阿莫西林按 Ph Eur 6 0检验规程及12种杂质结构、名称

SOP-B/QU/06/569 1/8 阿莫西林按Ph.Eur.6.0 蓝色部分为有关物质检测1.分子式C16H19N3O5S·3H2O 分子量419.4。

2.CAS编码61336-70-7 3.定义按无水物计算阿莫西林三水酸含有不低于95.0不高于102.0的2S5R6R-6-2R-2-氨基-2-4-羟苯基乙酰氨基-33-二甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环3.2.0-庚烷-2-羧酸三水酸。

4.性状白色或类白色结晶性粉末微溶于水难溶于乙醇96不溶于脂肪油。

溶于稀酸和稀的碱金属类氢氧化物溶液。

5.检验操作规程5.1.鉴别5.1.1.本品的红外光吸收图谱应与阿莫西林三水合物标准品的图谱一致。

5.1.2.在含量项下记录的色谱图中供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

5.2.溶液的澄清度1供试品溶液的制备称取供试品1.0g加0.5mol/L 盐酸溶液10mL后使溶解称取供试品1.0g加稀氨水10mL后使溶解。

将供试品分别与标准比浊液置于比浊用玻璃管中在暗室内同置于澄明度观测仪黑色背景上从水平方向沿径向观察与标准比浊液比较其浑浊程度。

在进行比较时如供试品溶液管的浊度接近标准管时应交换位置观察。

5.3.酸度1样品溶液称取供试品0.1g量取新沸放冷的纯化水50mL在50℃水浴中微热用搅拌棒搅匀。

5.4.比旋度5.4.1.1.溶液制备取供试品100mg精密称定于小烧杯中用纯化水转移至50mL容量瓶中使其溶解并定容至刻度。

5.5. 有关物质5.5.1.测定方法采用高效液相色谱法测定。

5.5.2.仪器与材料高效液相色谱仪、电子天平、超声波清洗仪、溶剂过滤器、酸度计、18色谱柱、烧杯、量筒、50mL容量瓶、25mL容量瓶、100mL容量瓶、5mL移液管、2mL移液管、注射器、0.45μm 微孔滤膜。

5.5.3.试剂与试液5.5.3.1.乙腈色谱纯、5.5.3.2.2mol/L氢氧化钠溶液称定氢氧化钠8g用纯化水溶解至100mL摇匀。

5.5.3.3.0.05 mol/L磷酸盐缓冲液
pH5.0称定磷酸二氢钾6.8g加纯化水溶解后稀释至1000mL用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至5.0±0.1经0.45μm微孔滤膜过滤待用。

5.5.3.4. 缓冲液配制
250.0mL 0.2MKH2PO4溶液用稀NaOH溶液调pH至5.0用水稀释至1000mL。

SOP-B/QU/06/569 2/8 5.5.3.5. 流动相A取缓冲液与乙腈按991的比例混匀经
0.45μm微孔滤膜过滤待用配戴防护口罩、橡胶手套必要时在通风橱内操作。

5.5.3.
6. 流动相B取缓冲液与乙腈按8020的比例混匀经0.45μm微孔滤膜过滤待用配戴防护口罩橡胶手套必要时在通风橱内操作。

5.5.4.色谱条件与系统适用性试验5.5.4.1.色谱条件规格长为0.25m内径为4.6mm填充为十八烷基硅烷基硅胶粒径
5um.流速为1.0mL/min检测波长254nm进样量50ul。

5.5.4.2.梯度程序按含量测定项下所述以流动相A-流动相B928为流动相分别注入50微升参照溶液b、参照溶液c开始进行等度洗脱并根据下表描述的流动相的洗脱梯度注入样品溶液b进行洗脱。

注入流动相A用同样的洗脱程序洗脱得空白。

时间分钟流动相A V/V 流动相BV/V 0-tR 92 8 tR - tR25 92箭头指向0 8箭头指向100 tR25 - tR40 0 100 tR40 - tR55 92 8 备注tR指由参照溶液c确定的阿莫西林的保留时间。

