基础分子生物学(生物科学专业用)

基础分子生物学三、选择题1、RNA 合成的底物是------ ---------。

A dATP, dTTP , dGTP , d CTP BATP, TTP , GTP , CTPC ATP ,GTP, CTP,UTPD 、GTP, CTP,UTP，TTP2．模板DNA的碱基序列是3′—TGCAGT—5′，其转录出RNA碱基序列是：A．5′—AGGUCA—3′ B．5′—ACGUCA—3′C．5′—UCGUCU—3′ D．5′—ACGTCA—3′E．5′—ACGUGT—3′3、转录终止必需。

A、终止子B、ρ因子C、DNA和RNA的弱相互作用 D上述三种4、在转录的终止过程中，有时依赖于蛋白辅因子才能实现终止作用，这种蛋白辅因子称为---- -----。

A σ因子B ρ因子C θ因子D IF因子5．识别RNA转转录终止的因子是：A．α因子 B．β因子 C．σ因子 D．ρ因子 E．γ因子6．DNA复制和转录过程有许多异同点,下列DNA复制和转录的描述中错误的是：A．在体内以一条DNA链为模板转录，而以两条DNA链为模板复制B．在这两个过程中合成方向都为5′→3′C．复制的产物通常情况下大于转录的产物D．两过程均需RNA引物E．DNA聚合酶和RNA聚合酶都需要Mg2+7、核基因mRNA 的内元拼接点序列为。

A、AG……GUB、GA……UGC、GU……AGD、UG……GA8、真核生物mRNA分子转录后必须经过加工，切除---------，将分隔开的编码序列连接在一起，使其成为蛋白质翻译的模板，这个过程叫做RNA的拼接。

A 外显子B 启动子C 起始因子D 内含子9、在真核生物RNA polⅡ的羧基端含有一段7个氨基酸的序列，这个7肽序列为Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser ,被称作。

A C末端结构域B 帽子结构C Poly(A)尾巴D 终止子10．真核生物RNA的拼接需要多种snRNP的协助，其中能识别左端（5’）拼接点共有序列的snRNP 是：A．U1 snRNP B．U2 snRNP C．U5 snRNP E．U2 snRNP+ U5 snRNP四、是非题1、所有的启动子都位于转录起始位点的上游。

（ X ）2、RNA分子也能像蛋白酶一样，以其分子的空间构型产生链的断裂和和合成所必须的微环境。

（对）3、真核生物的mRNA中的poly A 尾巴是由DNA编码，经过转录形成的。

（ X ）4、在大肠杆菌RNA聚合酶中，β亚基的主要功能是识别启动子。

（ X ）5、所有起催化作用的酶都是蛋白质。

（ X ）五、问答题1. 简述转录的基本过程?答：⑴全酶与启动子结合的封闭型启动子复合物的形成（ R位点被σ因子发现并结合）⑵开放型启动子复合物的形成：①RNApol的一个适合位点到达－10序列区域，诱导富含A·T的Pribnow 框的“熔解”，形成12－17bp的泡状物，同时酶分子向－10序列转移并与之牢固结合②开放型启动子复合物使RNApol聚合酶定向③两种复合物均为二元复合物（全酶和DNA ）⑶在开放型的启动子复合物中，RNApol的I位点和E位点的核苷酸前体间形成第一个磷酸二酯键（β亚基）；三元复合物形成； +1位多为CAT模式,位于离开保守T 6~9 个核苷酸处⑷σ因子解离→核心酶与DNA的亲和力下降起始过程结束→核心酶移动进入延伸过程2.试比较原核和真核细胞的mRNA的异同.⑴原核生物①原核生物mRNA 的半衰期短。

②许多原核生物mRNA以多顺反子形式存在。

③其5’端无帽子结构，3’端没有或只有较短的poly(A)。

④原核细胞mRNA（包括病毒）有时可以编码几个多肽。

⑤原核生物常以AUG（有时GUG，甚至UUG）作为起始密码子⑵真核生物：①其5’端存在帽子结构。

②绝大多数真核生物mRNA具有poly(A)尾巴。

③其RNA最多只能编码一个多肽。

④真核生物几乎永远以AUG为起始密码子。

3. 以E.coli为例，说出Prok.启动子结构及各部分功能。

答：启动子由两个部分组成：上游部分— CAP-cAMP结合位点（基因表达调控的正控制位点）CAP：降解物基因活化蛋白，环腺苷酸（cAMP）的受体蛋白下游部分— RNApol的进入（结合）位点，－35 ~ －10，包括识别位点和结合位点1） Sextama 框：-35序列，位于复制起点上游35个核苷酸处的6核苷酸序列，能被RNA 聚合酶全酶识别并结合。

其中，σ亚基在识别中起关键作用。

2） Pribonow 框：-10序列，位于-10处的6核苷酸序列（TATAAT），能使RNA聚合酶识别DNA双链中的反义链，确保转录的链和方向无误。

4．真核生物的RNA聚合酶是如何区分的?有几类? 分别转录哪些RNA?根据对α - 鹅膏蕈碱的敏感性不同而分三类：RNApolⅠ：最不敏感（动、植、昆） RNApol Ⅱ：最敏感 RNApol Ⅲ：不同种类的敏感性不同转录产物：RNApolⅠ：核仁活性所占比例最大转录rRNA（5.8S、18S、 28S）RNApolⅡ：核质主要负责 hnRNA、snRNA 的转录hnRNA（mRNA 前体，核不均一RNA） snRNA（核内小分子 RNA ）RNApol Ⅲ：核质负责 tRNA、5S rRNA、Alu序列和部分 snRNA5．真核生物-25 ~ -35区、-70 ~ -80区的保守序列分别是什么？Sextama框 (Sextama Box),-35序列, 大多数启动子中共有序列为TTGACACAAT框（CAAT box）：其一致顺序为GGGTCAATCT，是真核生物基因常有的调节区，位于转录起始点上游约-80-100bp处，可能也是RNA聚合酶的一个结合处，控制着转录起始的频率。

