PCR实验室设计ppt

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PCR实验室全面解决方案ppt课件

30检测分析基因扩增核酸纯化样本前处理整体服务专业平台多元化应用方便高效标准化可溯源安全性实验流程天隆分子诊断实验室解决方案五大特点31实验安全自动化提取消除人为失误预封装试剂盒设计封闭式自动化提取过程首创镶嵌式温控设计一次性专供耗材数据安全全程实验信息纪录监控全运行过程操作人员实验信息断电保护自动生成纪录文件数据可通过网络和usb输出操作人员不同权限管理全面的防污染措施优化的设计和流程防飞溅设置紫外消毒装置全封闭的设置镶嵌式加热平台与仪器罩上配有磁力装置32天隆科技国内唯一能够自主研发生产核酸提取仪全套设备和试剂的厂家核酸提取仪市场占有率全国第一家忠实用户的选择天隆价值3334国家项目承载完善的产全面的解决方案卓越的服务体系rcr平台芯片平台测序平台analytics天隆科技天隆价值353637
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1
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核酸提取仪市场占有率全国第一
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临床PCR实验室建设及注意事项PPT共41页

55、为中华之崛起而读书。 ——周恩来源自临床PCR实验室建设及注意事项
1、合法而稳定的权力在使用得当时很少遇到抵抗。 ——塞 ·约翰逊 2、权力会使人渐渐失去温厚善良的美德。— —伯克
3、最大限度地行使权力总是令人反感；权力不易确定之处始终存在着危险。— —塞·约翰逊 4、权力会奴化一切。——塔西佗
5、虽然权力是一头固执的熊，可是金子可以拉着它的鼻子走。— —莎士比
谢谢！
51、天下之事常成于困约，而败于奢靡。——陆游 52、生命不等于是呼吸，生命是活动。——卢梭
53、伟大的事业，需要决心，能力，组织和责任感。 ——易卜生 54、唯书籍不朽。——乔特

《PCR引物设计》课件

04
pcr引物的应用与案例分析
pcr引物在基因克隆中的应用
01
pcr引物用于基因克隆的目的是为了获得目的基因的序列信息，进而进行后续的基因功能和表达研究。
02
设计特异性引物，通过pcr技术，从基因或基因组中筛选出目的基因。
引物设计需考虑基因序列的特异性、扩增效率和避免非特异性
03
扩增等因素。
引物特异性优化
避免引物间的互补
引物之间不应存在互补序列，以避免形成引物二聚体或发夹结构。
避免引物与模板扩增和产物。
引物扩增效率的优化
引物与模板的匹配度
引物的3'端应与模板完全匹配，以提高引物的扩增效率。
引物之间的匹配度
两个引物之间应有良好的匹配度，以保证PCR反应的顺利进行。
引导合成
引物作为合成子链的起点，通过与 DNA聚合酶的结合，引导合成与模板互补的DNA链。
决定产物长度
引物的设计决定了PCR产物的长度，通过选择合适的引物，可以控制产物的大小和特异性。
pcr引物设计的基本原则
特异性
长度和序列
引物应与模板DNA具有高度的特异性，避免与其他非目标DNA序列发生非特异性结合。
pcr引物的未来发展方向与挑战
引物设计的自动化
随着生物信息学的发展，未来引物设计可能更加自动化，减少人工干预和误差
。
标准化和质量控制
建立引物设计的标准化流程，加强引物设计的质量控制，确保实验结果的
可靠性和可重复性。
新型引物设计策略
针对特定需求，开发新型引物设计策略，提高PCR反应的特异性和灵敏度。
引物灵敏度测试
03
测试引物在不同模板浓度下的扩增效率，选择灵敏度较高的引

