动物的饲养与设施管理 刘洋

隔离检疫室Ⅲ
为未知微生物状况或微生物控制级别较差的动物隔离观察 和等待净化的区域。
隔离检疫室III内的微生物控制级别较低，属于高危区域。 经IACUC且兽医授权的工作人员穿戴个人防护用具进入， 未经许可，不得擅入。
动物设施环境控制
照度和光周期
光照会影响动物的生理，形态，行为及生物节律，小鼠会 根据光照与黑暗确定睡眠，觅食及交配，小鼠饲养房间内 的动物照度强度为15-20 lux, 工作照度为150-200 lux； 光周期为12:12 （光照时间为8:00-20:00，自动控制）。
Fra Baidu bibliotek
二氧化碳安乐死—用于大于7日龄的小鼠 大于14日龄 通二氧化碳30秒后，继续闭合盒盖，让其再窒息30秒，
观察彻底死亡后，投入冰柜中
7-14日龄 由于小崽对二氧化碳耐受，通二氧化碳60秒后，继续闭
合盒盖，让其再窒息10分钟，观察彻底死亡后，投入冰柜中。
物理方法：
脱颈椎，可接受但不推荐的安乐死方法，除非实验需要， 需说明于Animal Protocol，由IACUC审核通过后使用
单独饲养动物需防置在中间，保证其可以看到周围小鼠， 并增加观察频率及放一些福利用品，如筑巢纸等。
动物的标记
• 断趾编号法：
40
50
30
20
60
70
80
90
1
2
3
4
5
10 9
8
6
7
耳标器编号法
动物安乐死
动物安乐死的目的是以人道的方式使动物死亡，使动物在最 低程度的疼痛，恐惧，并在最短的时间内失去知觉和痛觉。
垫料及筑巢材料
• 小鼠的垫料根据材质不同目前有两种：玉米芯垫料与刨花 垫料
• 玉米芯垫料每两周更换一次，刨花垫料每周更换一次 • 对于特殊品系如糖尿病小鼠，或生仔数量特别多的繁殖笼，
更换频率增加一倍。 • 小鼠有筑巢天性，需在笼内放置白扬木丝，软纸等筑巢材
料
普通饲养 每笼5只
饲养密度
繁殖笼
• 可1:1或1:2 配繁，需及时分笼，不允许如出现三窝仔鼠，
不能高压的试剂：激素、麻醉剂等。 小鼠笼盒外壁：只有生产动物房的小鼠以及在胚胎室做实验的小鼠可 以拿进动物房，其它小鼠未经许可决不允许私自拿进动物房。
四、渡槽传入
渡槽内液体应完全没过放 入其中的物品，如质量太 轻要压重物使其完全浸入
不可高压的物品：饲料，拖鞋
动物进入实验动物设施流程
• 如需从生产动物房运输动物到实验动物房，需登记， • 动物由实验动物房传递窗进入 • 放入传递窗前需将笼盒表面消毒 • 放入传递窗后，不可将笼盒带入设施内部 • 需在传递窗内将笼盒打开，并用镊子将动物转移到设施内
• 小鼠饲养设施包括：生产动物房，实验动物房，隔离检疫 室；
• 按微生物控制级别从高到底的顺序为： • 生产动物房---隔离检疫室II---实验动物房---隔离检疫
室I，隔离检疫室III
设施间人，物及动物的控制和流动
1
生产动物房
2 隔离检疫室II
3 实验动物房
4 隔离检疫室 I
5
隔离检疫室III
例外：小鼠净化
适用物品 金属类：各类金属手术器械、小型仪器、容器等可以高压的金属制品 。 玻璃类：试管、烧杯、量桶、培养皿等可高压玻璃器皿。 耐高压塑料制品：笼盒、EP管、小鼠运输盒等可高压塑料制品。 棉、纱类、纸制品：净化服、口罩、抹布、棉花、纱布、卷纸、平板 纸、包装用纸盒、小鼠标牌等。 小鼠饲养用品：小鼠饮用水、垫料。 实验纪录纸制品： 不可高压的塑料和橡胶制品：文具、一次性手套。 不可高压的仪器、设备：天平、接线板、血糖仪、环境监测仪等。 不可高压的食物：果冻等。 消毒液：酒精、过氧乙酸等。
断头，可接受但不推荐的安乐死方法，小于7日龄的仔鼠 可用此方法，除非实验需要，需说明于Animal Protocol， 由IACUC审核通过后使用。
安乐死需注意事项
避免造成存活动物的恐惧感 窘迫的叫声，恐惧的行为及惊吓动物的产生的费洛蒙气味等， 会引起动物的焦躁和不安，这些因素会影响存活动物的身心 平衡与福祉，干扰实验结果。因此，动物安乐死时，最好选 择远离其他存活动物的非公共场所。
饲料的质量控制
