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动物生殖细胞有丝分裂过程
雌雄小鼠生殖细胞减数分裂模式对比
滴片，Giemsa染色，镜细检。线期
偶线期
2、 使用油镜找出减数分裂各时相，着重观察第一次减数分裂的形态变化。
低倍镜：目镜测微尺每格代表的长度= ×lO(μm)= μm
小甲鼠醇减 ：数冰分醋裂酸标（本3：的1制）备固及定观。察
通雌过雄小数鼠鼠生丸殖细胞的减体数外分培裂养模以式增对加比减数分裂相，获得分裂较高的标本
【实验内容】
一、标本制备过程
1. 处死动物，剥离睾丸。2. 取部分睾丸组织，匀浆取上皮细胞悬液。3. 悬液加入培 养液小瓶，置培养箱内培养24小时。4. 培养终止前4小时，加入秋水仙素。5. 收
三、计算人口取腔细上胞皮细低胞渗的核处质理比。例。6. 1000rpm离心8分钟，取沉淀。7. 甲醇：冰醋酸（3：1）固定。 后中掌期期握II减：：二数同四分源分、裂8染体.过标色排滴程体列本中片移在各向赤的，期两道G染观极面i色；上e察体m；的s形a染态特色征，镜检。 减Ex数pe分ri1m裂、e是nt二1精3倍体原生细殖细胞胞在有形丝成配分子时裂的中一种期特殊相的，细胞明分裂确形小式。鼠染色体数目40条。 中期I：2四、分体使排用列油在赤镜道找面上出；减数分裂各时相，着重观察第一次减数分裂的形态变化。 掌10握00减rp前数m离分期心裂I8过：分程钟细中，各线取期沉染期淀色。；体的偶形态线特期征 ；双线期；终变期。
Experiment 13
小鼠减数分裂标本 的制备及观察
【实验目的】
1. 理解小鼠睾丸组织减数分裂标本的制备技术
2. 掌握减数分裂过程中各期染色体的形态特征
【实验原理】
减数分裂是二倍体生殖细胞在形成配子时的一 种特殊的细胞分裂形式。通过小数鼠丸细胞的体外培 养以增加减数分裂相，获得分裂较高的标本
小鼠精巢生殖细胞减数分裂各时相识别
小鼠精巢生殖细胞减数分裂各时相识别谢文美; 周凤娟; 王强; 赵小荣; 朱春燕【期刊名称】《《解剖学杂志》》【年(卷),期】2019(042)005【总页数】5页(P435-438,封2)【关键词】减数分裂; 秋水仙素; 染色体; 性泡; 小鼠【作者】谢文美; 周凤娟; 王强; 赵小荣; 朱春燕【作者单位】甘肃医学院遗传病研究室平凉 744000; 甘肃医学院基础医学院生物教研室平凉 744000【正文语种】中文减数分裂过程中不同时相染色体变化复杂，染色体减数分裂异常也是许多人类遗传病发生的主要原因之一。
准确观察和识别减数分裂各时相特点是医学细胞生物学课程学生熟悉细胞生命活动的重要组成部分，也是医务工作者及有关研究者必须具备的技能。
然而目前多数教材及参考文献[1-3] 多以蝗虫为主，且各时期辨识描述及图谱简单且不清楚。
苏爱等[4] 采用十一酸睾酮与秋水仙素联合应用的方法制备，提高了对小鼠减数分裂前期I染色体标本分裂相细胞的检出率；Cai等[5] 通过免疫荧光染色方法制备并清晰分辨小鼠精母细胞联会复合体，对减数分裂第1次分裂前期观察具有很好的参考价值，但都未对小鼠减数分裂各时相识别及染色体的影响做介绍。
本研究应用常规小鼠睾丸生殖细胞减数分裂制片并加以改进，同时运用不同染色方法获取良好的观察标本，进行了大量对比形态学观察，以期为减数分裂课程教学及染色体异常研究提供参考。
1 材料和方法1.1 实验动物与试剂6～8周龄的ICR/JCL品系雄性小鼠4只（购买于兰州大学实验动物中心），体质量25 g 左右，用鼠颗粒饲料喂养，常规饮水。
秋水仙素、Giemsa染液购自广州市达晖生物技术有限公司；苏木精-伊红染液购自上海舜百生物科技有限公司；枸橼酸钠、甲醇、冰醋酸等常规分析纯购置。
1.2 小鼠生殖细胞减数分裂染色体标本制备雄性小鼠经腹腔注入秋水仙素（1 μg/kg）处理。
3～4 h后颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，迅速分离双侧睾丸，于盛有2%枸橼酸钠溶液的培养皿中，用眼科剪和尖头镊子剥离睾丸外膜，暴露精细小管，移入10 ml 离心管管口，用眼科剪将精细小管剪碎呈糊状，以尽可能多释放生殖细胞。
减数分裂的观察
减数分裂的观察
目的要求 实验原理 实验用品 方法与步骤 实验结果裂过程及各个时期 的特点 2．掌握小鼠精巢减数分裂标本的制备过程
实验步骤
取花蕾长度在3~4mm，花药长度为 1~1.1mm的大葱花，投入Carnoy固定液中 固定1~2小时，也可将材料置于70%的酒 精中长期保存。 制片的方法同根尖染色体的制备方法。
减数分裂前期I
减数分裂中期I
减数分裂后期I
减数分裂后期I
减数分裂末期I
实验报告
在取材过程中需要注意的问题有哪些？ 绘图表示植物细胞减数分裂的各个时期。
实验原理
减数分裂（meiosis）是高等生物个体在形成生 殖细胞过程中发生的一种特殊的分裂方式。在 这个过程中，DNA复制一次，细胞连续分裂两 次，结果形成的生殖细胞染色体减半，称为减 数分裂。减数分裂是生物遗传与变异的细胞学 基础。
