生化分析仪的校准

生化分析仪的校准

重庆医科大学附一院陈宏础

一个实验室测定结果的可靠性是由其精密度、准确性及可比性所决定的，一般必需从下面几方面着手。一．选好测定方法；

二．购买质量过硬的试剂盒；

三．要有质优的测试仪器；

四．必需进行正确的校准；

五．还要规范化操作；

六．搞好过硬的室内质量控制；

七．积极参加室间质评活动；

八．还要有一支素质高的队伍。

现就生化分析仪的校准问题提出个人看法。

一、校准的重要性和必要性

首先必须明确生化分析仪不论如何先进，它还是一个比较器，它测试出来的标本结果是随着标准限的设置不同而变化的。所以，在卫生部临床检验中心拟定的“临床实验室（定量测定）室内质控工作指南”中明确指出“对测定标本的仪器一定要求进行校准，校准时要选择合适的（配套的）标准品/校准品；如有可能，校准品应能溯源到参考方法或/和参考物质；对不同的分析项目要根据其特性确立各自的校准频率。”这说明校准仪器是室内质控的重要部分，强调了校准工作的必要性和重要性，同时指出了校准的方法和要求。

二、确立测定系统的概念

对于一个临床检测项目，如果所用方法的测定原理、试剂、仪器、校准品中任何一个不同，都可能得到不同的测定结果。因此，测定系统包括测定原理、试剂、仪器、校准品四要素。如果我们想要得到准确可靠的测定结果，而该结果又具有与国际、国内其他实验室的可比性，应该自己建立一个标准测定系统。在全自动生化分析仪上使用配套的试剂和标准品，即日立7170使用宝灵曼的试剂和校准品（c.fas）,在贝克曼CX-7生化分析仪上使用贝克曼的试剂和校准品等。各仪器厂家均有自己的标准测定系统。对于校准品不能乱用，如绝对不能用贝克曼的校准

品校准日立生化仪，同样也不能用宝灵曼的校准品去校准贝克曼生化仪。

三、校准品和质控品

校准品(Calibration materials)含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它

与该方法及试剂、仪器是相关联的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系

统误差。因此最好为人血清基质，以减少基质效应造成的误差。

质控品(Control materials )只用于和待测标本同时测定的，为了控制标本的测定误差，

因此要求保存时间十分稳定。前者是校准其值而后者是控制误差用的。

四、校准前准备

1 •了解灯泡已使用多久？检查飘移是否合乎要求；

2.检查比色杯的清洁及磨损情况？必要时进行更换；

3.用清洁剂泡洗管道

4.测定仪器的精密度及线性是否达到仪器性能要求？

五、定值质控血清是否可以校准仪器？

我们在相同条件下，同时用五个进口产品，每家两种不同浓度的定值如TP、ALB、UREA、UA、ALP、GGT、CK、HBDH、LD、AMY等，在日立7170A上进行测定(用常规试剂)，

详见质控血清对部份常规测定项目(如T、ALB、UREA、Cr、UA、K、Na、Cl、AST、ALT )

结果与靶值比较：

表不同厂家定值质控对、、、、结果与靶值比较

*从总蛋白结果来看RANBOX与Bio-Red相差为6.45%，而宝灵曼与Bio-Red较为接近；

*从白蛋白结果分析，宝灵曼与Bio-Red相对相差5.75% ,与总蛋白结果明显不同。Bio-Red 则与汽巴康宁比较接近。

* UREA结果中凡是高值均上不去，分析其原因很可能与我们采用试剂盒的质量有关，所以

试剂盒的线性范围理应成为选择试剂盒的重要依据之一。但从低值结果分析，也有5%的偏

差（Bio-Red 与Human）

*AST与ALT测定值均低于靶值，这就涉及我们选用什么K值问题。

*ALP测定中RANDOX （-16.6%）与宝灵曼（2.7%）靶值之间竟相差19.3%，这可能涉及试剂盒选用缓冲液种类，PH值以及所用&值等有关。

通过上述结果比较，说明不同厂家生产的定值质控血清靶值之间有的相差较大，提示我

们决不能用定值质控血清代替校准品作校准用。

六、校准方法

例如日立（Hitachi）系列您必须购买宝灵曼（Boehringer）的试剂及其校准的说明书设置参

数，用c.fas.校准血清进行校准，即可获得各项目的校准K值，同时观察一下各项目测定

时反应进程图，检查各项目参数设置是否在最佳位置，如不在最佳位置应予以重新设置并测

定。此时得到的K值即为准确的校准K值，然后测定待测的10至20份新鲜血清三次取其平均值，应该说此结果是用Hitachi-Boehringer检测系统所获的测定值。然后用此血清值校

准其它测定系统。

表日立7170、BM试剂连续四个月每天进行校正（n=81）K值的变化

七、关于酶活性测定校准问题

有的主张不进行校准而采用固定K值，有的作者以为应该进行校准。酶活力计算公式

如下: 酶活力(u/l) =△ A/min x Vx 106/( £x v x 1) 令k=V X106/ ( £x)v

则酶活力(u/l) =△ A/min X

常用K值有以下几种：

a）理论K值：根据理论摩尔消光系数（£）来计算，如NADH 为6.22 X03

b）实测K值：由于仪器波长的精密及半宽度不同，而应根据实测&值来设定K值

c）厂家给的K值：厂家生产试剂盒说明书上提供的K值（有的厂家提供6.3 X03）

d）校准K值：通过校准物直接校准得到的K值在日立7170A全自动生化分析仪上，可以得到几种不同的酶K值，见下表

表日立全自动生化分析仪上用不同方法得到几种酶的值

注：1校准物为宝灵曼c.f.a.s,试剂也用宝灵曼的配套试剂。

2括号内数字是该K值与理论K值相比的变化率

以上摘自张克坚文章中

*从上述K值中不难发现实测K值大于理论K值，这说明生化分析仪的测光系统还存在着一定误差，如波长、半宽度

及光径等偏差，使仪器达不到理论上的最佳状态；

*校准K值与实测K值之间也存在一定的差距，即使指示物和仪器相同，其差异可能由试剂及校准品造成的；

*作者认为最好使用校准K值，但必须由两个先决条件：1必须使用配套的试剂；2必须使

用配套的高质量的校准品，但校准K值应有其溯源性。

关于酶活标准品，欧洲标准局（BCR）和美国国家标准技术研究院（NIST ）均发表了人血清基质的酶活性

标准物，相信不久将会有公认的标准（校准）品问世。

八、必须拟订校准计划（文件）校准工作不是仅进行一次就可万事无忧一劳永逸，而必须经常化。按照“临床实验室质量控制（QC）的要求（草案）”必须要求拟定校准计划，其内容包括：

1．建立校准方法

⑴选择合适（配套）的校准品，包括校准品数目、类型和浓度；

⑵如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质；