微生物学--非发酵菌检验

生物学特性
G-杆菌，无芽孢，无荚膜，多数菌有端鞭毛或 丛鞭毛，专性需氧菌，生长温度范围广，最适 30-37度，普通培养基上可以生长，可产各种水 溶性色素。抵抗力强，多种抗生素耐药。
微生物检验
2.鉴定：氧化分解葡萄糖、产酸不产气，触酶 氧化酶阳性，吲哚 、甲基红、VP阴性。
❖分型
1.噬菌体分型 2.血清分型 3.核糖体分型 4.PFGE分型
非发酵菌检验
第一节 概述
❖ 定义：非发酵菌，指一大群需氧或兼性厌 氧、无芽胞的不发酵葡萄糖或仅以氧化形式 利用葡萄糖的革兰阴性杆菌或球杆菌；多为 条件致病菌。
革兰阴性菌初步分群
革兰阴性杆菌
F O-F试验 o/－
氧化酶试验 非发酵菌
+
－
弧菌科
肠杆菌科
O-F试验
发酵型（F）
氧化型(O)
产碱型(-)
光滑、半透明、边缘整 齐不溶血的菌落。
（四）、微生物学检验
鉴定： ❖ 氧化酶阳性 ❖ 触酶阳性 ❖ 无动力 ❖ 不分解任何糖类 ❖ 吲哚试验阴性
（五）、药物敏感试验及结果解释
❖ 对青霉素类敏感 ❖ 对头孢类、四环素类、喹诺酮类、氨基糖
甙类药物均为敏感 ❖ 脑炎或脑膜炎、脑脓肿应注意药物通过血
脑屏障的问题
分类
不发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱 杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌属、 金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌 属、黄单胞菌属、丛毛单胞菌属等。
分群依据
❖ 氧化酶试验 ❖ 葡萄糖氧化发酵试验 ❖ 动力试验
第二节、假单胞菌属
❖ 假单胞菌属为专性需氧、有鞭毛、无芽胞、 无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性， DNA G+C为58～70mol％，包括200余种菌，代 表菌株为铜绿假单胞菌，其他较为常见的菌种 有嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假 单胞菌、产碱假单胞菌等。大多为条件致病菌， 这些菌种也是医院感染的主要病原菌， 人类 非发酵菌感染中，假单胞菌占70％～ 80％。
（一）、临床意义
❖ 分布广泛 ❖ 条件致病菌 ❖ 医院感染的常见病原菌 ❖ 多重耐药和泛耐药菌株
（二）、微生物学特性
❖ G-球杆菌，常成对排列， 也可单个存在。无芽孢， 无鞭毛，粘液型菌株有 荚膜。莫拉菌科。
❖ 营养要求一般，在普通 琼脂平板和MAC平板 上均能生长。 SS平板 上部分菌株可生长。
荧光素
（二）生物学性状
❖ 绿脓素
（二）生物学性状
❖ 生化反应：氧化酶阳性，触酶阳性，O/F氧化型，
精双（+），还原硝酸盐。
❖ 抗原构造和分型：菌体O,鞭毛H,粘液S和菌毛抗原。 ❖ 抵抗力:耐潮湿、干燥、紫外线，不耐热和消毒剂，
临床分离的菌株多耐药。
（三）铜绿假单胞菌检验
❖ 1．标本采集 按疾病和检查目的，分别采取不同的标本：患者
❖ 3、氧化酶阳性
90%
（五）检验结果分析与报告
❖ 1.结合感染症状，在血、尿及无菌体液中 检出特别是重复检出即可确定为病原菌。
❖ 2. 若无感染症状，特别是儿童，检出的 革兰阴性杆菌可视为正常菌群。
❖ 3.注意铜绿假单胞菌的耐药性。
第三节、窄食单胞菌属
（一）、临床意义：
❖ 分布广泛，为条件致病菌，可引起抵抗力低 下患者菌血症、脑膜炎、尿道炎角膜炎、心 内膜炎等。通常从呼吸道标本中分离。在非 发酵菌所致的感染中居第三位，仅次于铜绿 假单胞菌和鲍曼不动杆菌。
第七节、莫拉菌属
（一）、分类
