸。
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3
核酸分子杂交探针的制备
制备探针的靶核酸可通过: 分离、切割病毒的特定核酸片段获得; 用重组技术，将该片段克隆到细菌质粒，
经扩增和纯化大量获得; 选择已知病毒的一段基因序列，用人工方
法合成寡核苷酸，其长度以20个左右最为 常用，过短易出现非特异性杂交。
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4
核酸分子杂交探针的制备
常见的用于标记探针的示踪物质
放射性核素如：32P，35S，3H，125I等，杂交 后可通过放射自显影技术进行检测
非放射性物质如：生物素、地高辛和酶等， 杂交后可通过底物显色、化学发光等技术 进行检测
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21
Think You
基因芯片
基因芯片（或DNA Chip,或
Microarray）又称DNA微阵 列，是指固定在固相载体上的 高密度DNA微点阵。即将大量 靶基因或寡核苷酸片段有序地， 高密度地（点与点间距一般小 于500μm）排列在玻璃、硅 等载体上，称之为基因芯片。
DNA Microarray
上图显示大量的DNA探针，按照一 定的规律有序地排列在支撑物上， 每个探针与相对应的特异互补序 列结合后，即可发出荧光。利用 该芯片可同时获取大量信息。
7
斑点杂交
Dot Bolt Hybridization for HBV DNA Quantitationin 5 μl of Patient Sera
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8
凝胶电泳印迹转移杂交
原位杂交
(Southernblot hybridization) (in-situhybridization ）
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13
基因芯片的 制作方式
原位合成
原位光蚀刻合成 光导原位合成法 原位喷印合成
直接点样
针式点样 喷墨点样 分子印章法
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14
基因芯片技术流程
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15
基因芯片的应用
基因表达分析
分析基因表达时空特征 基因差异表达检测 发现新基因 大规模DNA测序
基因型、基因突变和多态性分析
引物延伸时，由于聚合 酶具有的5’→3’‘核酸外切 酶作用，可把荧光报告基 团从探针上切下，因与淬 灭基团远离，发出的荧光 不被淬灭，随模板扩增和 游离荧光报告基团的增加 而增强，并和初始靶核酸 的量呈正相关。
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TaqMan法应用
起始模板的定量 基因型分析 目的基因定量 产物鉴定 单核苷酸多态性（SNP）分析
������ 非对称PCR ������ 免疫PCR ������ 定量PCR ������ 随机引物PCR ������ 简并引物PCR ������ 锚定PCR
������ …
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实时荧光定量PCR荧光检测技术
SYBR Green I。是一种结合于所有dsDNA双 螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。
分子诊断技术
常见的核酸分子诊断技术
核酸分子杂交
( Nucleic acid molecular Hybridization)
基因芯片（ Gene Chip ）
聚合酶链反应( polymerase chain reaction reaction；PCR)
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核酸分子杂交的原理
双链核酸加热或经硷处理变性后，可解链 成两条互补的单链核酸。
PCR不仅可检测各种DNA病毒的核酸，还可经过 逆转录，检测各种RNA病毒的核酸，因而在各 型肝炎病毒的检测中，敏感性远超过分子杂交， 有着不可替代的作用。
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PCR 的常见类型
常规PCR 逆转录PCR（RT－PCR） 巢式PCR〔nested-PCR〕 原位PCR（in-situ PCR） 多重PCR
疾病的诊断与治疗
遗传病相关基因的定位 肿瘤诊断 感染性疾病的诊断 耐药菌株和药敏检测
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聚合酶链反应
(polymerase chain reaction
reaction；PCR)
PCR是八十年代中期问世的一种体外模拟体内 DNA复制过程的技术，可在短时间内将待测特 异性DNA扩增百万倍以上，并具有简单、快速、 特异的特点，成为分子生物学发展史的又一个 里程碑。
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核酸分子杂交技术的应用
核酸分子杂交具有很高的灵敏度和高度的 特异性，因而该技术在分子生物学领域中 已广泛地使用于克隆基因的筛选、酶切图 谱的制作、基因组中特定基因序列的定性 等
在医学上，目前已用于多种遗传性疾病的 基因诊断，恶性肿瘤的基因分析，传染病 病原体的检测等领域中 。
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TaqMan 水解探针。由产荧光基团，荧光淬 灭基团，与扩增子有互补的特异核苷酸序 列组成。
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实时荧光定量PCR：水解探针法
退火 延伸 切割 聚合完成
该法也称TaqMan技术， 在PCR系统中，加入能和 靶核酸模板杂交的探针， 其5’端带有荧光报告基团， 发射的荧光被3’端带有的 荧光淬灭基团所吸收。