快速检测人新甲型H1N1、季节性和乙型流感病毒多重PCR方法的建立
诊断急性呼吸道感染的新方法:Luminex xMAP(@)技术
诊断急性呼吸道感染的新方法：Luminex xMAP(@)技术Mohamadou Sene;Joseph Mcampos;周晓芳【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2011(029)008【总页数】2页(P573-574)【关键词】急性呼吸道感染;xMAP技术;RVP【作者】Mohamadou Sene;Joseph Mcampos;周晓芳【作者单位】华盛顿国家儿童医疗中心分子诊断实验室,美国华盛顿20010-2970;华盛顿国家儿童医疗中心分子诊断实验室,美国华盛顿20010-2970;路明克斯上海公司,上海201203【正文语种】中文【中图分类】R446急性呼吸道感染(ARTI)是最常见的传染病。
在美国，仅季节性流感每年至少造成约36 000人死亡，成为致死的第四大原因。
目前常用的病毒培养、直接免疫荧光法(DFA)、免疫层析法及定量PCR等方法中，无一种方法能够及时检测出导致ARTI 发生的主要病毒种类。
由Luminex 公司研制的xTAG呼吸道病毒诊断试剂盒(RVP)填补此项空缺，已经通过美国FDA认证。
该试剂盒同时保证高敏感性及高特异性，xMAP技术是其核心技术。
1 ARTI诊断的常用方法2009年春季突然爆发的新型H1N1流感疫情，使得毫无防备的实验室无法给出及时准确的诊断方法。
当时大部分实验室，都使用下列一种或多种检测方法。
1.1 细胞培养法将病毒接种到活的真核细胞中，通过病毒感染和细胞内复制进行病毒繁殖。
根据病毒种类的不同，选择的最佳细胞株也有区别。
例如，流感病毒在狗肾细胞株(MDCK)中生长良好，但人的偏肺病毒更适合生长在传代的猴肾细胞株(LLC-MK2)或Vero E6细胞株中。
对生长在培养管管壁(传统的病毒培养)或圆形显微镜盖玻片(玻璃小瓶病毒培养)表面的细胞进行病毒感染并于适宜温度下培养，有些病毒需要24 h，有些则需要数日至数周，而有些病毒(如轮状病毒和诺如病毒)难以甚至不能培养。
TapMan荧光定量RT-PCR快速检测乙型流感病毒核酸方法的建立及意义
TapMan荧光定量RT-PCR快速检测乙型流感病毒核酸方法的建立及意义高洁;严敏;付婷;邵中军【摘要】目的探究TapMan荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)快速检测乙型流感病毒核酸的方法及意义.方法 24例确诊感染乙型流感病毒的咽拭子及相关机构提供的甲型流感病毒(H1和H3)、呼吸道合胞病毒、禽流感病毒以及乙型流感病毒,均采用TapMan荧光定量RT-PCR检测,此外乙型流感病毒采用常规RT-PCR 检测,观察检测结果.结果对于检测甲型流感病毒(H1和H3)、呼吸道合胞病毒、禽流感病毒以及乙型流感病毒,TapMan荧光定量RT-PCR仅对乙型流感病毒呈阳性,且反应与其他病毒无交叉.TapMan荧光定量RT-PCR相比于常规RT-PCR检测,对于不同浓度的乙型流感病毒敏感度更高.对24例送检样本,TapMan荧光定量RT-PCR的准确率为83.33％(20/24),明显高于常规RT-PCR检测的54.17％(13/24),差异具有统计学意义(P<0.05).结论对于乙型流感病毒的快速检测,根据病毒核酸的特点,使用TapMan荧光定量RT-PCR进行检测,具有高特异性、敏感度及准确率,推荐广泛应用.【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2018(012)011【总页数】2页(P52-53)【关键词】乙型流感病毒核酸;荧光定量;逆转录-聚合酶链反应;TapMan探针;检测【作者】高洁;严敏;付婷;邵中军【作者单位】710032 空军军医大学流行病学教研室, 全军疾病预防控制实验室;710032 空军军医大学流行病学教研室, 全军疾病预防控制实验室;710032 空军军医大学流行病学教研室, 全军疾病预防控制实验室;710032 空军军医大学流行病学教研室, 全军疾病预防控制实验室【正文语种】中文流感作为常见病, 有季节性流行的特点, 病原菌种类较多, 不同病毒有不同检测手段［1］。
PCR 及其相关技术在感染性疾病诊断中的应用
PCR 及其相关技术在感染性疾病诊断中的应用张洪涛【期刊名称】《包头医学院学报》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】3页(P151-153)【作者】张洪涛【作者单位】鄂尔多斯市中心医院康巴什部检验科，内蒙古鄂尔多斯 017000【正文语种】中文聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)是上世纪八十年代由Mullis等[1]首次公开发表的一种DNA体外扩增技术。
其发表后激发起了人们对这项技术的兴趣，并且由此翻开了分子生物学飞速发展的新篇章。
然而刚开始时，人们对PCR技术并不看好。
因为它不仅操作复杂，而且成本非常高，并不能得到普遍应用。