pcr ppt课件教程

引物二聚体
总结词
引物二聚体是指引物之间形成的二聚体，影响PCR扩增效率。
详细描述
引物二聚体的形成可能由于引物设计不当、引物浓度过高、退火温度过低等原因导致。为解决这一问题，可以优化引物设计，降低引物浓度，适当提高退火温度等措施。
05
PCR 实验设计
选择合适的引物
引物长度
根据基因序列选择合适的引物长度，通常为18-30bp。
设置PCR 仪温度循环
设置变性温度
将PCR仪温度设置为95℃，进行变性处理，使DNA双链解开
成单链。
设置退火温度
根据引物特异性，设置适当的退火温度，使引物与单链DNA 结合。
设置延伸温度
设置适当的延伸温度，使DNA 聚合酶从引物起始合成DNA链。
设置循环数
根据实验目的和DNA片段大小，设置适当的循环数，确保目
PCR PPT课件教程
目录
• PCR 简介 • PCR 原理 • PCR 实验步骤 • PCR 常见问题与解决方案 • PCR 实验设计 • PCR 数据分析
01
PCR 简介
PCR 定义
• 聚合酶链式反应（PCR）：一种在生物体外复制特定DNA的分子生物学技术，通过DNA聚合酶的作用，以一对寡核苷酸引物定向导引下完成特定DNA的片段扩增。
在PCR中，DNA的复制是通过特定的引物和聚合酶，在特定的温度和循环次数下完成的。
引物与模板DNA结合后，聚合酶从引物的3’端开始合成新的DNA链。
聚合酶与引物
聚合酶是生物体内负责DNA复制的酶，具有耐高温的特性。
在PCR中，常用的聚合酶有Taq 酶和Tfl酶等。
引物是人工合成的短片段DNA ，能够与目标DNA特异性结合，为聚合酶提供起始点。

pcr技术课件ppt简短

通量PCR检测。
pcr技术的应用范围
01
02
03
基础研究
基因克隆、基因表达、基因组测序、单核苷酸多态性(SNP)检测等。
医学诊断
感染性疾病、遗传性疾病、肿瘤等疾病的诊断。
生物多样性研究
物种鉴定、种群遗传学分析、生态学研究等。
02
CATALOGUE
pcr技术的基本步骤
样本准备
样本类型
选择合适的样本类型，如血液、组织等，以便后续实验操作。
根据目的基因序列，选择特异性好、扩增效率高的引物。
确认模板DNA的质量
设置合理的反应体系
确保使用的模板DNA无降解、无污染，浓度和纯度适中。
根据引物、模板和PCR仪的规格，设置合理的反应体系。实验Βιβλιοθήκη 的注意事项控制好反应温度和时间
PCR反应中，每个温度点的反应时间和升温/降温速度应保持一致。
避免出现非特异性扩增
将DNA模板、引物、dNTPs、酶等试剂加入PCR反应管中。
进行PCR扩增
将PCR反应管放入PCR仪中，按照设定的程序进行扩增。
产物检测和分析
收集PCR扩增产物，进行电泳分析或荧光定量PCR等检测方法，确定目标基因序列是否被成功扩增。
实验后处理
数据分析和结论
对实验数据进行统计和分析，得出结论。
将用过的引物和模板妥善储存，以备后续实验使用。
仪器的维护与保养
定期对PCR仪进行维护和保养，确保设备的正常运行。
05
CATALOGUE
pcr技术的优缺点
优点
01
02
03
04
灵敏度高
PCR技术可以检测出微量的 DNA，灵敏度非常高。

PCR实验室分区设置及要求ppt课件

8
含反应混合液的离心管或试管在冰冻前都应快速离心数秒。大多数用于扩增的试剂都应冰冻贮存。为避免因单次反应取液而频繁的冻融主贮存试剂，应分装冰冻贮存试剂溶液。贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定所需的扩增反应数来决定。
主反应混合液的组成成份尤其是聚合酶的适用性和稳定性通过预试验来检查，评价结果必须有书面报告。对于"热启动"技术(在第一个高温变性步骤后加入酶)，聚合酶也可不包含在主反应混合液中。
清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因，因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
6
试剂准备区设置要求
· 超净工作台或试剂配置箱 · 试剂冰箱 · 可调移液器一套（四支）， · 配有带滤芯（防止气溶胶）及无 RNase酶的吸嘴 · 无粉的乳胶手套 · 涡旋器 · 专用工作服 · 无菌离心管
进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序，即只能从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增区)至产物分析区，避免发生交叉污染。
5
在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服，以便于鉴别。此外，当工作者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出。
10
标本制备区设置要求
· 生物安全柜 · 样本冰箱 · 可调移液器一套（四支）， · 带滤芯（防止气溶胶）及无RNase酶的吸嘴 · 台式微型离心机（最大RCF 16000g，
最小RCF12500g）； · 试管架（Sarstedt 93.1428） · 无粉的乳胶手套 · 涡旋器 · 专用工作服 · 无菌离心管 · 加热块
膜上或微孔板上探针杂交方法(同位素标记或非同位素标记)、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、Southern转移、核酸测序方法等。目前国内的商品试剂盒绝大部分均采用非同位素标记的微孔板上探针杂交方法，即 PCR-ELISA方法，也有膜上探针杂交方法。