实验用品
1．器材：解剖器材，盖玻片，培养皿，吸管。 2．试剂：1NHCl，Carnoy固定液；改良苯酚品红。 3．实验材料：大葱花
小鼠染色体标本制作、染色及观察
科目细胞生物学实验题目小鼠染色体标本的制作、染色与观察姓名***系年级2011级生物基地学号*** 同组者***日期2013/05/23、302013/05/30小鼠染色体标本的制作、染色与观察【实验目的】1.初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。
2.了解常用实验动物染色体的数目及特点。
3.认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组形图。
【实验原理】凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各种处理后，任何动物组织的细胞就可进入分裂，均可用于染色体分析。
在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。
给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。
本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。
骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。
但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。
对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点: 1.用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处; 2.用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上; 3.空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa 染色后便可观察到染色体的显微图象。
Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。
主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。
【实验材料】1.试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCl溶液）、0.3%KCl低渗溶液、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液。
2.器具：解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、恒温水浴锅、离心机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等。
制备减数分裂细胞标本低渗处理的操作步骤
制备减数分裂细胞标本低渗处理的操作步骤一、引言减数分裂是细胞分裂的一种形式，它发生在生物体生殖细胞中，用于产生具有遗传变异的配子。
为了研究减数分裂过程中的细胞结构和染色体行为，需要准备减数分裂细胞标本，并进行低渗处理。
本文将详细介绍制备减数分裂细胞标本低渗处理的操作步骤。
二、准备实验材料•细胞培养基•细胞培养器•10% 碘酒溶液•70% 乙醇•石蜡刀片三、操作步骤1. 细胞培养1.1 在细胞培养器中加入适量的细胞培养基，注意保持培养基温度为37摄氏度并含5% CO2。
1.2 将待处理的细胞加入培养基中，并保持培养器内的环境稳定。
2. 收集细胞标本2.1 选取准备标本的适当时刻，确保细胞正处于减数分裂的染色体凝聚阶段。
2.2 小心倒掉培养基，注意不要损坏细胞。
3. 固定细胞标本3.1 加入10% 碘酒溶液，覆盖整个细胞标本。
3.2 将细胞标本在10% 碘酒溶液中固定4-6小时。
4. 脱水处理4.1 从固定的标本中小心倒去碘酒溶液。
4.2 加入70% 乙醇至细胞标本完全覆盖。
4.3 静置标本30分钟，以确保细胞充分脱水。
5. 石蜡渗透5.1 石蜡刀片预热至50-60摄氏度。
5.2 用滤纸吸去乙醇，保持细胞标本表面干燥。
5.3 将细胞标本放置在石蜡刀片上。
5.4 将热的石蜡滴在细胞标本上，使其完全浸润。
5.5 快速冷却，使石蜡迅速凝固。
6. 制备玻片6.1 用石蜡刀片切取凝固的细胞标本，制备成薄片。
6.2 将薄片转移到预先烘烤的玻片上。
7. 染色7.1 根据需要选择合适的染色方法进行染色处理。
7.2 标本染色后根据染色方法进行洗涤，以去除多余染色剂。
8. 覆盖玻片8.1 取一张准备好的玻片，放置在相应位置。
8.2 使用透明胶布将玻片牢固地固定在载玻片上。
9. 结语通过以上步骤，我们可以成功制备减数分裂细胞标本，并进行了低渗处理。