• 饲料储存仓库环境控制指标，温度≤21℃，湿度≤50% • 未开口的密封的饲料可有少量存放在动物房或洁品房内 • 开口未用完的饲料放在密封的容器内，同时放入标签写明
开口日期，第二天必须用完，否则舍弃。
饮用水
动物饮用水来源于南京市政水。 实验动物房：市政水经小动物饮水机过滤除菌处理后，直 接接入动物房洁品间，在洁品间加酸灌瓶分装。 其他动物设施：市政水通过二级反渗透（RO）处理后， 在动物房外部加酸装好后高压灭菌，进入动物房内部。 饮水瓶一周至少更换一次避免细菌滋生，换水时应整瓶更 换，勿以旧瓶直接充水，避免微生物污染。 水中加入分析纯盐酸使PH达到2.8-3.0，可预防细菌的滋 生。
白化小鼠对光照敏感，如长时间暴露在强光下会影响动物 的生理功能及生殖，需将白化小鼠防止在中下层，避免强 光。
温湿度
小鼠对环境温度、湿度很敏感，经不起温度的骤变和过高的温度，温 度过高常影响种母鼠的受胎率和仔鼠生长发育，室温过低，不仅会影 响种鼠的生长繁殖，且易发生多种疾病。小鼠最适宜的室温是18～ 22℃，相对湿度为40～70%。 新生小鼠的最适合温度在22℃，温度过低会引起新生小鼠死亡。 本设施设定温度为23±2℃，湿度为40～70%，冬季房间与IVC笼温 度由热水与蒸汽调节，夏季由冷却塔及空调调节。 温湿度由动物饲养人员每天记录四次，周末及节假日记录两次。 如温湿度出现异常，会在记录上标记红色△，并通知工程部，连续每 半小时观察一次温湿度，直至恢复正常为止。另外，工程部会记录温 湿度。
确认动物死亡 所有动物的安乐死，最终步骤需要确认动物是否已经 死亡。 人员需检查动物的心跳是都完全停止，瞳孔是否放大。停止 呼吸的单一现象不能作为判断动物的依据，因为动物往往先 停止呼吸，数分钟之后才停止心跳，在使用CO2时要尤其注 意。
动物福利检测系统
• 员工、学生或者公众可能会对模式动物福利问题提出意见 和建议，都可以通过模式所电子邮件，传真，电话，填写 意见表或者亲自向IACUC办公室提交。
所有笼具必须通过高压灭菌的方式进入动物设施内部，使用后，通过 缓冲间出来。隔离检疫室的笼具在使用后，仍需经高压灭菌后出来
饲料
• 小鼠一般应采用任食的方式饲养，随时都提供消毒但不潮 湿的饲料任其食用。
• 成年小鼠平均每25g体重小鼠，每天大约吃掉3.75g饲料 和3.75ml水
• 根据小鼠品系及实验要求，小鼠饲料有所不同，特殊饲料 的使用需要在AP中说明，AP提交IACUC审核通过后方可 使用，在使用前到兽医处备案，登记相关信息，通过后方 可使用。
意见被接收
通知涉及项目PI
紧急情况，兽医暂 停全部或部分设施
IACUC主席审核：IACUCA 主席与委员会进行初步审
核；紧急决定
非紧急事件：安排至 下一次IACUC会议讨 论；通知涉及项目PI
隔离检疫室Ⅰ
隔离检疫室Ⅰ为单走廊双屏障系统。
隔离检疫室Ⅰ接收本单位动物必须得到隔离检疫室负责人 的批准，接收外单位动物必须同时得到兽医和隔离检疫室 负责人的批准，虽为隔离检疫室，但某些携带烈性病毒或 病原体的动物仍是不被批准进入的。隔离检疫室Ⅰ内的外 来动物只有经过生物净化（剖腹产或胚胎移植）后方可进 入隔离检疫室Ⅱ，不可以直接转移。
通风
设施内有两套独立的通风系统：房间的通风系统及独立通 风笼具系统(IVC cage) 房间通风换风次数为10-15次每小时，笼内的通风次数为 50次每小时。 室外空气通过初中高效过滤器进入室内与笼内
过滤器的更换： 初效过滤器每年更换六次 中效顾虑器需每年更换2次， 高效过滤器每一年半更换一次
压差
实验动物房
实验动物房是资源库各部门与本单位各实验组以实验为目 的，饲养小鼠的动物设施。
实验动物房的设计为单走廊，人和物皆双向流动，进入无 需沐浴，但需穿戴隔离防护用品、风淋后进入。
实验动物房 饲养区
操作区
胚胎操作区 行为学操作区
隔离检疫室
NRCMM共三个隔离检疫室，均为小型负压屏障系统 隔离检疫室Ⅰ 隔离检疫室Ⅱ 隔离检疫室Ⅲ
在科学使用，教学与试验中，常因下列因素选择让动物安乐 死