PCR实验室设计PPT课件

临床PCR实验室设计
精选PPT课件
1
临床基因扩增检验实验室设计
❖ 依据：卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）
❖ 《医疗机构临床基因扩增管理法》 (卫办医政发〔2010〕194号)
精选PPT课件
2
实验室设计
❖ 空间充分合理的空间 ❖ 良好的照明 ❖ 空调设备
产物分析区
扩增区
标本制备区试剂准备区
空气流向
空气流向缓冲间
空气流向缓冲间
空气流向缓冲间
专用走廊
工作流向
精选PPT课件
6
A
扩增区
门产物分析区
标本制备区门
门
试剂准备区
门
外走廊
门
B
扩增及产物分析区标本制备区来自门试剂准备区门门
精选PP外T走课廊件
门
7
精选PPT课件
8
精选PPT课件
9
精选PPT课件
精选PPT课件
3
临床PCR实验室设计的一般原则
❖ 各区独立
❖ 注意风向 “十六字口诀”
❖ 因地制宜
❖ 方便工作
精选PPT课件
4
理想的PCR实验室设计A
产物分析区
扩增区
标本制备区试剂准备区
空气流向
空气流向缓冲间
空气流向缓冲间
空气流向缓冲间
专用走廊
工作流向
精选PPT课件
5
理想的PCR实验室设计B
10
精选PPT课件
11
精选PPT课件
12
精选PPT课件
13
精选PPT课件
14

PCR实验室规范化管理与质量控制ppt演示课件

第二部分临床基因扩增实验室质量控制
.
23
为什么特别强调质量控制？？
• 容易污染－假阳性 • 处理不当－假阴性
.
24
假阳性问题：
• 标本、试剂及实验场地的污染 • 试剂盒的质量问题

UNG酶是一种选择，但不可因此而高枕无忧
加强管理最为重要
选择优质试剂盒
. 25
假阴性的问题：
原因： 1.标本处理等操作过程问题 2.标本中存在抑制剂 3.由于基因突变所致
(3)记录的保密：
a.“data”由系统设置密码保护； b. 结果资料在报告系统设置密码保护； c. 在用的及保存的文字记录须随时在实验室工作人员的监管下，脱离本室人员视线监管的须存放在上锁的抽屉或文件柜内，钥匙由该工作人员保管。 d. 记录不能涂改，需修改时可用红笔在修改内容上加双斜杠并在备注栏中说明、签字
. 13
(3)标本废弃处理
废弃样本经确认后，保持容器完整，置于废弃标本处，经密闭收集，统一焚烧处理,并有记录。
.
14
7. PCR试验记录的管理
（1）记录方法
a.接受标本记录：以书面形式记录病人信息、样本信息、是否保存，同时对样本作标识，记录人签名；检验时，将标识的样本带入样本处理间处理。 b.PCR扩增检测记录：检测结果以清楚的唯一标识保存于PCR扩增仪的电脑的指定文件夹内，并定期进行备份与整理。
怨者姓名、地址、联系方式、抱怨内容（必要时首先稳定抱怨者情绪）。
.
20
(2) 抱怨的处理（投诉）
a. 能当时处理的抱怨及时解决，记录。 b. 不能当即答复的,按逐级授权,汇报解决。 c. 抱怨的处理以病人满意为目的，但必须以遵重科学，遵重事实为原则，在不违背科学原则，医疗行为规范的基础上，争取抱怨者最大程度的理解。