这些标本可以用于进一步研究减数分裂过程中的细胞结构和染色体行为，有助于对生物体遗传变异的理解和探索。
小鼠睾丸生殖细胞标本制作及减数分裂期染色体观察
Isolation and staining of mouse meiotic metaphasechromosomes小鼠睾丸生殖细胞标本制作及减数分裂期染色体观察xx 2011级生科四班201100140120 同组者：xx【实验目的】1、learn to isolate mouse testes cells and stain with Giemsa.学会分离小鼠睾丸细胞并用Giemsa染液染色2、Observe the number and morphology of mouse chromosomes观察小鼠染色体的数目及形态特征【实验材料】【Reagents】秋水仙素colchicine solution吉姆萨染液Giemsa stains solution生理盐水physiological saline氯化钾溶液KCl solution固定液fixation solution【Tools and equipments】Dissecting tray，beaker，centrifuge tube，microscope，glass slide，pipette，scissors，forceps，copper mesh.解剖盘，烧杯，离心管，显微镜，载玻片，吸管，剪刀，镊子，铜网【实验原理】meiosis is a process of reductional division in which the number ofchromosomes per cell is cut in half. In animals, meiosis always results in the formation of gametes, while in other organisms it can give rise to spores. 减数分裂是细胞分裂染色体数减半的过程，在动物中,减数分裂的结果总是在形成配子,而在其他生物可以产生孢子。
《小鼠精原干细胞分离、纯化与去分化研究》范文
《小鼠精原干细胞分离、纯化与去分化研究》篇一一、引言近年来，干细胞领域研究日渐受到科研工作者的广泛关注。
作为生命科学和医学领域中的研究热点，小鼠精原干细胞的研究不仅对于基础理论科学具有深远意义，还为人类生殖与发育疾病、再生医学等领域提供了重要研究依据。
本文将重点介绍小鼠精原干细胞的分离、纯化与去分化研究的相关内容。
二、小鼠精原干细胞的分离小鼠精原干细胞的分离是整个研究过程的首要步骤。
为了获取高质量的精原干细胞，我们需要从小鼠生殖系统中进行提取。
具体操作如下：首先，对小鼠进行安乐死并取其睾丸组织。
接着，采用机械法和酶解法相结合的方式对睾丸组织进行消化处理，释放出细胞。
然后，通过特定的培养基将处理后的细胞进行初步培养，使得精原干细胞得以在特定环境中增殖。
在此过程中，应尽可能去除其他类型的细胞和非必要的组织成分，以便后续纯化工作顺利进行。
三、小鼠精原干细胞的纯化精原干细胞的纯化是研究过程中的关键环节。
纯化目的主要是去除其他类型的细胞，以获取纯度较高的精原干细胞。
常见的纯化方法包括细胞贴壁法、流式细胞术和磁性微粒标记法等。
其中，流式细胞术具有高效率、高准确度的特点，可广泛应用于实验室中。
具体操作中，应依据细胞大小、表面标志物等特征选择合适的流式细胞仪参数，进行细胞分选。
通过反复纯化操作，可得到较高纯度的精原干细胞。
四、小鼠精原干细胞的去分化研究去分化研究是近年来干细胞领域的研究热点之一。
为了实现小鼠精原干细胞的去分化，我们需要对相关机制进行深入研究。
首先，要了解精原干细胞的分化过程和分化相关基因的表达情况。
然后，通过调控相关基因的表达、改变培养环境等方法，促使精原干细胞发生去分化现象。
在去分化的过程中，要密切关注细胞的形态变化、增殖能力以及多能性等指标的变化情况。
通过实验数据的分析，可以得出不同条件下精原干细胞的去分化效果及机制。
此外，我们还可以利用基因编辑技术对相关基因进行敲除或过表达，进一步探究去分化的分子机制。
小鼠精巢细胞减数分裂标本的制备与观察
小鼠细胞分裂标本的制备与观察一、实验目的a)掌握小鼠精巢染色体标本制作法。
b)观察减数分裂过程中不同时期的染色体。
c)观察腹水瘤细胞有丝分裂中不同时期的染色体形态。
二、实验原理a)减数分裂（Meiosis）是发生于生殖细胞的一种特殊的细胞分裂方式，DNA复制一次，而细胞连续分裂两次，形成单倍体的精子和卵子。
减数分裂远比有丝分裂复杂，经两次细胞分裂，分别称减数分裂Ⅰ、减数分裂Ⅱ，两次分裂间又一个较短的间期，这个间期DNA不复制。
b)雄性动物精子发生于睾丸曲精细管的生精上皮细胞，由其中的精原细胞经多次有丝分裂和生长，形成初级精母细胞，初级精母细胞经减数分裂形成次级精母细胞，次级精母细胞有丝分裂成精细胞，再经一系列变化成精子。
c)因此，通过分离曲细精管、剪碎并加入液体吹打，可使官腔各种细胞游离出来，然后经过低渗、固定、染色等过程就可制成包含减数分裂各期的标本。