6．真核生物有几种启动子?真核生物中有三种不同的RNA聚合酶，因此也有三种不同的启动子：RNA polⅠ启动子、RNA pol Ⅱ启动子、RNA polⅢ启动子。

7．说明poly(A)在分子生物学实验中的应用价值。

a) 可将 oligo (dT) 与载体相连，从总体RNA中分离纯化mRNAb) 用寡聚dT（oligo (dT)）为引物，反转录合成 cDNA8．Euk.mRNA帽子的种类。

帽子0 （Cap-0） m7GpppXpYp-------（共有）m7G N7—甲基鸟苷帽子1 （Cap-1） m7GpppXmpYp--------第一个核苷酸的 2’-O 位上产生甲基化（A N6 位甲基化）帽子2（Cap-2） m7GpppXmpYmp第二个核苷酸的 2’-O 位上产生甲基化（A、G、C、U）9．真核生物mRNA的3‘poly(A)的编码情况及其准确生成的机制为何？大多数真核生物的mRNA 3'末端都有由100~200个A组成的Poly（A）尾巴。

生成：a、 RNA末端腺苷酸转移酶（poly(A) 聚合酶）催化前体－－ATP反应如下： Mg++ 或 Mn++多聚核糖核酸+nATP ————>多聚核糖核酸(A)n + nPPib、添加位点内切酶(360KDa)切除一段序列———> 由poly(A) 聚合酶催化添加poly(A)内切酶的识别位点（有其它因子参与）切点上游 13－20bp处的AAUAAA，切点下游的 GUGUGUG （单细胞Euk.除外）10．增强子最早在哪里发现?简述它的5个作用特点。

SV40的两个正向重复研究得最清楚（DR）,-107~ -178 、-179 ~ -250 ; 各 72bp .该增强子的特点如下：⑴对依赖于TATA框的转录的增强效应高于不依赖的情况⑵距离效应: 离72bp越近的容易起始转录⑶转录方向离开72bp的起始序列优先转录⑷细胞类型的选择：不同类型中作用有差异11．剪接体由哪些成分组成？试述剪接过程中各组分的组装过程及其剪接机制。

剪接体：是以五个不同的小核核糖核酸以及不下于一百个蛋白质所组成的大型核糖核酸蛋白质复合物，称为小核核糖蛋白。

剪接体剪接及自剪接涉及两个步骤的生物化学过程。

两个步骤均需要在RNA间进行转酯反应。

但是tRNA剪接则没有交醋化/转酯化过程。

剪接体及自剪接交酯化反应的发生有特定的次序。

首先，一个在内含子的特定“剪接分支位点”核苷酸会与这个内含子的第一个核苷酸产生转酯化反应，形成两个RNA分子，一个是“内含子套索”另一个则是内含子前的外显子。

第二，第一个外显子最后的核苷酸会与第二个外显子的首个核苷酸产生转酯化反应，连接外显子并释放内含子套索。

12．真核生物mRNA前体内含子剪接的信号序列特征是什么？mRNA前体中内含子的两端边界存在共同的序列，这些序列可能是产生mRNA前体剪接的信号。

多数细胞核mRNA前体中内含子的5’边界序列为GU，3‘边界为AG。

13．剪接分支位点核苷酸是什么？腺嘌呤核糖核苷酸14．什么是选择性剪接？说明选择性剪接在果蝇性别决定中的作用机制。

选择性剪接是指透过对同一个基因转录的相同pre-mRNA使用不同的剪接选择，产生不同的mRNA 异构物，最后产生多种相似却又独特的蛋白质，或是产生出稳定性低的mRNA产物以达到调节基因表现的目的。

15.I型内含子发生改变后，可以产生其他酶的活性吗?如果可以，是哪些活性?这意味着I型内含子的催化中心有什么特点？答：可以。

这些活性包括：RNA聚合酶、内切核酸酶、磷酸酶、连接酶的活性。

将I 型内含子转变成这些酶的能力表明它能结合于RNA的糖—磷酸骨架并能催化在它前后的几个不同反应。

例如，连接是剪切的相反反应。

16.转录涉及模板链和编码链的分离，解释在转录中单链DNA是怎样被保护的。

答：转录过程中控板与编码链分离时，聚合酶覆盖了整个转录泡——从解旋位点到螺旋重新形成位点，因此单链的DNA被保护起来。

与复制不同，转录不需要单链结合蛋白的参与。

17.哪三个序列对原核生物mRNA的精确转录是必不可少的?答： -35(RNA聚合酶结合位点)、-10(RNA荣合酶起始位点)启动子序列和终止子；18．原核生物与真核生物启动子的主要差别？原核生物TTGACA --- TATAAT------起始位点-35 -10真核生物增强子---GC ---CAAT----TATAA—5mGpp—起始位点-110 -70 -2519．一双链DNA分子如下图所示，在体内它编码五个氨基酸残基的多肽：3’TAC ATG ATC ATT TCA CGG AAT TTC TAG CAT GTA5’5’ATG TAC TAG TAA AGT GCC TTA AAG ATC GTA CAT3’试问：（1）．哪条链是转录的模板链？5’ATG TAC TAG TAA AGT GCC TTA AAG ATC GTA CAT3’（2）．写出该五个氨基酸残基的多肽。