PCR详细讲解 ppt课件

2
PCR的基本原理
① DNA半保留复制的机理；
② 体外DNA分子于不同温度下可变性和复性的性质。
2021/3/26
PCR详细讲解 ppt课件
3
PCR扩增体系
➢模板（Template）：基因组、质粒DNA、cDNA，也可
以是细菌、组织样品等。
➢引物（Primer）：确定扩增目的序列的特异性；确定
1、避免重复碱基，尤其是G。
2、引物退火温度在58-60℃之间。
3、G+C为30-80%。
4、3’端最后5个碱基内不能有多于2个
的G或C。
5、引物的产物大小一般在80-250bp之
间；80-150 bp最为合适（可以延长至
300 bp）。 2021/3/26
PCR详细讲解 ppt课件
38
Real-Time PCR引物设计原则
2021/3/26
PCR详细讲解 ppt课件
35
引物设计的基本原则
9、引物的3’端不可以A结尾。
引物3’端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为T时，错配的引发效率大大降低，G、C错配的引发效率介于A、T之间，所以3’端最好选择T。
引物设计的最重要的原则：最大限度地提高扩增效率和特异性；同时尽可能减少非特异性扩增。
2021/3/26
PCR详细讲解 ppt课件
26
引物设计的基本原则
1、引物应具有足够的特异性。
如果需要从基因组等较复杂的模板中扩增特定的DNA序列，则需要考虑目的DNA序列的保守性，尽量避免所选引物设计区域序列的非特异性。
30
引物设计的基本原则

PCR详细ppt课件

PCR引物设计
引物决定了PCR产物的长度和特异性。目前有多种引物设计软件，如primer premier5、
Internet免费引物设计网站有primer 3，Primerfinder等。
引物设计有以下几个原则：
（1）引物的特异性。引物应根据目的序列进行设计，引物与非靶序列之间不要超过
70％的同源性或连续8个的碱基互补，减少非特异产物；（2）引物的长度。一般指引物中能与模板序列互补结合的部分，不包括在5’端额外
引物设计软件primer premier 5.0的使用
可通过两个方法将序列输入软件中
打开原有的序列文件
在表中粘贴序列
选择序列文件所在位置
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ

在对话框中输入待扩增序列点击左上角的“Primer”按钮
引物设计界面
对正向和反向引物进行编辑
正向和反向引物的互换正向和反向引物的信息正向和反向引物的评价
用键盘输入了5个碱基
改动后引物的信息
引物的信息
引物在PCR反应中的浓度一般在0.1～ 1μ M之间。浓度过高易形成引物二聚体且产生非特异性产物。一般来说用低浓度引物经济、特异，但浓度过低，不足以完成30个循环的扩增反应，则会降低 PCR的产率。
引物退火温度决定PCR特异性与产量；温度高特异性强，但过高则引物不能与模板牢固结合， DNA扩增效率下降；温度低产量高，但过低可造成引物与模板错配，非特异性产物增加。一般可根据引物的（G+C）%含量进行推测，一般试验中退火温度Ta(annealing temperature)比扩增引物的融解温度 Tm(melting temperature)低5℃，可按公式进行计算： Ta = Tm - 5℃= 4(G+C) + 2(A+T) -5℃ 其中A，T，G，C分别表示相应碱基的个数。

