紫外分光光度法标准操作规程

标准操作规程

建立一个紫外分光光度法标准操作规程，以便正确操作仪器，保护仪目的：器。范围：适用于所有紫外分光光度计。主任，QC化验员责任者：QC 规程：紫外分光光度计是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一1. 简述：定波长范围内光的吸收度，对该物质进行

定性和定量分析的方法。本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测定吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有则可用本法作杂质检查。或杂质的吸收峰处化合物无吸收，相当强度的吸收，物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，

因此紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。有机化合物—分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200通常使用的紫外分光光度计））产生吸收。850nm

或可见光区（400—400nm 可见分光光度计。—900nm，因此又称紫外-的工作波长范围为190Lambert紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。朗伯-比尔（）定律为光的吸收定律，它是紫外分光

光度法定量分析的依据，其数—Beer 学表达式为：

1ECL??lg A T

式中A为吸收度；

T为透光率

为吸收系数E

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C为溶液浓度

L为光路长度

如溶液的浓度（Ｃ）为1%（g/ml）,光路长度为（Ｌ）为1cm,相应的吸收系数为百分吸收系数，以表示。如溶液的浓度（Ｃ）为摩尔浓度(mol/L),1%E cm1光路长度为1cm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，

以ε表示。

2. 仪器：紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。

为了满足紫外-可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。

单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件、聚焦透镜或反射镜等组成。色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制成，对200—400nm波长光的色散能力很强，对600nm 以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光谱。光栅系将反射或透射光经衍射而达到色散作用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为匀排光谱，双光束仪器多用光栅为色散元件。

检测器有光电管和光电倍增管二种。

紫外分光光度计依据其结构和测量操作方式的不同可分为单光束和

双光束分光光度计二类。单光束分光光度计有些仍为手工操作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品或参比的透光率或吸收度，操作比较费时，用于绘制吸收光谱图时很不方便，但适用于单波长的含量测定。双光束分光光度计借扇形镜交替切换光路使分成样品（S）和参比（R）两光束，并先后到达检测器，检测器信号经调制分离成两光路对应信号，信号的比值可直接用记录仪记录，双光束分光光度计操作简单，测量快速，自动化程度高，但作含量测定时，为求准确起见，仍宜用固定波长测量方式。

3. 紫外分光光度计的检定

3.1. 波长准确度

3.1.1. 波长准确度的允差范围双光束光栅型紫外-可见分光光度计波长准确度允许误差为±0.5nm。单光束棱镜型350nm处±

0.7nm,500nm处。4.8nm处±700nm，2.0nm±．

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波长准确度检定方法3.1.2.

关闭仪器光源，将汞灯（用笔式汞灯最方便）3.1.2.1. 用低压汞灯检定

直接对准进光狭缝，如为双光束仪器，用单光束能量测定方式，采用波长扫、“慢”（如15nm/min）、响应“快”、最小狭缝宽度（如0.1nm）描方式，扫描速度次，由仪器识别记量程3—800nm范围内单方向重复扫描0—100%，在200录各峰值（若仪器无“峰检测”功能，必要时可对指定波长进行“单峰”扫位置，透光率读0.1。单光束仪器以751G型为例，可将选择开关放在×描）打开光闸门，，关小狭缝，）（或选择开关放在×1，透光率放在10数放在100峰出现的位置，若与波长读数不符，缓缓转动波长盘，寻找汞灯546.07nm应调节仪器

左侧准直镜的波长调整螺丝，如波长向短波长方向移动，应顺时针方向旋转波长调整螺丝，如向长波长方向移动，则应反时针方向旋转波长调整螺丝，调整好后，再按汞灯的下列谱线测试，记录每条谱线与仪器波长读数的误差。，275.28可见分光光度计的汞灯谱线波长：237.83，253.65，用于检定紫外-，（紫色），404.66，，296.73，302.15313.16，334.15，365.02，365.48366.33 579.07nm。，435.83（蓝色）546.07（绿色），576.96（黄色）及本法主要用于日常工作中波长准确度 3.1.2.2. 用仪器固有的氘灯检定

486.02测量条件同上述低压汞灯的方法，的核对。取单光束能量测定方式，对及656.10nm二单峰进行单方向重复扫描3次。参比光路为将氧化钬玻璃放入样品光路， 3.1.2.3.用氧化钬玻璃检定空气，按测定吸收光谱图方法测定。校正自动记录仪器时，应考虑记录仪的时间常数，测定样品与校正时取同一扫描速度。536.2，，460.0484.5，，，氧化钬玻璃在279.4，287.5333.7，360.9418.7波长处有尖锐的吸收峰，可供波长检定用。氧化钬玻璃因制造的637.5nm及原因，每片氧化

钬的吸收峰波长有差异，应使用经计量部门校验过的。本法可供没有单光束测定功能的双光 3.1.2.4.用高氯酸钾溶液检定

高束紫外分光光度计波长准确度检定用。高氯酸钾溶液的配制方法：取10% 4%溶液即得。）配成O氯酸为溶剂，加入氧化钬（HO32，，287.18333.44，，高氯酸钾溶液较强的吸收峰波长为241.13278.10 。640.52nm，536.64，485.29，451.30，416.28，361.31，345.47．

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