实验终结 因研究所需提供血液或其他组织器官 当动物的疼痛与窘迫程度超过预期程度以上 因动物健康及福利的考虑 不适合继续繁殖
使用过量麻醉剂：如异氟烷，戊巴比妥，以低浓度诱导麻 醉后转入高浓度使动物失去意识
CO2：吸入浓度7.5%时动物的疼痛阈值上升，越高的CO2浓 度麻醉效果越快，但是快速将动物暴露在高浓度CO2时会 引起动物窘迫。所以在使用CO2安乐死动物时，放入下一 笼或一批动物前，要把诱导盒盖打开，尽量使CO2浓度降 低后再放入动物。
代乳
2只代乳母乳与一窝仔鼠 2只代乳母乳与二窝出生日期相差不到3天的仔鼠
检栓及移植手术
• 检栓及移植手术在配繁或移植12.5天前，可按照 普通饲养标准饲养，12.5天后一笼内不得超过四 只小鼠。
单独饲养情况
任何情况都应尽量保证动物群居性，如必须单独饲养需要 在AP中申请豁免。
如单放雄鼠，结扎公鼠等。
除隔离检疫室采用负压系统外，其他设施均为正压系统。 由各房间入口的压差计测定，压差应大于10Pa，每天记 录两次，如出现异常需在记录本上标记红色△，并通知工 程部，连续每半小时观察一次压差，直至恢复正常为止。
要随手关闭设施内部门，保持压差
噪音与振动
动物饲养房间内要求噪音小于60dB，房间内不允许使用 收音机，警报器等发声装置。 动物饲养房间墙面为彩钢板，可有效减少并隔离噪音。 动物饲养房间在一楼，并且远离洗刷间，并且通风笼具系 统鼓风机位于技术夹层，可以有效降低振动。 人与动物的听力范围不同，动物能听到人听力范围外的超 声波，有些仪器产生的噪音与振动只有动物能听到与感受 到。 在动物设施内说话应尽量小声。 如在动物设施内发现异常的噪音及振动，应立即通知部门 主管。
干净的笼盒内 • 原笼盒从外部取出
生产动物房
生产动物房活体保存着资源库最重要的各品系种子资源， 是主要负责保种与生产的动物设施。
生产动物房的设计采取双走廊系统，人和物皆单向流动。 采取最高级别的微生物控制措施，先沐浴更衣后方可进入。
生产动物房通常只允许获得IACUC授权的保种员，饲养 员、兽医及设施维护人员进入。其他人员若需进入进生产 动物房，需向IACUC申请并得到批准后方可进入。
经IACUC的工作人员穿戴个人防护用具进入，未经许可， 不得擅入。
隔离检疫室Ⅱ
为生物净化手术操作室及净化后品系的检疫饲养室，净化 获得的后代需经兽医全面微生物检测合格后，方可通过紫 外传递仓直接转移至生产动物房。
隔离检疫室Ⅱ内的环境和微生物控制标准与生产动物房相 同，IACUC授权的工作人员方可进入，进入需沐浴后更 衣。
动物设施环境，动物 饲养及设施管理规范
刘洋
内容
• 动物设施介绍 • 动物设施环境标准 • 动物饲养标准 • 动物福利及检测
小鼠饲养设施的分类及介绍
• NRCMM 拥有小鼠设施2000平米，共有2万左右的笼位，同 时饲养约5万只小鼠，所有小鼠设施均是10000级（ISO 7 级）屏障设施，内部采用独立通风笼具对SPF级小鼠进行 饲养繁育，执行严格的工作流，人流，物流，动物流的控 制。
动物的饲养
饲养笼具
饲养设施内饲养笼具为IVC 笼具，一般分底盒、格栅、饮水瓶、笼盖 等组件。笼内底面为实底，笼具系统统一放置在不锈钢笼架上。隔离 检疫室均为负压IVC，隔离检疫室Ⅱ为EVC。 目前，我所共有来自5个厂商的笼架产品：意大利的Techniplast, 美 国的AllenTown以及Animal Care System（EVC）, 国产的上海天 环以及苏州的艾可林笼具。笼盒由于设计不同，笼盒的进出风方式不 同，为此笼盒需正确放置，确定其进出风口与笼架上的进出风口完全 吻合，以保证笼内的正常换气。
物料在不同动物房之间 不能直接由高到低流动， 需严格遵守物料进出 SOP
物料进入实验动物设施流程
途径 一、高压灭菌 121℃、30 分钟
二、传递仓紫外照射 紫外灯照射 20min 紫外线穿透力很弱，仅限 于表面消毒，请尽量将物 品摊开来，对于可以通过 消毒液浸泡的物品，请先 经过氧乙酸（2%）浸泡 20分钟后，再通过紫外照 射进入 三、经过氧乙酸喷洒 浓度2%的过氧乙酸，20 分钟 喷洒物体表面及传递仓内