pcr技术ppt课件

在适中温度下进行延伸，完成一个DNA的复制循环。
通过连续循环，DNA片段数量呈指数增长。
PCR技术的发明和发展
1985年，Mullis和Cetus公司的合作者Michael Smith在《科学》杂志上首次公开描述了PCR方法。
1987年，Innis、Gelfand、 White等人建立了PCR技术的标准化方案。
退火
将温度降至50℃左右，引物与单链DNA结合，形成局部
双链。
延伸
温度上升至72℃，DNA聚合酶从引物起始合成新的DNA
链。
降温及终止反应
每个循环结束后降低温度以终止反应，准备进入下一个循环
。
03
PCR技术的操作步骤
准备PCR反应所需的试剂和设备
01
准备PCR仪、离心机、移液器等设备，确保其正常工作。
按照设定的程序进行PCR扩增，记录扩增曲线和数据。
分析扩增产物
将PCR产物进行电泳或荧光检测，观察扩增结果。
利用凝胶成像系统或荧光检测仪对产物进行分析，确定产物的大
小和浓度。
根据需要，可以进行克隆、测序等后续操作，进一步验证PCR产
物的准确性和特异性。
04
PCR技术的优缺点
优点
高灵敏度
PCR技术PPT课件
目录
• PCR技术简介 • PCR技术的基本原理 • PCR技术的操作步骤 • PCR技术的优缺点 • PCR技术的应用实例 • PCR技术的未来展望
01
PCR技术简介
什么是PCR技术
聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外快速扩增特定DNA片段的分子生物学技术。
它利用耐高温的DNA聚合酶（通常为Taq酶）在高温下将双链DNA分子变性解旋为单链，然后通过低温退火使引物与单链DNA分子结合，最后

临床PCR实验室的设计及管理体系的建立PPT课件

阳性室内质控物来源：
浓度及批号：
扩增位置：
阴性室内质控物来源：
批号：
扩增位置：
所取理的标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位置：
1
9
17
25
2
10
18
26
3
11
19
27
4
12
20
28
5
13
21
29
6
14
22
30
7
15
23
31
8
16
24
32
核酸提取及加样过程：按XXX（列出编号）SOP进行。
仪器设备使用：生物安全柜：正常不正常恒温仪温度校准： ℃
毫升；
按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯
毫升；
按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制
毫升；
其他：
仪器设备使用：
离心机：正常不正常
振荡器：正常不正常
实验后：按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，
并进行紫外照射30分钟以上。
空气流向缓冲间
专用走廊
工作流向
第2页/共66页
理想的PCR实验室设计B
产物分析区
扩增区
标本制备区试剂准备区
空气流向
空气流向缓冲间
空气流向缓冲间
空气流向缓冲间
专用走廊
工作流向
第3页/共66页
PCR实验室设计的一般原则
“十六字口诀”
第4页/共66页
A
扩增区
门产物分析区
标本制备区门
门试剂准备区

临床PCR实验室的分区设计和工作流程课件

其他实验室
试剂准备区
空气流向
其他实验室
其他实验室
空气流向
走廊
走廊
其他实验室
空气流向+
其他实验室
标本制备区
其他实验室
其他实验室
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
临床PCR实验室设计的一般原则
各区独立
注意风向因地制宜
“十六字口诀”
方便工作
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临床PCR实验室最有效的防“污染”措施
实验室的“通风” 次氯酸钠溶液的使用 1mol/L HCl溶液的使用紫外照射无水乙醇溶液？
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临床PCR实验室的工作流程
试剂准备区
标本制备区
扩增区
产物分析区
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试剂准备区
PCR实验室中最为“洁净”的区域，不应有任何核酸的存在，包括试剂中所带的标准品和阳性对照。
所有实验用洁净物品如离心管、吸头等的存放和准备处。商品试剂盒： 75%乙醇、焦碳酸二乙酯（DEPC）处理水、
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扩增区
热循环仪的电源应专用，并配备一个不间断电源（UPS）或稳压电源。
每次扩增后，可使用可移动紫外灯对扩增热循环仪进行照射。
扩增仪应定期进行校准。
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主要是用于核酸样本的提取，标本的制备应在生物安全柜内进行，可防止标本气溶胶的扩散。

