2017年主管检验技师考试微生物检验讲义第15章弧菌科及检验

弧菌科及检验
弧菌科共同特点是一群氧化酶阳性、具有极端鞭毛、动力阳性、发酵葡萄糖的革兰阴性直或微弯的杆菌。

弧菌科包括4个菌属，即弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发光杆菌属。

前三属细菌均可引起人类感染，发光杆菌属对人无致病性。

弧菌属极端鞭毛、甘露醇、脂酶、生长需要NaCl、对O129敏感五项为＋＋＋＋＋，气单胞菌属为－＋＋－－，邻单胞菌属为－－－－＋，发光杆菌属为－－＋/－＋＋。

一、弧菌属
弧菌属的细菌分布广泛，以水中最多。

世界卫生组织腹泻病控制中心根据细菌的抗原性、生化特性、DNA同源性、致病性和耐盐性等将弧菌分为四类：①O1群霍乱弧菌；②不典型O1群霍乱弧菌；③非O1群霍乱弧菌；④其他弧菌。

最后一类包括副溶血性弧菌、溶藻弧菌、河弧菌、创伤弧菌、麦氏弧菌和拟态弧菌。

本属菌共有100余种，大多数菌种为非病原菌，对人类致病的主要有霍乱弧菌和副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒。

（一）霍乱弧菌
霍乱弧菌是霍乱的病原菌，该病为一种急性烈性肠道传染病，发病急，传染性强，死亡率高。

1.生物学特性
（1）形态染色：本菌呈弧形或逗点状，大小为（1.4～2.6）μm×（0.5～0.8）μm。

新分离的菌株形态典型，经人工培养后易失去弧形而呈杆状。

无芽胞有菌毛，有些菌株有荚膜。

一端有一根粗而长的鞭毛，运动活泼。

取患者米泔水样粪便作悬滴观察，可见该菌呈穿梭样或流星状运动。

液体培养物滴片染色镜检，可见排列如“鱼群状”革兰阴性弧菌。

（2）培养特性：需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好，耐碱不耐酸。

常选用pH8.5的碱性蛋白胨水增菌培养，以抑制其他细菌生长，有利于本菌的繁殖，可在无盐环境生长。

在碱性蛋白胨水中，经37℃培养6～9h，在液体表面大量繁殖形成菌膜，可达快速增菌的目的。

在碱性琼脂平板上，经培养18～24h，形成较大、圆形、扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落。

在硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）上，形成较大黄色菌落。

在含亚碲酸钾琼脂平板上，因还原亚碲酸钾成金属碲，使菌落中心呈灰褐色。

或庆大霉素琼脂上形成的菌落中心呈灰褐色。

（3）生化反应：两个生物型的霍乱弧菌均能分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖，产酸不产气。

迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖。

氧化酶、明胶酶试验和ONPG试验均阳性。

能产生靛基质，霍乱红反应（即亚硝基靛基质试验）阳性。

（4）抗原结构与分型：霍乱弧菌具有耐热的特异性O抗原和不耐热的非特异性H抗原。

H抗原为弧菌属所共有，特异性低。

O抗原特异性高，具有群特异性和型特异性，是分群和分型的基础。

再根据是否与
O1群抗血清凝集分成O1群霍乱弧菌和非O1群霍乱弧菌。

O1群霍乱弧菌的菌体抗原由A、B、C三个抗原组成，O1群霍乱弧菌可根据其菌体抗原不同，又分三个血清型，即O抗原成分为AC的稻叶型，AB的小川型，ABC的彦岛型。

非O1血清群的O2～O138群广泛分布于地面水中，可引起散发的胃肠炎，从未引起过霍乱流行。

因这些血清群均不与O1群抗血清凝集，又统称为不凝集弧菌。

而1992年发现的新流行菌株为一种新群，即O139群。

它不被O1群抗血清所凝集，亦不被O2～O138群抗血清凝集。

能被O1群血清凝集，但不产生致病毒素的不致病弧菌称不典型O1群霍乱弧菌。

生物型，O1群霍乱弧菌有两个生物型：古典生物型和EITor生物型。

可通过下表加以鉴别。

如表：霍乱弧菌两个生物型的鉴别
（5）变异性：有形态变异、菌落变异、溶血性变异和毒力变异。

（6）抵抗力：本属菌对热、干燥、日光、酸、消毒剂很敏感。

但耐碱力较强。

2.微生物检验
（1）标本采集：标本以粪便为主，尽可能在患者用药之前采取。

可用无菌棉拭子采取自然排出的新鲜粪便，亦可用直肠拭子由肛门插入直肠3～5cm处采集。

一般米泔水样便采取1～3ml，成形便采取蚕豆大小。

采集的标本应及时接种适宜培养基。

不能及时接种者，要接种于保存或运送培养基内尽快送检。

常用的保存或运送培养基有碱性蛋白胨水、文-腊二氏保存液和卡-布运送培养基等。

（2）检验方法及鉴定
1）直接镜检：①动力观察：取患者米泔水样粪便制成悬滴片，观察细菌动力，可见流星或穿梭状运动的细菌；②制动试验：若患者米泔水样便标本或6h胨水增菌液中发现运动活泼的弧菌，可再做一张涂片，加一滴不含防腐剂的霍乱多价诊断血清（效价1:64），弧菌凝集，运动停止，则可鉴定；③涂片染色：取标本涂片2张，干燥后用乙醇固定，分别用革兰染色及1:10稀释复红染色，镜检观察有无革兰染色阴性呈鱼群状排列的弧菌。

2）分离培养：①直接分离培养：急性期患者米泔水样粪便标本，除增菌外可同时将标本分离培养，常可获得阳性结果。

分离用的培养基有强、弱2种选择培养基。

弱选择培养基如碱性琼脂和碱性胆盐琼脂，抑制能力弱，粪便中某些杂菌仍可生长。

强选择培养基常用的有庆大霉素琼脂、4号琼脂和TCBS琼脂等。

现多采用碱性蛋白胨水增菌，再用强选择培养基进行分离。

②增菌后分离培养：来自带菌者或恢复期患者的标本，因含菌量少必须先增菌后分离。

可将标本接种于碱性蛋白胨水内，置35℃增菌6～8h后分离培养，必要时可做二次增菌后再进行分离培养，即取第一次增菌液0.1～0.2ml转种一支新增菌管，培养6～8h后，再作分离培养。

3）鉴定：根据霍乱弧菌在各种选择培养基上的特点，挑选可疑菌落进行鉴定。

鉴定以血清学（玻片凝集）为主，结合形态学、生化反应作出判断。

必要时做其他试验以便与其他类似细菌进行鉴别。

（二）O139型霍乱弧菌
属非O1群霍乱弧菌，可与O139抗血清凝集。

治疗原则：输液，纠正电解质紊乱，选用合适的抗菌药物。

（三）副溶血性弧菌
副溶血性弧菌是一种嗜盐性弧菌。

常存在于近海海水、海产品及盐渍食品中。

它是我国沿海地区最常见的食物中毒病原菌。

1.生物学特性
（1）形态染色：革兰阴性杆菌，随培养基不同菌体形态差异较大，有卵圆形、棒状、球杆状、梨状、弧形等多种形态。

两极浓染。

菌体一端有单鞭毛，运动活泼。

无芽胞、无荚膜。

（2）培养特性：营养要求不高，在普通培养基中加入适量NaCl即能生长。

NaCl最适浓度为35g/L，
在无盐培养基中不生长。

本菌不耐热，不耐冷，不耐酸，对常用消毒剂抵抗力弱。

生长所需pH为7.0～9.5，最适pH为7.7。

需氧，在液体培养基表面形成菌膜。

在35g/LNaCl琼脂平板上呈蔓延生长，菌落边缘不整齐，凸起、光滑湿润，不透明。

在副溶血性弧菌专用选择培养基上形成1～2.5mm，稍隆起、混浊、无粘性、绿色菌落；在SS平板上不生长或长出1～2mm扁平无色半透明的菌落，不易挑起，挑起时呈黏丝状。

在羊血琼脂平板上，形成2～3mm、圆形、隆起、湿润、灰白色菌落，某些菌株可形成β溶血或α溶血。

在TCBS琼脂上不发酵蔗糖，菌落蓝绿色。

（3）生化反应：所有用于该菌的生化反应培养基需加入30g/L NaCl。

本菌在70g/L NaCl培养基中生长，在无盐或100g/L NaCl培养基中不生长。

能分解葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、淀粉产酸不产气，不分解乳糖、蔗糖，但分解阿拉伯糖。

