Agilent+1260+高效液相色谱仪使用维护保养操作规则

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一、目的

制定Agilent 1260型高效液相色谱仪操作维护规程，使操作维护规范化，保证检测结果准确可靠。

二、适用范围

本规程适用于Agilent 1260型高效液相色谱仪的操作维护。

三、职责

QC对本规程的实施负责，项目主管、研发总监对本规程实施进行监督。

四、程序内容

仪器配置

本仪器由梯度泵，自动进样器，柱温箱，VWD检测器或DAD检测器和操作软件工作

站组成。

操作前的准备

流动相的制备用色谱纯的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水为新鲜制备的重蒸馏水。对规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节，配制好的流动相应通过μm以下的滤膜滤过，用前脱气，应配制足量的流动相。供试溶液的配制供试品用规定溶剂配成供试溶液。定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。供试溶液在注入色谱仪前，一般应经μm以下的滤膜滤过，必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。

检查上次使用记录和仪器状态，检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的pH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。

仪器的操作

接通电源，打开计算机及工作站其他各部件开关，约30秒后，各部件进入待机状态，指示灯为橘黄色，启动完成。

用鼠标双击企业仪器启动程序界面上的Agilent1260仪器图标进入Agilent1260 LC在线色谱工作站，该页面主要由以下几个部分组成：

最上方为命令栏，依次为文件,控制,方法，分析，序列，数据等；

命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、新建方法序列、单个样品分析、调用文件、保存文件等；

左部有五栏从上到下依次为方法，序列，报告，控制，视图五栏。

用鼠标单击【方法】栏进入仪器方法界面，有仪器设置、积分事件、前处理、手动积分修正、平铺显示等。下面介绍以上部分方法的功能。

仪器设置：控制运行样品时各部分组件满足的要求，如柱式加热炉的温度.梯度泵的流速，溶剂比例，停止时间，压力限值。检测器的检测波长。自动进样器的进样量。辅助图谱的记录等。

积分事件：用于样品的积分，有很多参数控制样品的积分，如阈值、最小面积、宽度、积分关闭等。

用鼠标单击【序列】栏进入序列编辑界面。

用鼠标单击【报告】栏进入建立报告界面，有归一化，面积百分比，内标法，外标法等报告格式。

用鼠标单击【控制】栏进入仪器控制界面，有仪器设置，运行队列，仪器状态三项。下面介绍以上三项的控制功能。

仪器设置：控制运行样品时各部分组件满足的要求，如柱式加热炉的温度.梯度泵的流速，溶剂比例，停止时间，压力限值。检测器的检测波长。自动进样器的进样量。辅助图谱的记录等。

运行队列：控制样品运行的顺序。也是提交单针和序列的界面，下面介绍提交样品运行的方法。在运行队列界面上单击鼠标右键出现单次运行/单次分析，序列运行/序列分析等栏，提交单次运行需单击右键后停留在单次运行项后单击鼠标左键，出现单次运行对话框，出现以下几栏，样品ID（样品名称），方法，数据路径，数据文件（数据名称），样品瓶等，单击方法图标，调用已保存在系统内运行样品的方法（即以上介绍的仪器设置），单击数据路径图标将数据保存在你可找到的文件夹内，将数据文件命名，设置好分析对应进样盘的样品瓶后，即可以提交即将要分析的样品了，优先提交即走完当前样品后第一针样品。

仪器状态：体现仪器运行/预运行/空闲时的状态。单击仪器状态一栏，从左至右依次是自动进样器→梯度泵→柱温箱→检测器的状态，橘黄色为未就绪状态，绿色为空闲状态，粉

色为进样状态，蓝色为运行状态，红色为出错状态。

自动进样器：是系统提交的提取规定位置的样品瓶的执行者，也是吸取样品瓶中定量的样品的操作者。

梯度泵：体现流动相的流动速度和整个系统的压力，A、B两相的比例。

柱温箱：体现色谱柱所在柱温箱的温度。

检测器：体现样品运行时的检测波长。

用鼠标单击【视图】栏出现数据显示，数据，平铺显示三项。

数据显示下有显示所有数据，平铺数据，重叠数据，在线信号等。

显示所有数据：即打开运行样品时所有记录运行状态的数据图谱。

平铺数据：即将所有运行状态图谱平铺。

重叠数据：即将所有运行状态图谱重叠。

数据下有手动积分修正，基线检查状态。

平铺显示下有样品录入。

视图下还有一栏：即控制左部五栏的出现和隐藏。

最下面一栏为手动积分修正一栏，出现很多操作图标，如积分关闭、分割峰、定义单峰、手动峰等。

色谱条件的设定及数据采集操作过程

还可以点击每一模块图标中的控制来开或关。把泵上的Purge阀逆时针松开，调流速为min,启动泵，系统开始排气泡，直到管线内（由容器瓶到泵出口）无气泡为止，切换通道继续Purge，直到所用流动相通道中无气泡为止，调流速为min，再把Purge阀顺时针旋紧。

流动相设置：单击泵左面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入阻止分析和关泵的流动相体积底限，单击确定。

进样及方法的设定:

柱温箱参数设定：在温度下面的方框内输入温度，选中“与泵和进样器一致”使柱温箱温度一致，单击确定进入下一画面。

泵参数设定：在流速处输入流量，在溶剂B处输入另一溶剂体积百分比(A=100-B)，也可插入一行时间表编辑梯度，在“最大压力限度”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子，单击确定进入下一画面。

VWD检测器参数的设定

在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm，在“峰宽（响应时间）”下方点击下拉成三角框，选择合适的响应时间，如〉（2秒响应时间）。点击确定进入下一画面。

自动进样器参数设定：在进样量输入进样量，选择洗针进样,输入洗针瓶位置，单击确定进入下一画面。

DAD检测器参数的设定

参数设定检测波长：一般选择最大吸收处的波长，最多可同时检测8个波长。样品带宽：一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽：至少要与样品信号的带宽相等，通常情况下用100nm作为缺省值。可以根据所需保存光谱图的张数最多同时设定5个通道采集信号，无需采集光谱时应将“存储”设在“无”，若做峰纯度检测或优化求知的样品检测条件，建议选择“全部”。峰宽（响应时间）：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。狭缝：窄时，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。根据检测波长选择氘灯或钨灯。单击“方法”菜单，选中“方法另存为”，输入一方法名。如“test”，单击确定。