随着人们对DNA聚合酶和实验条件等因素的不断优化和改进，使得PCR逐渐发展成为成本较低、操作简便为人们所接受的常用实验技术。
PCR的基本原理类似于体内DNA复制的过程，通过模板DNA的变性，由双链变为单链使之与引物结合退火，然后在DNA聚合酶的作用下4种碱基相互连接即延伸，形成与模板相同的DNA，重复此步骤即可使目的基因进行数百万倍的放大。
从原理可看出，PCR能将几个拷贝目的基因进行放大，并在短时间内得到扩增，具有特异性高、灵敏度高、简便快捷易自动化等优点。
在这二十多年的时间里，PCR得到了不断的改进，从定性到定量，目的基因由小到大，操作由繁到简，已经有大概十几种的相关方法。
PCR及其相关技术的发展，优化了实验条件并且自动化程度也越来越高，开辟了临床诊断感染性疾病的新路径。
1 PCR在细菌感染性疾病诊断中的应用细菌能引起临床表现复杂的感染性疾病，因此对病原菌的准确诊断可以为疾病的诊断治疗和流行预测提供有效的依据。
然而人们对抗生素的大量使用，导致耐药菌以及新的病原微生物的出现，使得传统的微生物检测和鉴定方法难以满足疾病的快速诊断和治疗的要求。
因此，开发新的实验诊断方法显得非常必要。
PCR广泛应用于临床使得细菌的快速鉴定和细菌的耐药性检测成为可能。
SYBR GreenⅠ实时PCR检测甲型H1N1与季节性流感病毒方法的建立
SYBR GreenⅠ实时PCR检测甲型H1N1与季节性流感病毒方法的建立李文悌;孙菲;王晓春【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2013(29)1【摘要】目的建立一种检测甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2与乙型流感病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法.方法设计针对甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2与乙型流感病毒HA基因的引物,分别进行SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应,同时进行熔解曲线和Tm值分析,并作灵敏度和重复性试验.结果该方法与H5、H7、H9亚型流感病毒及副流感病毒1、2、3型均无交叉反应.构建的荧光定量标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为:95.588%,检测灵敏度为101 copies/反应体系,结果重现性好.成功地验证性检验了32份盲样标本.结论本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法敏感、不需荧光标记探针、成本低及高通量,能用于人类流感病毒的分型检测.%The purpose of this study is to develop a SYBR Green Ⅰ real-time fluorescence quantitative PCR assay for rapid detection of novel influenza A H1N1 virus, seasonal H1N1, H3N2 and influenza B viruses. Specific primers were designed according to the conserved sequence of hemagglutinin (HA) gene of the four influenza viruse s. The viruses were detected by SYBR Green Ⅰ real-time fluorescence quantitative PCR with the analysis of dissociation curve (DC) and melting temperature (Tm) , respectively. Sensitivity assay and reproducibility assay was determined. The results showed that the assay had no cross-reactionwith H5 , H7, H9 subtype influenza virus and parainfluenza virus type 1, 2, 3. The standard curves established by standard plasmid showed fine linear relationships between threshold cycle (Ct) and template concentration. The amplification efficiency was 95. 