石榴皮提取液_浓缩液_冷干粉末及石榴皮软膏的体外抑菌试验

2. 3. 2 最 低 抑 菌 浓 度 ( M IC) 和 最 低 杀 菌 浓 度 (MBC) 的测定结果 对石榴皮提取液 、浓缩液 、冷 干粉末和石榴皮软膏的 M IC 和 MBC 进行测定 ,结 果表明其对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌均具有较 好的抑制作用 (表 2～5) 。
表 2 石榴皮提取液 MIC 和 MBC 的测定
156. 3μg/ ml 之间 。结论 :石榴皮提取液 、浓缩液 、冷干粉末及软膏均具有较好的体外抗菌活性 。
关键词 : 石榴皮 ; 抗菌 ; 体外抑菌试验 中图分类号 : R927. 1 ; R965 文献标识码 :A 文章编号 :100925551 (2009) 0520565203
Bacteriostatic test in vitro of extract ,concentrated l iquid , freeze2drying po wer and Pomegranate rind ointment
2 方法与结果
2. 1 纸片法 2. 1. 1 药液准备 取石榴皮提取液 24 ml 、浓缩液 1 ml 、0. 47 g 冷干粉末分别溶于 1 ml 的灭菌蒸馏水 中 ;1 ml 灭菌蒸馏水 ;5 g 含药软膏和空白软膏分别 采用 40 ml 甲醇超声提取 40 min ,分别经薄膜过滤 后 ,密闭于 4 ℃冰箱保存备用 。 2. 1. 2 实验操作 在超净工作台中 ,将培养基灭菌 后倒入平皿内 , 每个平皿约 20 ml , 待培养基凝固 后 , 将浓度为 105 ～106 cf u/ ml 的试验菌液用棉签
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石榴皮提取液 、浓缩液 、冷干粉末及石榴皮 软膏的体外抑菌试验 3
陈雪珊133 , 高晓黎2333
(1新疆医科大学药学院 , 2新疆特丰药业股份有限公司 , 新疆 乌鲁木齐 830011)
的 0. 9 %无菌氯化钠溶液 ,采用 10 倍递增稀释法 , 稀释至 105 ～106 cf u/ ml ,备用 。
ml 肉汤培养基中用微量移液器反复吹打混匀 ,此时 含生药材量为 40 000μg/ ml ,备用 。
1. 4 含药纸片的制作[1] 选用双圈牌定性滤纸用 2. 2. 2 实验操作 取小试管 12 支 ,每管中均加入
Key words :Po megranate rind ; A ntibacterial ; Bacterio static test in vit ro
石榴皮 ( Punica granat um L . ) 系安石榴科安石 榴属落叶小乔木栽培植物石榴的干燥果皮 。石榴皮 软膏以新疆产石榴皮为主药 ,主要用于皮肤表面的 抗菌消炎 。05 版《中国药典》记载石榴皮具有涩肠 止泻 、止血 、驱虫的功能 。经现代医学研究表明 ,石 榴皮在抗细菌 、真菌方面表现出较强的作用 ,这就进 一步坚定了将其制成治疗相应病症的外用制剂的信 心 。本文通过体外抑菌试验 , 对石榴皮软膏的抑菌 作用进行了研究 ,效果满意 ,现报道如下 。
CHEN Xue2shan , GAO Xiao2li ( Col le ge of Pharm acy , X i nj i an g M e dical U ni versi t y , U rum qi 830011 , Chi na)
Abstract : Objective : To st udy t he antibacterial activit y in vit ro of ext ract ,co ncent rated liquid , f reeze2dr2 ying power and Po megranate rind oint ment . Methods : Kirby2Bauer met hod and t ube dilutio n met ho d were employed for t he p harmacodynamics st udy in vit ro of ext ract , co ncent rated liquid , f reeze2drying power and Po megranate rind oint ment . Results : The diameters of Inhibitio n zo ne were 23. 5～11. 6 mm. The minimal inhibitory co ncent ratio ns ( M IC) was 2 500 ～ 78. 1 μg/ ml and t he minimal bacteriacidal co ncent ratio ns ( MBC) was 5 000～156. 3μg/ ml for Stap hylococcus aureus and E. coli. Conclusion : Ext ract , co ncent rated liquid , f reeze2drying power and Po megranate rind oint ment have a good antif ungal activit y in vit ro .