三、实验试剂及仪器a)材料：成年雄性小白鼠b)用品：注射器、平皿、尖头镊子、剪刀（普通剪刀、眼科小剪刀）、吸管、离心管、离心机、玻片等。
c)试剂：1、100μg/ml秋水仙素。
2 、2％柠檬酸钠溶液3、 0.075M的KCI4、3:1甲醇:冰醋酸及1:1甲醇:冰醋酸（应现配）5、PH6.8，0.01M的PBS缓冲液6、Gimesa原液7、Gimesa工作液：1份Gimesa原液加9份PH6.8，0.01M的PBS缓冲液，混匀。
工作液应现用现稀释。
四、实验步骤a)细胞收集i.小鼠精巢细胞收集1.注射秋水仙素，增加中期分裂相。
(试验前4－5小时，小鼠腹腔注射秋水仙素0.5ml（100μg/ml）。
2.取睾丸并清洗。
断颈处死小鼠，剖开腹部，取出肾形睾丸，放入盛有4－5 ml2％柠檬酸钠溶液的平皿中，洗去污血，去掉胞外脂肪等物。
3.挑出曲细精管并剪碎。
弃污液，另加柠檬酸钠溶液1 ml，用尖头镊尖将曲细精管拉出，并用眼科剪尽量将其剪碎。
4.游离并收集细胞。
小白鼠减数分裂实验报告
一、实验目的1. 了解减数分裂的基本过程和特点；2. 观察小白鼠睾丸中精原细胞减数分裂的各个阶段；3. 分析减数分裂过程中染色体的行为变化。
二、实验原理减数分裂是有性生殖过程中的一种特殊细胞分裂，其主要目的是将一对同源染色体分离，从而产生具有遗传多样性的配子。
在减数分裂过程中，染色体经历了两次分裂，形成了四个单倍体的配子。
本实验通过观察小白鼠睾丸中精原细胞减数分裂的各个阶段，了解减数分裂的过程和特点。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小白鼠睾丸组织、生理盐水、70%酒精、卡诺氏固定液、Hoechst33342染液、显微镜等；2. 实验仪器：解剖显微镜、显微镜、离心机、冰箱等。
四、实验方法与步骤1. 小白鼠处死，取出睾丸；2. 将睾丸放入生理盐水中清洗，去除多余组织；3. 将清洗后的睾丸放入70%酒精中固定，放置4℃冰箱过夜；4. 将固定好的睾丸取出，放入卡诺氏固定液中浸泡，放置4℃冰箱过夜；5. 取出睾丸，制成切片；6. 将切片放入Hoechst33342染液中染色，室温放置30分钟；7. 将染色后的切片取出，用蒸馏水清洗，去除多余染液；8. 将切片放入显微镜下观察，记录减数分裂各个阶段染色体的行为变化。
五、实验结果与分析1. 早期减数分裂（减数分裂I前期）在早期减数分裂阶段，染色质开始凝缩，形成染色体。
同源染色体开始配对，形成四分体。
本阶段观察到的染色体行为有：染色体凝缩、同源染色体配对。
2. 中期减数分裂（减数分裂I中期）在中期减数分裂阶段，同源染色体排列在赤道板上。
此时，染色体行为有：染色体排列在赤道板上、同源染色体分离。
3. 晚期减数分裂（减数分裂I后期）在晚期减数分裂阶段，同源染色体分离，分别移向两极。
此时，染色体行为有：同源染色体分离、染色体移向两极。
4. 早期减数分裂（减数分裂II前期）在早期减数分裂II阶段，染色质开始凝缩，形成染色体。
此时，染色体行为有：染色体凝缩。
5. 中期减数分裂（减数分裂II中期）在中期减数分裂II阶段，染色体排列在赤道板上。
《小鼠精原干细胞分离、纯化与去分化研究》范文
《小鼠精原干细胞分离、纯化与去分化研究》篇一一、引言随着干细胞研究的深入，精原干细胞作为具有潜力的治疗性细胞来源，在再生医学和疾病治疗领域备受关注。
本文旨在研究小鼠精原干细胞的分离、纯化以及去分化过程，为后续的干细胞治疗提供理论依据和技术支持。
二、材料与方法1. 材料实验所需小鼠精原干细胞、培养基、试剂等均采购自正规生物试剂公司，并经过严格的质量控制。
2. 方法（1）小鼠精原干细胞的分离：采用酶消化法，从小鼠睾丸组织中分离出精原干细胞。
（2）纯化：通过密度梯度离心法，将分离出的细胞进行纯化。
（3）去分化：利用特定的小分子化合物和生长因子，诱导精原干细胞去分化。
三、实验方法与步骤1. 小鼠精原干细胞的分离（1）取小鼠睾丸组织，进行机械破碎和酶消化，使精原干细胞从组织中释放出来。
（2）通过离心和过滤等方法，去除杂质，得到相对纯净的精原干细胞。
2. 精原干细胞的纯化（1）采用密度梯度离心法，将分离出的细胞进行分层。
（2）收集特定层级的细胞，进行细胞计数和活性检测，确保细胞的纯度和活性。
3. 精原干细胞的去分化（1）将纯化后的精原干细胞接种到含有特定小分子化合物和生长因子的培养基中。
（2）通过调整培养条件和时间，诱导精原干细胞去分化，形成多潜能干细胞。
四、结果与讨论1. 结果（1）通过酶消化法成功从小鼠睾丸组织中分离出精原干细胞。
（2）采用密度梯度离心法成功纯化精原干细胞，细胞纯度和活性达到实验要求。
（3）在特定条件下，成功诱导精原干细胞去分化，形成多潜能干细胞。
2. 讨论本实验从小鼠睾丸组织中成功分离、纯化和去分化了精原干细胞，为后续的干细胞治疗提供了可靠的细胞来源。
然而，实验过程中仍存在一些问题和挑战，如细胞分离和纯化的效率、去分化的机制等，需要进一步研究和探讨。