588% and detection sensitivity was 101 copies/reaction system. The results had fine repetition, and 32 blind samples were detected successfully. It's suggested that this SYBR Green Ⅰ real-time fluorescence quantitative PCR is sensitive, low-cost, high-throughput and suitable for subtyping of human influenza virus without fluorescence probe.【总页数】5页(P59-63)【作者】李文悌;孙菲;王晓春【作者单位】中南大学湘雅医学院医学检验系,长沙,410013;湖南国际旅行卫生保健中心,长沙,410016;中南大学湘雅医学院医学检验系,长沙,410013【正文语种】中文【中图分类】R373.1【相关文献】1.几种甲型H1N1流感病毒SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR检测方法的验证 [J], 蔡翁义;蔡颖;魏锐;黄琦容;朱俊贤;周广彪2.猪细胞因子SYBR Green实时PCR检测方法的建立 [J], 冯志新;姜平3.北美H7亚型禽流感病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 王晨曦;张谞霄;蒲娟;孙洪磊4.SYBR Green Ⅰ实时PCR检测三黄鸡TLR4基因方法的建立 [J], 陈非玥;钱隆;相雪莲;王怡菲;郭斯璇;曾依翎;田允波;许丹宁;曹楠5.SYBR GreenⅠ实时PCR检测乙脑病毒方法的建立与初步应用 [J], 朱兆奎;张曦;滕峥;赵百慧;邵俊杰;李燕婷;卢伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实时荧光定量PCR技术快速检测甲型H1N1流感病毒
实时荧光定量PCR技术快速检测甲型H1N1流感病毒作者：谷宇佳来源：《中国卫生产业》2018年第31期[摘要] 目的对疑似甲型H1N1流感病毒携带者的标本进行病毒核酸确诊，进而探讨实时荧光定量PCR技术在甲型H1N1流感病毒检测诊断中的意义。
方法选取2017年9—12月某院检验科工作人员采集的330份疑似甲型H1N1流感病毒携带者咽拭子标本，对其进行病毒核酸确诊检测，根据检测结果对甲型H1N1流感病毒、甲1型流感病毒、甲3型流感病毒以及乙型流感病毒进行临床分型。
结果该组标本中检出甲型H1N1流感病毒核酸阳性标本108份，检出率为108/330（32.73%），检出甲1型流感病毒10份（3.03%），检出甲3型流感病毒21份（6.36%），未检出乙型流感病毒。
结论临床上诊断甲型H1N1流感病毒时，采用实时荧光定量PCR技术，此种技术操作简单、快速、有着较强的特异性和较高的灵敏度。
有着较高的应用价值。
[关键词] 实时荧光定量PCR技术；检测；甲型H1N1流感病毒[中图分类号] R446.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2018）11（a）-0035-02甲型H1N1流感病毒是一种甲型流感病毒，临床上对其进行检测时，传统的方法是以细胞培养或者鸡胚培养分离定型流感病毒，但是这些方法都需要耗费较长的时间，尤其满足不了暴发疫情时，对病毒的诊断需求。
近些年，随着医疗技术的发展，实时荧光定量PCR技术被广泛的应用在了检测甲型H1N1流感病毒的临床上，此种技术操作起来极其简单快捷，并且其灵敏度和自动化的程度比较高，加上对核酸有着较高的扩增性，能够对甲型H1N1流感病毒做出快速的检测[1]。
为了对实时荧光定量PCR技术在甲型H1N1流感病毒检测诊断中的意义进行更加深入的探讨，2017年9—12月该文选取了330份疑似甲型H1N1流感病毒携带者咽拭子标本，对其进行病毒核酸确诊检测后，根据检测结果对标本进行了临床分型。
新型甲型H1N1流感的检测
新型甲型H1N1流感的检测Detect on The virus Of Novel A/H1N1【摘要】目的研究新型甲型H1N1流感病毒RNA荧光定量RT-PCR检测的方法，探讨取材方法，时间等对检测结果的影响。
方法自2009年8月1日至12月30日采集来自医院发热门诊及学校集中发热人群的标本800份，其中鼻咽拭子混悬液308例，咽拭子280例，鼻拭子212例，采集时间以病人的就诊时间为准，荧光定量PCR法检测其甲型H1N1流感病毒RNA，同时做季节性流感病毒检测，B型流感病毒检测，高致病性禽流感病毒(H5N1)RNA 检测。
结果800份样本中有423例为甲型H1N1流感病毒RNA阳性，占53%；其它流感352例，占44%。
就取材方法而言，鼻咽拭子混悬液的阳性率为68%，咽拭子的阳性率为47%，鼻拭子的阳性率为39%。
就采集时间而言，发病1天内采集的样本阳性率为64%，发病3天内采集的样本阳性率为31%，发病7天内采集的标本阳性率为8%，发病7天后采集的标本阳性率为0。
结论在新型甲型H1N1流感的检测中，取材时应尽可能取鼻咽拭子混悬液，且采样时间越早阳性率越高。
