分子生物学与基因工程复习提纲

分子生物学与基因工程复习提纲

第一章绪论

1、分子生物学简史

理论上的三大发现

生物的遗传物质是DNA

DNA双螺旋模型

遗传信息的传递方式

技术上的三大发现

基因操作的工具酶的发现

载体的应用

逆转录酶的发现

2、证明遗传物质是DNA的三大经典实验

肺炎双球菌转化实验

噬菌体感染实验

病毒重建实验

3、1953年，Watson/Crick 提出了DNA双螺旋结构模型。

4、遗传信息的传递方式的发现

1961 年Monod 和Jacob 提出了操纵子学说；

1964 年Nirenberg 等提出了“三联体密码说”；

Crick 提出了遗传信息流向和表达的中心法则。

5、限制性核酸内切酶的定义、特点以及在基因工程中的意义；DNA连接酶

6、克隆载体和表达载体

第二章染色体与DNA

1、核酸、核苷酸、核苷、碱基、嘌呤、嘧啶、DNA、RNA、磷酸二酯键

2、染色体、核小体、组蛋白、非组蛋白

3、基因组大小与C值矛盾、重复序列

4、真核基因组结构的特点；与原核基因组的差异

5、DNA双螺旋结构的要点、氢键、碱基堆集力、A、B、Z型结构

6、超螺旋结构、正/负超螺旋

7、DNA复制、半保留复制、半不连续复制、冈崎片段、拓扑异构酶、Klenow片段

8、真核生物DNA复制的特点

9、转座、转座子、转座子的分类和共同特点、转座的遗传效应

第三章RNA合成

1、转录、转录泡、有义链、反义链、RNA聚合酶

2、启动子、终止子、增强子、依赖ρ因子的终止、不依赖ρ因子的终止

3、原核生物转录的过程

4、真核生物mRNA转录后的加工

5、真核生物成熟mRNA的结构特点

第四章蛋白质的合成

1、遗传密码、密码子、反密码子、密码子偏好性、简并性

2、起始密码子：AUG 终止密码子：UAA、UAG、UGA

3、错义突变、无义突变、同义突变、移码突变

4、tRNA的结构：两个关键部位

3ˊ端CCA：接受氨基酸，形成氨酰-tRNA；

与mRNA的结合部位—反密码子。

5、SD序列、反SD序列

6、蛋白质合成过程（翻译的过程）

7、蛋白质转运的机制、信号肽

第五章基因表达调控

1、基因组、管家基因、组成性表达、可诱导基因（奢侈基因）、诱导、阻遏

2、操纵子、顺势作用元件、反式作用因子

3、原核生物基因调控模型

乳糖操纵子调控的机制：阻遏蛋白负调控以及CAP正调控

色氨酸操纵子调控的机制：反馈抑制和衰减子调控

4、RNA干扰、小干扰RNA（siRNA）、微小RNA (miRNA)

第六章基因工程的酶学基础

1、限制性内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶和反转录酶、DNA修饰酶、外切核酸酶、单链内切核酸酶、RNA酶

2、回文序列、II型限制性内切酶、粘性末端、同工酶、同尾酶、同裂酶

3、TaqDNA聚合酶的特点以及在PCR中的应用

第七章基因工程载体

1、载体、克隆载体、表达载体

2、质粒、噬菌体、柯斯质粒、酵母人工染色体、细菌人工染色体

3、标记基因（报告基因）、插入失活、α-互补、蓝白斑筛选

4、质粒作为基因工程载体的优点

5、碱变性抽提法提取质粒的原理

6、穿梭载体

第八章基因操作的主要技术原理

1、提取核酸的一般程序

2、碱变性法提取质粒DNA的步骤

3、核酸浓度与纯度测定的方法：紫外吸收

4、核酸电泳：琼脂糖电泳、脉冲场凝胶电泳

第九章目的基因的获取

1、PCR的原理和步骤

2、基因组文库、cDNA文库、鸟枪法、DNA化学合成

第十章基因工程的操作过程

1、表达载体的结构特征

2、将目的基因导入受体：

植物：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法

动物：显微注射法

微生物：化学转化法、电转化法

3、重组子筛选：双抗生素法、蓝白斑筛选

4、重组子鉴定：

核酸分子杂交法

裂解细菌电泳鉴定分子大小

限制性内切酶法

PCR法

基因产物检测法

序列分析

5、Northern杂交、Southern杂交、Western Blot、Elisa（酶联免疫吸附）

第十一章基因工程的应用

1、植物基因工程

2、动物基因工程

3、基因工程药物

4、基因治疗

5、基因工程与环保

第十二章基因工程及其产品安全性管理

1、基因工程产品对人类健康的影响

2、基因工程产品对生态系统的影响

3、基因工程生态安全性评价的指标

复习题：

简答题：

1、分子生物学历史上，具有重要意义的理论上和技术上的三大发现分别是什么？

2、什么叫转座子？列举转座子的类型及其共同特点。

3、什么是C值矛盾？试分析C值矛盾产生的原因。

4、载体必备的功能元件是什么，各有什么功能

5、什么是克隆载体和表达载体？在基因工程操作中分别起到什么作用？

6、限制性内切酶具有什么特点？在基因工程中有什么意义？

7、基因组文库的构建过程。

8、PCR反应的关键酶是什么？为什么采用这种酶？详述PCR反应的步骤并解释上述问题。

9、在基因工程的操作中，重组子的鉴定有哪些主要方法？

10、采用双抗生素法筛选含有目的基因的重组菌株的原理和步骤。

11、简述RNA转录的主要过程。