此外，本实验仅在小鼠模型上进行研究，未来还需在更大规模和更复杂的生物体系中验证实验结果。
五、结论本文研究了小鼠精原干细胞的分离、纯化与去分化过程，为干细胞治疗提供了理论依据和技术支持。
动物精母细胞减数分裂染色体制片与观察
一、实验目的1.了解动物精母细胞减数分裂各时期的主要特点2.掌握动物精母细胞减数分裂染色体标本装片的制作技术二、实验原理减数分裂是生物在性母细胞成熟时配子形成过程中发生的一种特殊的细胞分裂，它包括连续两次的细胞分裂阶段：第一次分裂为染色体数目的减数分裂，第二次为染色体数目的等数分裂。
两次分裂可根据染色体变化特点分为前期、中期、后期和末期。
在减数分裂过程中，同源染色体之间发生联会、交换和分离，非同源染色体之间进行自由组合，最终分裂成为染色体数目减半的四个子细胞。
精卵细胞经过受精结合成为受精卵发育为新的个体，这样又恢复了原有染色体的数目。
三、实验材料、用具及药品实验材料：蝗虫（2 n = 23）的精巢；实验用具：显微镜、小手术剪、解剖针、小弯镊、载玻片等；实验药品：甲醇、冰乙酸、改良品红染色液等。
四、实验步骤1.取材：剪开蝗虫体壁，找到黄色的团状块即精巢；2.固定：用无水乙醇和甲酸3:1 制成的卡诺氏液对材料固定4-12 h；另取材料固定20 mins，作为对比观察油脂量；3.染色：夹取一小枚管状精巢，放置于载玻片上，滴加适量醋酸洋红（17-23 mins）或改良品红（12-18 mins）染色；4.压片镜检：用解剖针挑取少量材料（1条精小管）到1张新载玻片上，加1滴新鲜染料，捣碎成雾状，加盖玻片，覆吸水纸压片，镜检。
五、观察结果及分析图1 蝗虫细胞减数分裂（40×，醋酸洋红，固定20min）图2 蝗虫细胞终变期（局部截图，改良品红）图3 蝗虫细胞第一次减数分裂中期（局部截图，改良品红）图4 蝗虫细胞第一次减数分裂后期（局部截图，改良品红）图5 蝗虫细胞第二次减数分裂中期（局部截图，改良品红）图6 蝗虫细胞第二次减数分裂后期（局部截图，改良品红）。
小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察
姓名系年级组别同组者科目细胞生物学实验题目小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察学号小鼠睾丸细胞染色体标本的制备及观察一．实验目的1．了解快速制备动物染色体标本的方法，掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的制备方法。
2．观察小鼠睾丸染色体的数目及其形态特征。
3．掌握小鼠睾丸染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理。
二．实验原理（一）染色体染色体是基因的载体。
真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传指标之一。
制备染色体标本无疑是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。
本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。
染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断地运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易辨认和区分。
因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。
染色体特征：1.数目（2n=？）2.长度（绝对长度、相对长度）3.着丝粒位置（M/SM/ST/T）4.随体与次溢痕的数目、大小和位置5.带型分析（二）操作方法小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可以）。
利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。
在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。
通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。
用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。
由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理、低渗、固定、制片、染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
减数分裂是细胞分裂染色体数目减半时发生在性细胞的形成过程中。
哺乳动物在性成熟以后，精巢内的性细胞总是在分批分期不断的成熟，因此，对哺乳动物的精巢进行一定的技术处理，随时都可以获得减数分裂过程中各个时期染色体的标本。