本菌具O抗原、H抗原、及K抗原，以O抗原定群，以O抗原、K抗原组合定型。

靛基质、甲基红试验阳性，V-P、H2S、尿素酶试验阴性；神奈川试验是致病菌株能使人或兔红细胞发生溶血，对马红细胞不溶血，称神奈川试验阳性。

2.微生物检验
（1）标本采集：主要是患者的粪便、可疑食物、炊事用具的洗涤液等。

（2）检验方法及鉴定
①增菌培养：取标本0.5～1ml接种40g/L，NaCl蛋白胨水中，37℃培养，若有本菌存在，一般数小时即出现明显混浊，即可分离培养。

②分离培养：将标本或增菌培养物接种副溶血弧菌选择培养基35℃培养18～24h观察结果。

菌落湿润、混浊无黏性，呈绿色；
③鉴定：根据其形态、染色、多形性、活泼动力等特点，以及在选择培养基上的菌落特征，结合氧化酶试验阳性，在KIA上斜面不产酸，底层产酸不产气，不产生H2S。

在MIU上有动力，靛基质阳性，尿素酶阴性。

以及嗜盐试验和血清学分型可作初步鉴定。

最后鉴定，必要时作进一步生化试验及毒力试验。

3.临床意义致病因子有黏附因子（主要为菌毛）、毒素（如耐热性溶血素），所致疾病为食物中毒及急性胃肠炎，常为被污染的海产品及盐腌制品所引起，此菌尚可引起浅表创伤感染、败血症等。

4.治疗原则选用合适的抗生素及其他抗菌药物，严重病例需输液及补充电解质。

二、气单胞菌属与邻单胞菌属
（一）气单胞菌属
气单胞菌属广泛分布于自然界，可从水源、土壤以及人的粪便中分离。

本属细菌有的种可引起人类腹泻等多种感染。

本菌属主要有10种，包括嗜水气胞菌、豚鼠气单胞菌、温和气单胞菌、杀鲑气单胞菌、中间气单胞菌、维隆气单胞菌、嗜泉气单胞菌、舒伯特气单胞菌、简达气单胞菌和易损气单胞菌。

除杀鲑、中间和嗜泉气单胞菌外，其余7种均有临床意义。

1.生物学特性
（1）形态染色：革兰阴性短杆菌，大小为（1～4）μm×（0.1～1）μm，菌体两端钝圆，单极鞭毛，运动极为活泼（除杀鲑气单胞菌外）。

无芽胞，有窄的荚膜。

（2）培养特性：需氧或兼性厌氧，最适生长温度30℃，但在0～45℃皆可生长。

营养要求不高，在普通培养基上35℃经24～48h形成1～3mm大小，微白色半透明的菌落；在血琼脂上形成灰白、光滑、湿润、凸起直径约2mm的菌落，多数菌株有β溶血环，3～5天后菌落呈暗绿色；在肠道选择培养基上，大多数菌株形成乳糖不发酵菌落；在TCBS琼脂上生长不良；液体培养基中呈均匀混浊。

（3）生化反应：发酵葡萄糖产酸或产酸产气，氧化酶和触酶试验阳性，在65g/L NaCl中不生长。

气单胞菌属的生化鉴定和鉴别前已述及。

2.微生物检验
（1）标本采集：根据不同疾病采集粪便或肛拭子、血液、脓汁、脑脊液、尿液等标本。

（2）检验方法及鉴定
1）直接涂片：标本涂片革兰染色镜检，呈革兰阴性短杆菌。

悬滴标本观察动力，运动活泼。

2）分离培养：血液标本经肉浸液或胰化酪蛋白大豆肉汤内增菌后转种血琼脂平板或含氨苄西林血平板；脓汁、分泌物等直接接种血琼脂平板；粪便标本接种肠道选择培养基。

另一部分标本可接种于PBS，置4℃冷增菌后，于1、3、5、7、17天移种分离平板上。

标本接种后，经35℃培养24～48h，观察菌落。

3）鉴定：①初步鉴定：挑可疑菌落移种KIA、MIU做初步生化反应，KIA：K/A、产气＋/－、H2S－，MIU：＋＋－；氧化酶阳性；②最后鉴定：与类似菌的鉴别，氧化酶试验阳性可与肠杆菌科细菌鉴别，发酵葡萄糖可与非发酵菌鉴别；与弧菌属和邻单胞菌属的鉴别前已述及。