如果流动相的比值经调整已经可以获得所要求的分离度那么此时的流动相比值在梯度洗脱和含量测定中对应的时间为0。

5.5.4.3.系统适用性试验用流动相比AB为928的流动相平衡柱子。

注入参照溶液b只有两主峰的分辨率至少为2.0时检测才有效。

如有必要调整流动相AB比率第一个峰阿莫西林的质量扩散比为1.3-2.5。

注入参照溶液c六次只有在主峰面积相对标准偏差最大为1.0检测才有效。

a 分离度用流动相A:
B92: 8平衡色谱柱后取对照溶液b进样记录色谱图两个主峰的分离度R应≥2.0否则测试无效。

需要时调节A:B的比例。

baabWWtt18.1R 式中R为分离度tb ta 为两个主峰的保留时间Wa Wb为两个主峰的半峰宽。

b 容量因子质量分配系数阿莫西林的质量分配系数应在1.32.5之间。

00Rtttk’ 式中K’: 为容量因子SOP-B/QU/06/569 3/8 tR: 为阿莫西林保留时间t0: 为死时间溶剂乙腈的保留时间.
c 信噪比取对照溶液c进样调节色谱系统使信噪比不小于3。

信噪比hH2 Hh分别为阿莫西林的峰高和噪声的峰高。

d重复性取对照溶液c连续进样6次主峰面积的相对偏差应不大于2.0。

e〕溶剂空白色谱柱平衡后开始梯度程序取50ul流动相A进样用相同的梯度程序得到空白色谱图。

样品的图谱中忽略溶剂峰。

5.5.4.4.样品测定取新鲜制备的供试溶液b进样开始梯度程序记录色谱图取0tR40分钟的色谱图作为样品的色谱图。

任何杂质对每种杂质样品溶液b得到的色谱图中除主峰外的任一峰峰面积都小于参照溶液c1色谱图的主峰面积。

5.5.4.5.计算公式式中Ai供试品溶液b中杂质峰面积As对照溶液d主峰面积Wi供试品重量g Ws 对照品重量g P对照品含量。

附阿莫西林12种杂质杂质名称我们目前的分析仅作为参考A 我司推断为物料反应不完全导致。

B 我司推断为阿莫西林中异构体杂质产生于羟邓盐和6-APA缩合反应产生的副产物。

C 我司推断为在碱性条件下产生于阿莫西林分子的重排反应。

D 我司推断为在碱性条件下产生于阿莫西林产生的降解。

E 我司推断为产生于杂质D的脱羧G 我司推断为阿莫与杂质I的缩合反应I 我司推断为物料反应不完全导致。

J 降解产物和副产物产生于阿莫西林和杂质D的反应。

附阿莫西林12种杂质总杂质10080WiAsWsPAi单个杂质10080WiAsWsPAiSOP-B/QU/06/569 4/8 A.2S5R6R-6-氨基-33-二甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环3.2.0庚烷-2-羧酸6-APA B.2S5R6R-6-2S-2-氨基-2-4-羟苯基乙酰基氨基-33-二甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环3.2.0庚烷-2-羧酸L-阿莫西林C.4S-2-5-4-羟苯基-36-二氧代哌嗪-2-烯-55-二甲基噻唑烷-4-羧酸阿莫西林二酮哌嗪D.4S-2-2R-2-氨基-2-4-羟苯基乙酰基-氨基羧甲基-55-二甲基噻唑烷-4-羧酸阿莫西林噻唑酸RCO2H E.2RS4S-2-2R-2-氨基-2-4-羟苯基乙酰基氨基甲基-55-二甲基噻唑烷-4-羧酸。

脱羧阿莫西林噻唑酸及其在C上的异构体RH F3-4-羟苯基吡嗪酰胺-2-醇SOP-
B/QU/06/569 5/8 G.2S5R6R-6-2R-2-2R-2-氨基-2-4-羟苯基-乙酰基氨基-2-4-羟苯基-乙酰基氨基-33-二甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环3.2.0庚烷-2-羧酸D-4-羟苯基甘氨酰阿莫西林H.2R-2-22-二甲基丙酰氨基-2-4-羟苯基-乙酸I2R-2-氨基-2-4-羟苯基乙酸J.阿莫西林和阿莫西林噻唑酸n个的低聚物D-阿莫西林阿莫西林噻唑酸阿莫西林噻唑酸…. SOP-B/QU/06/569 6/8 K.阿莫西林噻唑酸n个低聚合物阿莫西林噻唑酸阿莫西林噻唑酸…. L.2S5R6R-6-2S5R6R-6-2R-2-氨基-2-4-羟苯基乙酰基氨基-33-二甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环3.2.0庚烷-2-羰基氨基-33-二甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环3.2.0庚烷-2-羧酸6-APA阿莫西林氨基化合物。