动物遗传学教学实验“小鼠睾丸细胞减数分裂染色体标本制作”方法
课程教学C ur r i cul um T e ac hi ng 爝煎逦尉动物遗传学教学实验‘q、鼠睾丸细胞减数分裂染色体标本制作，方法改进的研究张燕军赖双英苏蕊张文广(内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古呼和浩特010018)摘要“减数分裂期染色体制备实置F’是动物遗传学实验课程重要内容。
本文介绍了小鼠睾丸细胞减数分裂染色体标本制作的改进方法，通过本方法可制备和观察到大量分散良好、背景清晰、染色体结构紧凑的睾丸细胞减数分裂各期分裂相，得到较好的实验效果。
关键词动物遗传学睾丸细胞减数分裂染色体改进中图分类号：G424文献标识码：AA ni m al G enet i cs T eachi ng Exper i m ent’’M ous e Tes t i s M ei ot i cC hr om os om e Speci m en’’M et hods I m pr ovem entZ H A N G Y anj un，L灿Shuangyi ng，SU R ui，Z H A N G W enguang(C ol l ege of A ni m al Sci e nce，I n ner M ongol i a A gr i cul t ur al U ni ve r s i t y,H ohhot，I nne r M ongol i a010018)A bs t r ac t’’P r epa ra t i on of m ei ot i c cl l r om os om es e xper i m e nt”i s al l i m port a nt pa r t of ani m al ge net i c s experi m ent cour se．Thi sar t i cl e des cr i bes t he m ous e t est i s m ei ot i c chr om os om e s peci m en of t he i m pr o ved m et hod，can be prepar ed by t hi s m e t hod and obs erved a l ar ge num be r of w el l—di sper s ed，cl ea r backgr ound，com pact t es t i cul ar m ei ot i c cl l r om os om e st r uct ur e of e ach phas e of t he di vi s i on，ge t be t t e r ex per i m ent al r es ult s．K ey w or ds ani m al gen et i cs；t est i cul a r cel l s；m ei osi s；cl l r om os om e；i m pr ovem ent遗传学既是一门历史悠久的学科，又是一门发展迅速、实践性很强的学科，研究范围正在不断拓宽和深化，新技术、新方法不断涌现。
拓展资料：小鼠细胞减数分裂标本的制作
小鼠细胞减数分裂标本的制作遗传学教材中，一般是用蝗虫做动物减数分裂实验材料的。
本文介绍一种用雄性小鼠细胞制作减数分裂标本的方法，整个制作过程用时较短，方法也很简单，一般生物教学实验室都能完成。
1.方法和步骤（1）选雄性成年小鼠1只，腹腔注射秋水仙素溶液（约2 μg/g体重）。
2～3h后处死动物，立即取出睾丸，洗净血液，剪开白膜，夹出曲精细管，放入盛有10mL 2% 枸缘酸钠溶液的研钵内。
（2）用剪刀将曲精细管剪成1mm左右的短管，随即适度研磨8min左右，倒入离心管，300 r/min离心3min，吸取中层细胞悬液3～5 mL，弃去组织块沉淀。
加入3～5mL蒸馏水，置37 ℃水浴中低渗处理15～20 min。
（3）800 r/min离心5 min，吸去上清，留细胞沉淀。
加入新鲜配制的3∶1甲醇冰醋酸固定液3～5 mL，固定20 min，其间用小吸管慢慢将细胞团轻轻打散。
（4）500 r/min再将离心5 min，弃上清液留细胞沉淀，另加上述固定液1～2 mL，制成较浓的细胞悬液。
（5）取预冷洁净玻片，滴1滴细胞悬液，立即用口吹散细胞，酒精灯上微热烤干。
用Giemsa染液（Giemsa染液用pH6.8的磷酸缓冲液稀释，每1 mL加1滴Giemsa母液制成）染色5～10 min，自来水洗3～5次，晾干后置于显微镜下仔细观察各期染色体情况（2n＝40）。
2.注意事项（1）研磨睾丸组织时，速度和用力一定要适度。
速度太快或用力过大，细胞易破裂；用力不足或速度太慢，不能将细胞从曲精细管中压出来。
（2）在染色时必须将材料面朝下，放在玻璃上，中间垫两个牙签，用滴管将染液从旁边滴进去。
这样可以防止染料沉淀在载玻片上影响观察。
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小鼠卵母细胞减数分裂细胞极性建立、纺锤体组装和染色体排列的研究