❖ 莫拉菌属(Moraxella)属莫拉菌科（Moraxellaceae） ❖ 医学上重要的莫拉菌有： ❖ 腔隙莫拉菌（M. lacunata） ❖ 卡他莫拉菌（M.catarrhalis） ❖ 非液化莫拉菌(M. nonliquefaciens) ❖ 奥斯陆莫拉菌(M. osloensis) ❖ 亚特兰大莫拉菌(M. atlantae) ❖ 狗莫拉菌(M. canis) ❖ 林肯莫拉菌(M. lincolnii)
❖ 在血平板和MAC上生长良好 ❖ 氧化酶（-） ❖ OF试验氧化型 ❖ 赖氨酸脱羧酶阴性 ❖ 可产黄色色素 ❖ 抗生素的敏感方式
第四节、不动杆菌属
❖ 定义：为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、不 能运动的G-杆菌。
❖ 属莫拉菌科 ❖ 临床分离最多的为鲍曼不动杆菌，排在非发
酵菌的第二位，仅次于铜绿假单胞菌。
的血液、脑脊液、胸(腹)水、脓液、分泌液、痰、 尿液、十二指肠引流液、粪便等；医院病区或手术 室的空气、水、地面、把手、医疗诊断器械及生活 用品。
（三）铜绿假单胞菌检验
2.检验方法
❖ 直接镜检：G-杆菌 ❖ 分离培养：在普通培养基生长良好，经18—
24h形成圆形、扁平隆起、湿润菌落。琼脂被染 成绿色或黄绿色，约80％-90％产生绿脓素或荧 光素。在血平板上表现为：菌落大而扁平、湿 润、边缘不齐；有金属光泽；有生姜样芳香气 味；菌落周围有宽大的兰绿色透明溶血环。
❖ 鉴定：氧化酶（-）、动力（-）、 硝还（-）
（四）、药敏试验和结果解释
❖ 可采用K-B法药敏试验 ❖ 鲍曼不动杆菌对全部氨基青霉素、一代二代
头孢菌素和一代奎诺酮类抗生素天然耐药。
（五）、鲍曼不动杆菌初步鉴定要点
❖ OF试验：O/❖ MAC 上生长良好，菌落呈轻微粉红色 ❖ 氧化酶（-） ❖ 快速分解葡萄糖 ❖ 无动力 ❖ 对青霉素耐药
（二）生物学性状
❖ 血平板，麦康凯平板上五种菌落 ❖ 1.典型型-灰绿色，大小不一，扁平湿润，金属
光泽 ❖ 2.大肠菌样型-灰白色半透明 ❖ 3.黏液型-光滑突起，成粘液状 ❖ 4.侏儒型-细小，无光泽，半透明 ❖ 5.粗糙型-中央凸起，边缘扁平，表面粗糙
（二）生物学性状
2.培Βιβλιοθήκη Baidu特性普通
琼脂培养基上能 产生水溶性绿色 素，使整个培养 基变为绿色。MAC 培养基上，1824h可形成微小无 光泽半透明的菌 落。SS平板上可 形成类似沙门菌 的菌落。(中心黑 色菌落）
（二）生物学性状
❖1.形态与染色：
G- 杆菌，多形性，有 鞭毛、菌毛，无芽孢， 有类似荚膜样的外膜。
（二）生物学性状
❖ 2.培养特性：专性
需氧，4℃不生长42 ℃ 生长，在血平板上经 35—37℃，18—24h培养 可表现为：菌落大而扁 平、湿润、边缘不齐,有 金属光泽,有生姜样芳香 气味,菌落周围有宽大的 兰绿色透明溶血环。
（二）、临床意义
❖ 引起眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、 脑脓肿、心包炎、心内膜炎及泌尿生殖系 统炎症
（三）、微生物特性
❖ 革兰阴性球杆菌 ❖ 呈双短链状排列，
具有多形性
（四）、微生物学检验
分离培养： ❖ 营养要求较高 ❖ 生长温度32~35℃ ❖ 血琼脂平板上生长良好 ❖ 针尖大小的圆形凸起、
（二）、微生物特性
❖ G-直或微弯曲杆菌，具有端鞭毛1-8根2根或 多根极端丛鞭毛，有动力，无芽孢。
❖ 该菌专性需氧，营养要求不高，可在普通平 板血平板和MAC上生长。血平板上培养1824小时，形成圆形、光滑、湿润、浅黄色菌 落；培养48小时菌落，可呈黄色、绿色或灰 白色，菌落中心可有变透明的趋势，称为“猫 眼”现象。
第五节、伯克霍尔德菌
（一）、概述
❖属于rRNA第II群 ❖鼻疽病与类鼻疽病的病原体 ❖2004年NCCLs称为可能成为生物恐怖的细菌 （鼠疫耶尔森菌,炭疽芽胞杆菌,布鲁菌属,巴斯德菌属和弗朗 西斯菌属等）
生物学特性
