分子生物学基础知识1

1.

2.基因重组：指一个DNA序列是由两个或两个以上的亲本DNA组合起来的。

3.克隆载体：能将外源基因在受体细胞中复制扩增并产生足够量目的基因的载体。分为质

粒载体，噬菌体载体，黏粒，酵母人工染色体

4.表达载体：能将外源基因在受体细胞中有效转录和正确翻译的载体。分为原核表达载体，

真核表达载体

5.简述PCR技术的基本原理

答：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

PCR的基本反应包括变性，退火，延伸。变性：升高温度使模板DNA双螺旋结构解开成为单链，变性温度通常在93-97℃；退火：减低温度至略低于引物Tm值（通常在55℃左右），两个脱氧寡核苷酸引物分别与相应的单链DNA模板按碱基配对原则互补结合；延伸：耐热DNA聚合酶（通常用TaqDNA聚合酶）在72℃左右的条件下以引物3′端为合成起点，dNTP 作为原料，按碱基配对原则，沿5′→3分方向合成模板DNA链的互补链

6.PCR技术可在或将在哪些领域内发挥重要的作用？各举一例说明

答：致病病原体的检测；可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、肝炎病毒、结核杆菌、细小病毒B19、EB病毒和人巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。

诊断遗传疾病和产前诊断；减少X连锁遗传病患儿的出生，从孕妇的外周血中分离胎儿DNA，用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因；对孕妇弓形虫，梅毒等检测，这对找出不明原因流产和习惯性流产的病因提供有力的帮助，大大提高优生优育。

癌基因的检测和诊断；。p53癌基因的表达增加和突变，在许多肿瘤早期就可以出现。PCR技术不但能有效地检测到基因的突变，而且可以准确检测癌基因的表达量。

DNA指纹.个体识别.亲子关系鉴定及法医物证、

动植物检疫、

其他:从琥珀中的昆虫.恐龙骨骼.埃及木乃伊样品中提取DNA进行研究，有助于还原历史的真相

7．核酸分子杂交基本原理：是根据核酸变性与复性的基本原理，使两条具有同源序列的核酸单链在一定条件下按碱基配对原则结合形成异源双链的过程。核酸分子杂交可发生在

DNA链和DNA链，RNA链和RNA链或者DNA链与RNA链之间。

8.原位杂交：在不改变细胞或组织形态.不破坏其内部核算结构的情况下，用标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，然后在显微镜下将待测靶核酸在其原有的位置上显示出来的方法

9.DNA芯片的原理：利用DNA分子可以变性、杂交的特性，将大量已知核酸序列作为探针固定于支持物上，与标记的未知互补靶核苷酸序列进行杂交，通过检测杂交信号的分布.强度来判断靶细胞的性质与数量。

最低抑菌浓度（MIC）:体外抗菌实验中，抑制供试细菌生长的抗菌药物的最低浓度。；

2生物利用度:指药物制剂被机体吸收的速率和吸收程度的一种度量；

3.表观分布容积:指药物在体内达到动态平衡时，体内药量与血药浓度的比值。；

4曲线下面积（AUC）:时量(c-t)曲线与座标轴围成的面积;

5.半衰期: 药物在消除相时血浆药物浓度下降一半所需要的时间；

6.稳态浓度: 定时定量多次给药时，当给药速度与消除速度达到动态平衡时的血药浓度;

7.PAE指细菌与抗菌药物短暂接触后，在抗菌药物被清除情况下细菌生长仍受抑制的现象。；

8.AUIC:指血药浓度-时间曲线图中，24小时AUC与MIC的比值;

9. 突变选择窗(MSW): 细菌突变耐药株在最低抑菌浓度-MIC到药物对突变菌株的mic-MPC 之间的距离会被选择出来，;

10.防突变浓度(MPC): 指防止耐药突变菌株被选择性富集扩增所需的最低抗菌药物浓度

二、问答题

1.时间依赖性抗菌药的特点？包括哪些抗生素？应如何正确应用？

答：特点：1 当血药浓度超过对致病菌的MIC（最低抑菌浓度）以后，起抑菌作用并不随浓度的增高而显著增强，而是与抗菌药物的血药浓度超过MIC的时间密切相关；2 PAE（抗菌后效应）较短或没有PAE（抗菌后效应）。

主要包括：青霉素及半合成青霉素类、头孢菌素类、单胺类、碳青霉烯类、万古霉素、大环内酯类、林可霉素类等

最佳给药方式：小剂量均匀分次给药，甚至持续给药

2. 什么是浓度依赖性抗生素？其参考指标可以分为哪类？

答：该类抗菌药物杀菌具有浓度依赖性，血药峰值浓度越高，对致病菌的杀伤力越强，杀伤速度越快。特点：1 抑菌活性随着抗菌药物的浓度升高而增强，当血药峰浓度（Cmax）大于致病菌MIC 的8~10倍时，抑菌活性最强；2 有较显著的PAE。

主要包括：氨基甙类、喹诺酮类和硝唑类等。

最佳给药方式：采用分次给药，或联合应用其他抗生素。

3. 简述抗菌药物治疗性应用的基本原则？

答：（1）诊断为细菌性感染者，方有指征应用抗菌药物；由真菌、结核分枝杆菌、支原体、衣原体、螺旋体、立克次体等病原微生物所致的感染也有应用抗菌药物的指征；

（2）尽早查明感染病原，根据病原种类及细菌药物敏感试验结果选用抗菌药物；

（3）按照药物的抗菌作用特点及其体内过程特点选择用药医|学教育网搜集整理；

（4）抗菌药物治疗方案应综合患者病情、病原菌种类及抗菌药物的特点制订。

4.第一代到第四代头孢菌素各有什么特点？

答：G+ G- β-内酰胺酶肾毒性

一代+++ + 不稳定有

二代++ ++ 较稳定减轻

三代+ +++ 较高稳定基本无

四代++ ++++ 高度稳定几无

5.联合用药的指征是什么？抗菌药根据药效学特点可以分为哪四类？联合用药的结果有哪些？

答：联合用药指征：1 不明原因的严重感染。2 混合感染。3 难治性感染。4 需长时间用药的感染。5 为了增强疗效。6 为了减轻不良反应。

抗生素分类： A 繁殖期杀菌药：β－内酰胺类（青霉素类，头孢菌素类，头霉素类，硫霉素类等），万古霉素类。B 静止期杀菌药：氨基甙类，喹诺酮类，杆菌肽类，多粘菌素。C 快速抑菌药：氯霉素类，大环内酯类（红霉素），四环素类，林可霉素类。D 慢效抑菌药：磺胺类，环丝氨酸。

联合用药的相互作用：A+B=协同，即作用加强。A+C=拮抗，即效果降低。B+D=协同或