士 第二章 WHAMM 参与小鼠卵母细胞减数分裂纺锤体迁移和不对称 硕 胞质分裂的调控机制 ··························································17 博 2.1 引言 ..................................................................................................................17 学 2.2 材料方法 ..........................................................................................................18
学校编码：10384 学号：24520110154125
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博士学位论文
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要 小鼠卵母细胞减数分裂细胞极性建立、纺锤 摘 体组装和染色体排列的研究
文 Regulation Mechanism of Cell Polarity, Spindle Assembly 论 and Chromosome Alignment in Mouse Oocytes
门 厦
声明人（签名）： 年月日
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中文摘要 ···········································································I
细胞减数分裂标本制备与观察实验心得
细胞减数分裂标本制备与观察实验心得减数分裂标本的制作与观察.txt世上最珍贵的不是永远得不到或已经得到的，而是你已经得到并且随时都有可能失去的东西！爱情是灯，友情是影子。
灯灭时，你会发现周围都是影子。
朋友，是在最后可以给你力量的人。
实验四减数分裂标本的制作与观察一、实验目的通过本实验，掌握减数分裂标本的制作方法，观察减数分裂过程中染色体的动态变化。
了解减数分裂在遗传学中的意义和重要性。
二、实验原理减数分裂是配子形成过程中所特有的细胞分裂方式。
减数分裂过程中，染色体只复制一次，核分裂两次，形成的配子中染色体的数目变为原来的一半，雌、雄配子的结合就保证了染色体数目的恒定。
在分裂过程中可以辨认染色体形态和数量上的动态变化，从而为遗传学研究中远缘杂中的分析、染色体工程中的异系鉴别，常规的组型分析以及三个基本归路的论证，提出了直接与间接的依据。
三、实验材料、用具和药品1. 材料植物花及花序，性成熟的蝗虫2．用具显微镜、剪刀、镊子、单面刀片、载玻片、盖玻片等3．药品卡诺氏固定液、醋酸洋红染色液四、实验步骤（一）花药涂压法1. 取材：选取适当大小的花蕾，是观察花粉母细胞减数分裂的关键步骤，减数分裂时的植株形态和花蕾的大小，依植物种类和品种不同，须经过实践记录，以备后来参考。
通常应从最小的花蕾起试行观察，在花冠现色和花药变黄（或红、紫）之前为好。
凡是白天开花的，可在上午7—10时固定。
2. 固定：卡诺固定液中固定2-24h。
固定后，保存在70%的酒精中，放入冰箱中冷藏供用。
3. 染色与压片：1）取固定好的花蕾置载玻片上，吸去多余的保存液，用解剖刀及刀片解剖出一个花药，视花药大小横切为3—4段（纵切）。
2）加一滴染液，用解剖针轻压花药，使花粉母细胞从切口出来，静置染色5~10分钟，此时可从不同大小的花中连续取出几个花药，进行同样的染色处理。
3）依次将载玻片在酒精灯上来回移动几次轻微加热，同时用解剖针轻微拨动花药以促进着色，进一步去除残存的花药壁，滤纸吸去多余染液。
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小鼠细胞分裂标本的制备与观察
一、实验目的
a)掌握小鼠精巢染色体标本制作法。
b)观察减数分裂过程中不同时期的染色体。
c)观察腹水瘤细胞有丝分裂中不同时期的染色体形态。
二、实验原理
a)减数分裂（Meiosis）是发生于生殖细胞的一种特殊的细胞分裂方式，
DNA复制一次，而细胞连续分裂两次，形成单倍体的精子和卵子。
减数
分裂远比有丝分裂复杂，经两次细胞分裂，分别称减数分裂Ⅰ、减数分
裂Ⅱ，两次分裂间又一个较短的间期，这个间期DNA不复制。
b)雄性动物精子发生于睾丸曲精细管的生精上皮细胞，由其中的精原细胞
经多次有丝分裂和生长，形成初级精母细胞，初级精母细胞经减数分裂
形成次级精母细胞，次级精母细胞有丝分裂成精细胞，再经一系列变化
成精子。
c)因此，通过分离曲细精管、剪碎并加入液体吹打，可使官腔各种细胞游
离出来，然后经过低渗、固定、染色等过程就可制成包含减数分裂各期
的标本。
三、实验试剂及仪器
