葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度

结果分析
一.结果可报告范围： 本法对葡萄糖的检测范围为0.06～22.2 mmol/L。当样品测 定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+ 4稀释， 重新测定，结果乘以5。
二.当样品中抗坏血酸浓度≤ 852 µmol/L，胆红素浓度≤ 684 µmol/L ，血红蛋白浓度≤ 2.00 g/L，甘油三酯浓度≤ 22.6 mmol/L时没有观 察到干扰。
（4）取4支试管，按下表加入试剂: 标准(ml) 血清样品 葡萄糖标准液 蒸馏水 酶酚混合试剂 – 0.02 – 3.00 正常 (ml) 0.02 – – 3.00 注射后(ml) 0.02 – – 3.00 空白(ml) – – 0.02 3.00
将各管充分混匀，37℃ 水浴中保温15min；取出 冷却至室温后，505nm处比色；以空白管调零，读取 标准管及测定管光密度值。
三.测定的血糖浓度异常： 反应不彻底引起的（偏低） 葡萄糖标准溶液浓度有问题（偏高或偏低） 移液器引起的（偏高或偏低）
【思考题】
1.为什么要在饥饿条件下采血？ 血糖主要来源是食物，进食会增高血糖浓度。 2.除糖尿病外，若血糖浓度测定结果不正常 可考虑哪些原因？ 注射葡萄糖、饮食、糖代谢疾病、应激反应 3.本法测定血糖为何不需制备血滤液？ 血滤液除蛋白，对血糖测定没有影响。 4.为什么取血前要涂凡士林？ 起润滑，防渗血作用。
试管变化 试剂仍清晰呈蓝色，如有多量尿 酸存在也可能少许蓝灰色沉淀 仅冷却后有少量绿色沉淀 煮沸约1min后，出现少量黄绿色 沉淀
结果符号 — + ++
中等量1~2
多量2以上
煮沸约15s，即呈土黄色沉淀
开始煮时，即呈多量红棕色沉淀
+++
++++
【注意事项】
1.操作到位，取量要准确，吸量管不能混用。 2.血清分离后要及时的测定以免影响实验结果。 3.试剂中含叠氮钠（0.95 g/L）为防腐剂。不可入 口！避免接触皮肤及粘膜。 应采取必要的预防措施 使用试剂。
标准浓度法 A标=KC标L A样=KC样L
C样=
A样
A标
× C标
实验前准备
【标本】 1.血浆 应在血液采集1小时内尽早分离。
【试剂】 酶酚混合试剂（PH7.0） 5mmol/L葡萄糖标准应用液 班氏试剂 【器材】 试管、试管架、吸量管、移液枪、恒温 水浴、722型分光光度计。
具体操作
（1）称重； （2）取血： •找到耳缘静脉，二甲苯擦拭，涂薄层凡士林（有何作 用）。 •用三棱针刺破耳缘静脉放血(自然血流)，将血液收集于 草酸钠抗凝管内（边接边摇,以防凝固），取约5ml 。 •离心，2000rpm，10min，取上清，编号； （3）注射激素后再取血: •皮下注射肾上腺素(0.4mg/kg体重)， 记录在注射时间 。 •30min后取血5ml于抗凝管内, 离心，2000rpm，10min ，取上清，编号。
CHO
COOH
(CHOH)n
CH2OH 醛糖
+ 2Cu2+ + 4OH-
(CHOH)n + 2CuOH
CH2OH 醛糖酸
+ H2 O
2CuOH
H2 O
+ Cu2O
黄色或红色
操作步骤
20滴班氏剂 A尿液2滴 B尿液2滴
煮沸5min
煮沸5min
葡萄糖含量(g/L) 无糖 微量0.5以下 少量0.5~1
肾上腺素由肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚胺激素 。 肾上腺素升高血糖机制： 在应激状态、内脏神经刺激和低血糖等情况下， 肾上腺素被释放入血液循环，促进糖原分解并升 高血糖，促进脂肪分解，促进非糖物质向血糖的 转化，使血糖浓度增大。
一、血糖测定
福林-酚试剂法
葡萄糖氧化酶法
邻甲苯胺法
葡萄糖氧化酶法原理
葡萄糖氧化酶（GOD 葡萄糖酸＋H2O2 葡萄糖＋O2＋H2O ） 氧化，37oC H2O2 ＋ 苯酚 ＋ 4-氨基安替吡啉 37oC 辣根过氧化物酶（POD ） Trinder反应 H2O ＋红色醌亚胺 + O2 溶液在505wk.baidu.comm下有吸收峰,可用比色法测定,得出葡萄糖的浓度 。
结果记录
标准(ml) 正常 (ml) 注射激素后(ml) 空白(ml)
A 血糖浓度 增高率
动脉血
血细胞、大分子蛋白质等
二、 尿糖
尿糖是指尿中的糖类，主要是 指尿中的葡萄糖。正常情况下 ，肾小管能将肾小球滤过的葡 部分水 、无机 萄糖全部重吸收回血液，当血 盐、葡 糖>肾糖阈8.96-10.08mmol/L, 超过肾小管的重吸收能力,部分 二、萄糖、 维生素 葡萄糖随尿排出。尿糖的测定 、尿素 虽然不能单纯作为糖尿病的诊 等 断标准，但是从某种层面上也 能反映一些问题。
葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度
生物化学与分子生物学专业 XXX 邮箱:
一.实验要求
1.掌握血糖测定原理，计算方法，参考正常值，临床意义。 2.了解尿糖的测定及意义。
二.实验内容
1.收集耳缘静脉血,制备血浆,葡萄糖氧化法比色测定血糖浓度。
2.收集尿液,班氏法测定。
血糖
血糖（blood glucose,BG）指血浆（清）中的糖类物质，主 要为葡萄糖。 一.血糖的来源： 食物、糖原的分解、糖异生。 二. 血糖的去路： 有氧氧化、转换成非糖物质、尿排出、糖酵解。
1.正常血糖浓度: 3.9-6.1 mmol/L(成年人空腹) 低血糖: 低于 2.8 mmol/L 高血糖: 超过 7.8 mmol/L 2. 低血糖的因素：胰岛素、磺脲类药、饮酒、严重饥 饿 高血糖的因素：进食、情绪紧张时、糖尿病. 3. 糖尿病的诊断和治疗监视、新生儿低血糖症等.
肾上腺素
adrenaline;epinephrine
近 端 重吸收 小 管
血 浆
尿糖
尿糖测定
1.班氏定性试验：
2.葡萄糖氧化酶试纸法（干化学法）：反应原理同血糖 葡萄糖氧化酶法。
班氏定性试验原理： 利用葡萄糖或其它还原性物质在碱性高温环境中，将反应液中 Cu2+还原为亚铜离子Cu+，形成黄色的氢氧化亚铜或红色的氧化 亚铜。根据显色的程度，可对尿葡萄糖作定性及半定量检测。