【关键词】新型甲型H1N1流感，荧光定量PCR，鼻咽拭子，阳性率【Abstract】Objective To research on the fluorescence real-time quantitative RT-PCR methods which is used to detect novel A/H1N1 influenza virus RNA, Discuss the influence of collecting methods and time. Methods Collect 800 examples of fauces swab from the patients with a fever that are come from school or fever clinic. detect novel influenza A(H1N1) virus RNA by fluorescence real-time quantitative RT-PCR ,in the same time ,detect the seasonable influenza ,flu B, fowl flu(H5NA) RNA. Results There are 423 novel A/H1N1 influenza virus positive and 352 the seasonable influenza positive among 800 examples,account for 53% anad 44%; As for collecting methods,the positive rate of nasopharynx swab is 68%, the same of pharynx swab is 47%,and the nose swab is 39%. As for the collecting time, the positive rate of one day is 64%,three days is 31%,seven days is 8% and the others are 0. Conclusion During the detection of novel A/H1N1 influenza,the nasopharynx swab is the best sampling and the patients should collect sampling as soon as possible.【Key Word】influenza A(H1N1),fluorescence quantitative PCR，nasopharynx swab, positive rate 2009年4月25日,世界卫生组织(WHO)首次发布了墨西哥与美国发生甲型H1N1流感(曾称“人感染猪流感”)疫情的报告,并宣布人感染甲型H1N1流感疫情是“国际关注的突发公共卫生事件”,随后在3天内两次提高流感大流行的警告级别,从第3级提升到第5级。
甲型H1N1、季节性H1N1及H3N2亚型流感病毒的多重荧光RT-PCR方法的建立
（ Ｓ ｈ ｅ ｎ ｚ ｈ ｅ ｎ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ａ ｎ ｄ ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｔｉ ｎ ｏ ｎ ， Ｓ ｈ ｅ ｎ ｚ ｈ ｅ ｎ ，Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ ５ １ ８ ０ ５ ５ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ） Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ａ ｍ ｕ ｌ ｔ ｉ ｐ ｌ ｅ ｘ Ｒ ｅ ａ ｌ — ｔ ｉ ｍｅ Ｐ Ｃ Ｒ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ｆ ｏ ｒ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ ｉ ｎ ｌ ｆ ｕ ｅ ｎ ｚ ａ ｓ ｕ ｂ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｐ ａ ｎ ｄ ｅ ｍ ｉ ｃ ２ ０ ０ ９ Ｈ１ Ｎ１ ，
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ｌ ４ Ｏ ８ ・
热带医学杂志 ２ ０ １ ４ 年 １ １ 月第 １ ４ 卷第 １ １ 期
Ｊ Ｔ ｒ ｏ ｐ Ｍ ｅ ｄ ， Ｎ ｏ ｖ ． ２ ０ １ ４ ， Ｖ ｏ １ ． １ ４ ， Ｎ ｏ ． １ １
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实 验研究论 著 ・
甲型 Ｈ １ Ｎ １ 、 季节 性 Ｈ １ Ｎ １ 及 Ｈ ３ Ｎ ２亚 型流感 病毒 的 多重 荧光 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ方 法 的建 立
本方 法所
构建 检测 流感 亚型 体系具有 较好 的特异性 、 灵 敏度 、 可 重复性 、 仪 器适用 性 ， 适 用 于各基层疾 控及 医疗 机构 。