a)材料：成年雄性小白鼠
b)用品：注射器、平皿、尖头镊子、剪刀（普通剪刀、眼科小剪刀）、吸
管、离心管、离心机、玻片等。
c)试剂：1、100μg/ml秋水仙素。
2 、2％柠檬酸钠溶液
3、 0.075M的KCI
4、3:1甲醇:冰醋酸及1:1甲醇:冰醋酸（应现配）
5、PH6.8，0.01M的PBS缓冲液
6、Gimesa原液
7、Gimesa工作液：1份Gimesa原液加9份PH6.8，0.01M的PBS
缓冲液，混匀。
工作液应现用现稀释。
四、实验步骤
a)细胞收集
i.小鼠精巢细胞收集
1.注射秋水仙素，增加中期分裂相。
(试验前4－5小时，小鼠腹
腔注射秋水仙素0.5ml（100μg/ml）。
2.取睾丸并清洗。
断颈处死小鼠，剖开腹部，取出肾形睾丸，
放入盛有4－5 ml2％柠檬酸钠溶液的平皿中，洗去污血，去掉
胞外脂肪等物。
3.挑出曲细精管并剪碎。
弃污液，另加柠檬酸钠溶液1 ml，用尖
头镊尖将曲细精管拉出，并用眼科剪尽量将其剪碎。
4.游离并收集细胞。
将剪碎的曲细精管及溶液移入离心管中，用
吸管反复吸打1－2min，使尽量多的细胞从管腔中游离出来；
静置5 min（或300rpm离心2 min），使大的膜管状杂质下沉；
吸含有游离细胞的上清液于另一管中，1000 rpm离心5 min，
沉淀即为不同发育阶段的细胞。
ii.小动物骨髓细胞收集
1.处死动物，取长骨。
2.用剪刀剔除骨上所附肌肉及其他组织。
3.用剪刀剪开骨头两端。
4.用带针头的注射器吸取生理盐水将骨髓腔中细胞冲到小烧杯或
小平皿中，在转入离心管中。
b)细胞染色体标本制备（包括上述两种及腹水瘤细胞）
i.低渗处理，使细胞胀大,加入5 ml 0.075M的KCI，轻轻吹打混匀，
静置10 min。
ii.预固定. 向离心管中加入1ml 3:1甲醇:冰醋酸，轻轻吹打混匀，静置2 min，1000 rpm离心8min，弃上清。
iii.固定. 向上述沉淀中加入5 ml 3:1甲醇:冰醋酸，吹打混匀，静置10－20 min，1000 rpm离心8min，弃上清。
iv.再固定加5 ml 1:1甲醇:冰醋酸，吹打混匀，静置5 min，1000 rpm离心8min，弃上清，加2-3滴1:1甲醇:冰醋酸固定液悬浮细胞。
(有残余液就直接滴片，不用另加固定液）
v.滴片。
滴一滴细胞悬液于冰水中刚捞出的湿载波片上，自然干燥。
vi.染色。
Gimesa染液20-30 min,流水洗去多余染液，待干
五、实验结果
a)腹水瘤细胞湿片观察
上图当中，圆圈1内的为腹水瘤细胞分裂后期的染色体形态。
此时的染
色体较中期细，切此时的染色体不规侧，如图所示染色体基本分为两个区域。
圆圈2内的为腹水瘤细胞为分裂前期的染色体形态。
圆圈3内的腹水瘤细胞为分裂间期的染色体形态。
分列前期与分裂间期的染色体形态的区别为：分裂间期的细胞核内的染色质分布均匀，颜色均匀；分列前期的时间比较长，所以染色体的形态也比较多种，有细胞核膜还存在的，但其中的颜色不均匀，还有细胞核膜已经解体的，但染色体比较凌乱，且比较紧密。
如图所示，圆圈1中所示的为腹水瘤细胞有丝分裂中期的染色体形态。
此时，染色体排列的较有规律，而且染色体也比较粗。
这个时期比较容易辨认，而且就观察所得，处于中期的细胞数量也比较多。
如图所示，圆圈1内的细胞可能为腹水瘤细胞有丝分裂末期的细胞。
（但是，观察的不是非常清楚，所以我也不能确认。
）
b)腹水瘤细胞干片观察
如图所示，为腹水瘤细胞有丝分裂的干片观察。
装片当中，细胞膜破裂的极少，只有少数细胞细胞膜破裂，可以看到里面的染色体，图中可以看到的染色体基本处于细胞分裂中期，因为细胞分裂中期也是最容易观察的。
c)精巢细胞的减数分裂观察（与a）中的形态基本相同的前期、中期等的
染色体形态就不再赘述，主要来看一下精巢细胞所特有的染色体及细胞形态）
如图所示，圆圈1当中的精巢细胞已经完成了减数分裂，但是细胞质的分裂还没有完成。
下拨之分裂完成以后及形成精细胞，在经过形态变化即可形成精子。
图中可见清晰的细胞膜、核膜以及染成深色的染色体。
圆圈2当中蝌蚪形的深色物质为细胞膜裂解后暴露在外面的精巢细胞的核。
图片拍的不是非常的清晰，但是可以看出上图所有完整的细胞但中都有
两个被染成了深色的核，触不可以判断该细胞正处于减数第一次分裂的
末期。
六、实验分析
a)实验中各种试剂的作用：100μg/ml秋水仙素，用于促进细胞分裂。
2％
柠檬酸钠溶液，用于对细胞进行清洗。
0.075M的KCI，用于细胞的膨大，且因为浓度控制的刚好，所以细胞又不会破裂。
3:1甲醇:冰醋酸及1:1
甲醇:冰醋酸（应现配），用于固定细胞。
Gimesa原液，用于染色。
b)试验中腹水瘤细胞的观察分为干片和湿片。
湿片是将细胞悬液滴在已经
预先放在冰水当中湿润过的载玻片，使细胞破裂；而干片上的细胞基本
上不破裂。
七、注意事项
a)收集尽量多的细胞。
b)加入低渗液后一定要轻轻吹打，以免细胞核提前破裂，引起染色体外遗，
无规则排列。
c)染色要扣染，以免染液在玻片表面形成氧化膜，影响观察。