105 ～106 cf u/ ml 的菌液 1 ml ,第 12 管加 1 ml 原药 液 。此时 1～10 管内浓度分别为 10 000 μg/ ml 、5 000μg/ ml 、2 500 μg/ ml 、1 250 μg/ ml 、625 μg/ ml 、 312. 5 μg/ ml 、156. 3 μg/ ml 、78. 1 μg/ ml 、39. 1 μg/ ml 、19. 5μg/ ml 。37 ℃培养箱中培养 24 h 后观察结
打孔器制成直径 6 mm 的圆纸片放入清洁干燥的青 1 ml 肉汤 ,灭菌后备用 。分别于第 1 管中加入待试
霉素空瓶中 ,瓶口以单层牛皮纸包扎 ,121 ℃高压灭 药 1 ml ,混匀后吸取 1 ml 加至第 2 管中 ,同法稀释
菌 30 min ,再经 100 ℃烘干 ,密闭保存备用 。在无菌 至第 10 管 ,10 管混匀后弃去 1 ml ,第 11 管为阳性
1. 3 菌液制备 将大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌 2. 2. 1 试验药物的制备 取石榴皮提取液 、浓缩液
的新鲜培养物分别置于 10 ml 营养肉汤培养基中 , 37 ℃培养 18～24 h ;分别取培养液 1 ml 加入 9 ml
和冷干粉末用灭菌后的营养肉汤配置成含生药材量 为 40 000μg/ ml ,无菌称取石榴皮软膏 2 g ,加至 10
1 实验材料
1. 1 实验药物 石榴皮购于新疆乌鲁木齐市民族
医院 , 石榴 ( Punica granat um L . ) 产 自新疆 和田 。 石榴皮提取液 :24 ml 取液相当于 1 g 生药材 ;石榴 皮浓缩液 :1 ml 浓缩液相当于 1 g 生药材 ;石榴皮冷 干粉末 :将浓缩液经过冷冻干燥至干燥粉末 ,0. 47 g 粉末相当于 1 g 生药材 ;石榴皮软膏 :采用十八醇 、 白凡士林 、液体石蜡和蒸馏水等为基质 ,以冷干粉末 和基质比为 1 :9 的比例制成水包油型的软膏 。5 g 软膏相当于 1 g 生药材 。 1. 2 实 验 菌 株 金 黄 色 葡 萄 球 菌 CMCC ( B ) 26003 、大肠埃希菌 CMCC (B) 44102 的标准菌株由 新疆维吾尔自治区药品检验所提供 。
瓶 ,均购自北京奥博星生物技术有限责任公司)
果 ,以能抑制细菌生长的药物最低浓度作为该药对
1. 6 实验仪器 DN P29272 型电热恒温培养箱 (上 该菌的最小抑菌 浓度 ( minimal inhibitio n co ncen2
海精宏实验设备有限公司) , XFS2280A 型手提式压 t ratio n ,简称 M IC) 。在 M IC 实验基础上从无细菌
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菌种 金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
指标
M IC MBC M IC MBC
表 3 石榴皮浓缩液 MIC 和 MBC 的测定
3 基金项目 :新疆维吾尔自治区“十一五”重大专项 (200731136) 33 作者简介 :陈雪珊 (1984 - ) ,女 ,硕士研究生 ,研究方向 :新药研发 。 333 通讯作者 :高晓黎 ,女 ,教授 ,博士研究生导师 , E2mail :gxli @tefeng. co m 。
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力蒸汽灭菌器 (浙江新丰医疗器械有限公司) , X YJ2 生长的各管取材分别涂布于相应的琼脂平板培养基
875 型超净台 (吴江净化设备总厂) ,S K21 型快速混 上 ,于 37 ℃的恒温培养箱培养过夜 (24 h) ,观察结
匀器 (江苏金墰医疗仪器厂) 。
果 。琼脂平板上无细菌生长而含药液最少的一管 ,
即为该种药物对该菌株的最小杀菌浓度 ( minimal bacteriacidal co ncent ratio n ,简称 MBC) 。 2. 3 实验结果 2. 3. 1 抑菌圈直径测量结果 石榴皮的提取液 、浓 缩液 、冷干粉末和石榴皮软膏对金黄色葡萄球菌和 大肠埃希菌均有较好抑制作用 。“ —”表示无抑菌活 性 ;抑菌圈直径大于 20 mm 为极敏感 ;14～20 mm 为高度敏感 ;10～14 mm 为中度敏感 ;小于 10 mm 为低度敏感 ,结果见表 1 。
-
大肠埃希菌
20. 8 19. 6
18. 6 11. 6
-
板倒置放入培养箱中 37 ℃培养 18～24 h 后 ,测量各 药敏片的抑菌圈直径 ( mm) 。提取液 、浓缩液及冷 干粉末以无菌生理盐水作空白对照 ,软膏以空白软 膏为对照 ,测 3 次求平均值 。以上操作均为无菌操 作[2] 。 2. 2 试管法[3 ]
摘要 :目的 :观察石榴皮提取液 、浓缩液 、冷干粉末及软膏的体外抗菌活性 。方法 :采用纸片法和试管稀释法 进行体外药效学研究 。结果 :石榴皮提取液 、浓缩液 、冷干粉末及软膏对金黄色葡萄球菌 、大肠埃希菌的抑菌圈直
径分别在 23. 5～11. 6 mm 之间 ,最小抑菌浓度 (M IC) 在 2 500～78. 1μg/ ml 之间 ,最小杀菌浓度 ( MBC) 在 5 000～
菌种
指标
浓度 (μg/ ml) 10 000 5 000 2 500 1 250 625 312. 5 156. 3 78. 1 39. 1 19. 5
阳性对照
阴性对照
金黄色葡萄球菌
M IC
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-
+ ++
++
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MBC
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+
Байду номын сангаас
大肠埃希菌
M IC
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-
+
+ ++
++
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MBC
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-
表 1 抑菌圈直径测量结果( mm)
从三个方向平均涂抹于营养琼脂平板表面 (每次转 60 ℃) 使菌液均匀分布 ,制成含菌平板 。室温 2～5 min 后 ,平铺药物纸片 4 片 ,其中一片为对照 ,将平
菌种
提取液 浓缩液 冷干粉末 软膏 空白对照
金黄色葡萄球菌 23. 5 22. 2
21. 5 15. 6
条件下分别将 100 片纸片浸泡于相当于 1 g 生药的 对照 ,第 12 管为阴性对照 。第 1～11 管分别加入
提取液 、浓缩液 、冷干粉末和软膏的药液中 1～2 h , 待药液完全被纸片吸收后 ,取出滤纸片 ,50 ℃烘干制 成药 敏 片 备 用 。此 时 每 片 纸 片 上 的 含 生 药 量 是 0. 01 g/ 片 。 1. 5 培养基 营养琼脂和营养肉汤 (均为 250 g/