❖ 革兰阴性杆菌 ❖ 无芽胞、无荚膜 ❖ 除鼻疽伯克霍尔德菌外均有一个或多个鞭毛 ❖ 洋葱伯克霍尔德菌和类鼻疽伯克霍尔德菌 营养要求不高，但鼻疽伯克霍尔德菌营养要求 相对较高，普通平板上发育不良且生长缓慢， 但能在血平板上生长。
（二）、生物学特性
❖ 革兰阴性杆菌 ❖ 周鞭毛有动力、无荚膜 ❖ 血琼脂平板上不溶血、
不产生色素，菌落为浅 灰色、扁平、凸起。大 多数粪产碱杆菌可形成 薄的、边缘不规则、扩 散性菌落。
（三）、分离培养与鉴定
❖ pH至8.6为本菌特点 ❖ 氧化酶阳性 ❖ 触酶阳性 ❖ 不分解任何糖类 ❖ O-F基础培养呈碱性 ❖ 脲素酶阴性 ❖ 不液化明胶
（三）、微生物检验
❖ 标本采集：对于含菌量较多的标本采取直接 接种血平板和麦康凯平板，含菌量较少的标 本需增菌后再培养。
❖ 直接镜检：标本经革兰染色后镜检可见G-球 杆菌常成双排列，并可见白细胞吞噬现象。
❖ 抗原检测和分型：
（三）、微生物检验
❖ 分离培养：血平板形成圆形、灰白 色、光滑、边缘整齐、直径23mm的菌落。洛菲不动杆菌菌落 小，1-1.5mm。溶血不动杆菌可出 现溶血。MAC平板生长良好，鲍 曼不动杆菌可呈轻微红色。
自学内容：
第八节、伊丽莎白菌属 和金黄杆菌属
思考题
❖ 非发酵革兰阴性杆菌的共同特点是什么？ ❖ 铜绿假单胞菌的生物学特性及微生物学诊断
要点是什么？ ❖ 铜绿假单胞菌在血平板上典型的菌落特点是
什么？ ❖ 不动杆菌属药敏试验采用什么方法？对哪些
抗生素天然耐药？
（二）、微生物检验
❖ 鉴定：氧化酶（-），明胶液化试验（+）， 七叶苷（+），赖氨酸脱羧酶（+）， 氧化分解葡萄糖。
（三）、药敏试验
❖ 含内酰胺酶。 ❖ 临床治疗首选磺胺类和奎诺酮类抗生素（磺
胺嘧啶，环丙沙星）。 ❖ 对亚胺培南天然耐药 鉴定实验 ❖ 不用K-b法做药敏试验。
（四）、鉴定要点
微生物检验
❖ 分离培养与鉴定 ❖ 需氧菌 ❖ 生长温度35℃ ❖ 普通培养基、血琼脂、麦康凯 ❖ 生化鉴定 ❖ 荧光直接染色镜检，可快速诊断
第六节、产碱杆菌和无色杆菌属
（一）、分类及临床意义
❖1.与临床有关的有粪产碱杆菌、脱硝无色杆菌、皮 乔特无色杆菌、木糖氧化无色杆菌，典型菌种为粪产 碱杆菌。 ❖2.人体的正常菌群，是医院感染的病原菌，可引起 抵抗力低下患者发生败血症，并可从患者呼吸道、尿 液、血液及脑脊液中分离出来。
（二）、微生物检验
❖ 标本采集：血液标本先增菌后分 离培养，其他标本直接接种。
❖ 分离培养：营养需求不高，在血 平板和普通琼脂平板上生长良好， 经35℃培养18-24h后可形成中等 大小、圆形、光滑、湿润、不溶 血的菌落，并可产黄色色素。 4℃不生长，42 ℃近半数生长。 并在MAC平板上生长良好。
（三）铜绿假单胞菌检验 2.检验方法
❖鉴定：氧化酶阳性，触酶阳性，O-F试
验氧化型、木糖产酸不产气，液化明胶， 还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，利用枸 橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。
（四）铜绿假单胞菌快速鉴定要点：
❖ 1、能产生绿色素，普通平板琼脂被染成绿色 或黄绿色。
❖ 2、血平板上菌落大而扁平、湿润、边缘不齐； 有金属光泽；有生姜样气味；菌落周围有宽大 的兰绿色透明溶血环。
❖ 药敏试验的药物选择
耐药机制
❖ 分泌大量破坏细胞组织的胞外产物 ❖ 分泌分解抗生素的酶 ❖ 粘附作用 ❖ 生物膜障碍 ❖ 主动外排 ❖ 膜孔蛋白突变
铜绿假单胞菌
（P. aeruginosa)
（一）临床意义
铜绿假单胞菌广泛存在环境中，加之多种 传播途径和污染，因此易感染,特别是免疫力 低下的患者。引起: 1.皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、烧伤 感染。 2.菌血症、心内膜炎、囊性纤维变性。 3.感染眼部的铜绿假单胞菌，可以合成胶原酶， 以致引起角膜穿孔而失明。