Ａ ｍｕ ｌ ｔ ｉ ｐ ｌ ｅ ｘ ｒ ｅ ａ ｌ － ｉ ｔ ｍｅ ＰＣＲ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ｆ ｏ ｒ ｓ ｉ ｍｕ ｌ ｔ ａ ｎ ｅ ｏ ｕ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｉ ｎ ｆ ｕ ｅ ｎ ｚ ａ ｓ ｕ ｂ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｐ ａ ｎ ｄ ｅ ｍｉ ｃ ２ ０ ０ ９ Ｈ１ Ｎ１．ｓ ｅ ｓｏ ａ ｎ ｌ ａ Ｈ１ Ｎ１ ａ ｎ ｄ Ｈ３ Ｎ２
一步法多重RT-PCR快速筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒
一步法多重RT-PCR快速筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒莫秋华;杨泽;杨翠兰;林继灿;谭华;涂承宁;叶立青;刘志明;杜坚;孙虹【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2009(029)008【摘要】目的建立能同时筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒的多重RT-PCR技术.方法针对A型流感病毒的M基因、B型流感病毒的NS基因设计通用扩增引物,针对新型甲型H1N1流感病毒的HA基因设计特异性扩增引物,采用一步法建立多重RT-PCR反应体系.通过盲法实验与实时荧光RT-PCR进行比对来评价方法的准确性,并应用于临床评价方法的实用性和有效性.结果琼脂糖凝胶电泳分析多重RT-PCR产物,结果显示目的扩增片段条带清晰明亮,没有非特异性产物出现,可见该方法扩增效率高,特异性强.50份样本的盲法实验结果显示两种方法检测结果完全一致,符合率为100%.结论建立的多重RT-PCR方法能通过一次实验快速、准确地同时筛检A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒,是一项成本低廉、对流感的疫情监测和早期诊断具有实用价值的筛检技术.【总页数】3页(P1545-1547)【作者】莫秋华;杨泽;杨翠兰;林继灿;谭华;涂承宁;叶立青;刘志明;杜坚;孙虹【作者单位】珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;南方医科大学基础医学院,广东,广州,510515;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020【正文语种】中文【中图分类】R373.1【相关文献】1.亚欧型及南非型口蹄疫一步法多重荧光RT-PCR检测方法建立 [J], 吴绍强;查成刚;邓俊花;林祥梅;刘建;梅琳2.多重实时RT-PCR快速检测新型甲型H1N1流感病毒 [J], 潘朝思;罗宝正;薄清如;莫秋华;徐海聂;沙才华;廖秀云3.多重RT-PCR方法检测新型甲型H1N1流感病毒的研究 [J], 罗吉新;李海妙;林志达;王振全;苏惠龙;罗宝正4.一步法多重RT-PCR检测猪圆环病毒2型和猪繁殖与呼吸道综合征病毒 [J], 王英;周宗清;张春玲;何锡忠;张婉华;李春华;蒋凤英;邹勇5.A型塞尼卡病毒与O型、亚洲I型、A型口蹄疫病毒多重RT-PCR检测方法的建立 [J], 谢守玉;粟艳琼;刘惠心;施开创;赵晶;屈素洁;尹彦文;王树培;陆文俊;冯淑萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
多重RT-PCR方法检测新型甲型H1N1流感病毒的研究
多重RT-PCR方法检测新型甲型H1N1流感病毒的研究作者：罗吉新,李海妙,林志达,王振全,苏惠龙,罗宝正来源：《湖北畜牧兽医》2010年第10期摘要:为了建立快速检测新型甲型H1N1流感病毒的多重PCR技术,根据GenBank中公布甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)的HA和NA基因序列,设计并合成两套特异性引物。
使用TaKaRa公司的一步法RT-PCR试剂盒和自行设计合成的引物建立多重RT-PCR反应,按照预期的PCR产物序列合成的DNA作为阳性对照。
结果表明,该方法具有良好的特异性,可以将甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)与传统甲型H1N1、H3N2、H5N1、H6N2和H9N2亚型流感病毒区分。
该方法同时具有较高的灵敏度,最低可以检测到100个拷贝的阳性克隆质粒。
在对183份发热病人临床咽拭子样品检测中发现了10份阳性样品,对350份猪鼻腔拭子样品检测全部呈阴性,结果与中国检验检疫科学研究院试剂盒检测结果一致,说明了该多重RT-PCR方法在临床检测新型甲型H1N1流感病毒方面具有广阔的应用前景。