三种气单胞菌的鉴定：葡萄糖产气阴性为豚鼠气单胞菌，葡萄糖产气、七叶苷、水杨素为＋＋＋者是嗜水气单胞菌，为＋－－者是温和气单胞菌。

（二）邻单胞菌属
邻单胞菌属只有一个种即类志贺邻单胞菌。

存在于水、鱼、动物和人类肠道。

能引起人类水样腹泻和食物中毒，在机体免疫力降低时，可引起蜂窝织炎、骨髓炎、脑膜炎和败血症。

本菌属的鉴别前已述及。

（三）临床意义
气单胞菌可引起腹泻，并可引起伤口感染及菌血症，偶尔引起心内膜炎、脑膜炎、肺炎、脊髓炎、腹膜炎、关节炎、血栓性静脉炎和胆囊炎。

邻单胞菌属中类志贺邻单胞菌引起水样腹泻，亦可引起菌血症可伴有脑膜炎。

（四）治疗原则
选用合适的抗菌药物，如严重腹泻（如霍乱样腹泻），应输液及纠正电解质紊乱。

【例题】食未煮熟的海产品后发生暴发性食物中毒最可能由哪种细菌引起
A.鼠伤寒沙门菌
B.痢疾志贺菌
C.副溶血弧菌
D.霍乱弧菌
E.胎儿弯曲菌
『正确答案』C
『答案解析』食未煮熟的海产品后发生暴发性食物中毒最可能由哪种细菌引起副溶血弧菌。

【例题】关于霍乱，下列哪项是错误的
A.为烈性传染病
B.经口传播
C.病后可获得短暂的免疫力
D.起病急、传播快、死亡率高
E.人类对霍乱的免疫力主要靠sIgA
『正确答案』C
『答案解析』关于霍乱，病后可获得长久的免疫力。

【例题】在正常胃酸条件下，需大量霍乱弧菌才能引起感染的原因是
A.该菌不耐酸
B.胃内有乳酸杆菌等拮抗该菌
C.人体对其有较强的天然免疫力
D.该菌致病力弱
E.该菌不耐碱
『正确答案』A
『答案解析』霍乱弧菌的特性为需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好。

耐碱不耐酸。

所以在正常胃酸条件下，需大量霍乱弧菌才能引起感染。

【例题】关于霍乱弧菌在外界中的抵抗力，下列说法中不正确的是
A.在高盐、高糖食品中，霍乱弧菌存活时间短
B.霍乱弧菌在碱性条件下要比其他肠道菌更容易存活
C.煮沸可使水中的霍乱弧菌立即死亡
D.霍乱弧菌对酸类也不大敏感
E.霍乱弧菌可在河水及底泥中越冬
『正确答案』D
『答案解析』霍乱弧菌的特性为耐碱不耐酸。

【例题】以下哪种说法是错误的
A.霍乱红试验阳性为霍乱弧菌所特有的反应
B.尿素试验阳性时呈红色
C.变形杆菌尿素酶试验阳性
D.霍乱弧菌能液化明胶
E.沙门菌硫化氢试验为阳性
『正确答案』A
『答案解析』霍乱红试验：霍乱弧菌在含硝酸盐的蛋白胨水中，所产生的亚硝酸盐与靛基质结合生成亚硝基靛基质，滴加浓硫酸即出现蔷薇红，即为霍乱红试验阳性，但其他非致病性弧菌也有此种反应，故无特异性。

【例题】有关霍乱弧菌细菌特性叙述错误的为
A.革兰阴性，弧形，有极端鞭毛，运动活泼
B.氧化酶阳性
C.发酵葡萄糖
D.耐碱
E.对庆大霉素敏感
『正确答案』E
『答案解析』霍乱弧菌可引起霍乱，发病急，传染性强，死亡率高。

霍乱弧菌为革兰阴性弧菌。

一端有一根粗而长的鞭毛，运动活泼。

为需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好。

耐碱不耐酸。

对庆大霉素不敏感。

【例题】食用海产品8小时出现剧烈腹痛、呕吐、水样便，最可能感染的细菌是
A.大肠埃希菌
B.普通变形杆菌
C.伤寒沙门菌
D.副溶血弧菌
E.铜绿假单胞菌
『正确答案』D
『答案解析』副溶血弧菌的致病因子有黏附因子（主要为菌毛）、毒素（如耐热性溶血素），所致疾病为食物中毒及急性胃肠炎，常由被污染的海产品及盐腌制品所引起，此菌还可引起浅表创伤感染、
败血症等。