5.6.水分5.6.1.1.操作过程称定供试品100mg依据卡尔费休试剂水分检验标准操作规程平行测定2次以平均值作为最终结果。

5.7.硫酸盐灰分5.7.1.1.称定供试品称定供试品约1.0置已经炽灼至恒重的坩埚内按照药典附录进行操作。

5.8. 含量5.8.1. 测定方法采用高效液相色谱法测定。

5.8.2. 仪器与材料高效液相色谱仪、电子天平、超声波清洗
仪、溶剂过滤器、酸度计、18色谱柱、烧杯、量筒、50mL容量瓶、25mL容量瓶、100mL容量瓶、5mL移液管、2mL移液管、注射器、0.45μm微孔滤膜。

5.8.3. 试剂与试液5.8.3.1.乙腈色谱纯5.8.3.2.2mol/L氢氧化钠溶液称定氢氧化钠8g用纯化水溶解至100mL摇匀。

5.8.3.3.缓冲液配制250.0ml0.2MKH2PO4溶液用稀NaOH液调pH至5.0用水稀释至1000.0ml。

SOP-B/QU/06/569 7/8 5.8.3.4.流动相A取缓冲液与乙腈按991的比例混匀经0.45μm微孔滤膜过滤待用配戴防护口罩、橡胶手套必要时在通风橱内操作。

5.8.3.5.流动相B取缓冲液与乙腈按8020的比例混匀经0.45μm微孔滤膜过滤待用配戴防护口罩橡胶手套必要时在通风橱内操作。

5.8.3.
6.样品溶液a用流动相A溶解30.0mg精密称定样品并稀释至50mL 容量瓶。

5.8.3.
7.样品溶液b用流动相A溶解37.5mg精密称定样品并稀释至
25mL容量瓶。

5.8.3.8.参照溶液a用流动相A溶解30.0mg精密称定阿莫西林三水酸对照品并稀释至50mL容量瓶。

5.8.3.9.参照溶液b用流动相A溶解4.0mg头孢羟氨苄对照品并稀释至50mL容量瓶。

精密量取5.0mL该溶液加5.0mL精密量取参照溶液a并用流动相A稀释至100mL容量瓶。

5.8.3.10.参照溶液c精密量取2.5mL参照溶液a用流动相A稀释至100mL容量瓶。

5.8.4. 色谱条件与系统适用性试验5.8.4.1. 色谱条件规格长为0.25m内径为4.6mm填充为十八烷基硅烷基硅胶粒径5um.流速为1.0mL/min检测波长254nm进样量50ul。

5.8.4.2. 系统适用性试验用流动相比AB为928的流动相平衡柱子如有必要可调整流动相AB比率。

重复性试验注入参照溶液a六次只有在主峰面积相对参照偏差最大为1.0检獠庞行А?5.8.4.3. 分离度用流动相A: B92: 8平衡色谱柱后取对照溶液b进样记录色谱图两个主峰的分离度R应≥2.0否则测试无效。

需要时调节A:B的比例。

baabWWtt18.1R 式中R为分离度tb ta为两个主峰的保留时间Wa Wb为两个主峰的半峰宽。

5.8.4.4.容量因子质量分配系数阿莫西林的质量分配系数应在
1.3
2.5之间。

00Rtttk’ 式中K’: 为容量因子tR: 为阿莫西林保留时间t0: 为死时间溶剂乙腈的保留时间. 5.8.4.5.重复性注入参照溶液a6次主峰面积的相对偏差应不大于2.0。

5.8.4.6.样品测定样品溶液a和参照溶液a分别进样50ul。

5.8.5. 计算公式为SOP-B/QU/06/569 8/8 W对照×S A检品C16H19N3O5S × × 100 A对照W检品×1-水分式中W对照、W检品分别为阿莫西林对照品、检品的重量g S为对照品的含量A检品、A对照品分别为阿莫西林检品、对照品的峰面积水分为检品的水分。