PCR实验室建立及预防污染ppt课件

污染原因
(二) PCR试剂的污染:主要是由于在PCR 试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.
污染原因
(三) PCR扩增产物污染: 这是PCR反应中最主要最常见的污染问题，因为PCR产物拷贝量大，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳就可形成假阳性。
扩增反应混合物配制和扩增区
• • • • 核酸扩增仪微量加样器（覆盖1-1000ul）可移动紫外灯（近工作台面）消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心） • 专用工作服和工作鞋 • 专用办公用品
扩增产物分析区
视检验方法不同而定。基本仪器设备如下： 1、微量加样器（覆盖1-1000ul） 2、可移动紫外灯（近工作台面） 3、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头（带滤心） 4、专用工作服和工作鞋 5、专用办公用品
污染原因
还有一种容易忽视，最可能造成PCR 产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题.
防止污染的方法
(四) 防止操作人员污染，使用一次性手套、吸头、小离心管应一次性使用。
(五) 设立适当的阳性对照和阴性对照，阳性对照以能出现扩增条带的最低量的标准病原体核酸为宜，并注意交叉污染的可能性，每次反应都应有一管不加模板的试剂对照及相应不含有被扩增核酸的样品作阴性对照。
(六) 选择质量好的Eppendorf管，以避免样本外溢及外来核酸的进入，打开离心管前应先离心，将管壁及管盖上的液体甩至管底部。开管动作要轻，以防管内液体溅出。

PCR详细讲解PPT课件

4.为什么PCR产物出现片状拖尾？
①DNA聚合酶过多或酶活性差。 ②dNTP和Mg2+浓度过高。 ③退火温度过低，PCR循环数偏多。 ④模板DNA用量过大或模板DNA不纯。 ⑤引物特异性差、引物间形成二聚体导致非特异扩增。
2021/3/7
CHENLI
22
2021/3/7
普通PCR仪
CHENLI
温度梯度PCR仪
对于20bp左右的引物：
2021/3/7
Tm（℃）=2（A+T）+4（G+C）
一般情况下，PCR的最佳退火温度比引
物Tm值低5℃左右。
CHENLI
32
引物设计的基本原则
6、引物中四种碱基最好是随机分布的
避免4个以上聚嘌呤或者聚嘧啶的重复。特别是引物的3’端不应有连续3个G或C，否则会使引物在G+C富集序列区域产生错配，降低扩增的特异性。
2021/3/7
CHENLI
36
引物设计的基本原则
10、引物3’端要避开密码子的第3位。
如扩增序列位于基因编码区域，引物3’ 端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。
2021/3/7
CHENLI
37
Real-Time PCR引物设计原则
1、避免重复碱基，尤其是G。
引物的5’端决定着PCR产物的长度，它对扩增特异性影响不大，可以被修饰而不影响扩增的特异性。如：加酶切位点、标记生物素、引入点突变等。
由于延伸是从3’端开始的，所以不能进行任何修饰。
2021/3/7
CHENLI
35
引物设计的基本原则
9、引物的3’端不可以A结尾。

PCR技术PPT课件

一、PCR的定义：
PCR（polymerase chain reaction) ：
聚合酶链式反应，又称体外DNA扩增技术。
近年来发展起来的一种体外扩增特异 DNA片段的技术。
.
2
DNA扩增的传统方法：一般采用分子克隆法，需将构建的含有目的基因的载体导入细胞进行扩增，并需要用探针进行筛选，牵扯到DNA酶切、连接、转化、培养及探针杂交等技术，虽然技术上已无难点，但操作复杂，需数周到数月的时间，且不利于普及。
.
6
3. 延伸 (Extension):
将反应温度调节到酶的最适温度，在DNA聚合
酶、4种 dNTPs 及镁离子等存在的条件下，以引物的 3′ 端开始，结合单核苷酸，形成与模板链互补的
新DNA链。72 ℃ 1′
上述 3 步为一个循环，每经过一个循环，样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为新一轮循环的模板，经过25～40个循环后DNA可扩增 106 ～ 109 倍。
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四、PCR反应体系：
常用30μl 各种成分的实际用量应根据实验者选
用的该成分的终浓度及所拥有的储备液浓度进行核算。
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10×buffer： 1×30 / 10 = 3μl
MgCl2: dNTPs:
1.5×30 / 5 = 1.8μl 0.2×30 / 10 = 0.6μl
引物 P：
0.4×30×2 / 10 = 2.4μl
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扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合，基本反应步骤分三步：
1. 变性 (Denaturation)：加热使模板DNA双链间的氢键断裂而形成两
条单链。94℃ 30″ 2. 退火 (复性) (Annealling):