关键词:多重RT-PCR;甲型流感病毒;H1N1亚型中图分类号:S852.65文献标识码:B文章编号:1007-273X(2010)10-0008-03流行性感冒病毒简称流感病毒(Influenza virus),属正黏病毒科(Orthomyxoviridae)。
按其核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)和基质蛋白(matrix protein,M)的不同,可将流感病毒分成甲(A)、乙(B)、丙(C)3型。
甲型和乙型流感病毒可以引起大的暴发流行和严重疾病;丙型流感病毒与普通感冒有关,主要在儿童中流行[1]。
其中甲型流感病毒根据其表层血凝素蛋白和神经氨酸苷酶蛋白分类成不同亚型,至今为止发现16×9种不同组合的甲型流感病毒亚型。
其中影响人类最重要的流感病毒是H3N2亚型和H1N1亚型,前者往往会与非常大规模的高死亡率有关[2]。
pcr检测甲流乙流的原理
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季节性流感病毒H1N1实时荧光定量PCR检测方法的建立
季节性流感病毒H1N1实时荧光定量PCR检测方法的建立许黎黎;鲍琳琳;秦川【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2011(21)7【摘要】Objective To develop a real-time PCR detection method and system for seasonal influenza H1N1 virus. Methods NP gene of seasonal influenza H1N1 virus was selected as the detection object. Sequences of different subtypes of influenza viruses were alignmented by using ClustalW software, and the most unique and conserved regions of seasonal influenza H1N1 virus were recruited as the candidate sequences for specific primers. Primer Express and Primer Premier 5.0 softwares were used to filter the optimizing pair of primers for detection. Meanwhile, full length of NP gene was ampilified, purified, determined the concentration, and conserved to copy numbers to be used as the quantification standard. Results A detection sensitivity of 102copies/μl could be reached by the system when Power SYBR Green PCR Master Mix and StepOne Real-time quantitative PCR instrument were used. The linear relationship ( R2 ) could reach 0. 999; slope of standard curve was - 0. 3433; and amplification efficiency was 95.572％. A sharp and narrow melting peak appeared at 83.2℃ for all standards in different dilutions. Conclusions A fast and sensitivereal-time PCR detection system for seasonal influenza H1N1 virus was developed, which could be used as supplementary diagnostic and monitorapproach for basic and clinical researches on seasonal influenza H1N1 virus infections. The detection system does not ask for high technology background for experiment operators, thus has a practical and wild application for researches.%目的建立一种快速定量检测季节性流感病毒H1N1核酸的实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒.方法选择季节性流感病毒H1N1的保守基因NP基因作为检测靶目标,应用Clustal W软件进行序列同源性比对分析,筛选出季节性流感病毒H1N1特异性的保守序列作为引物候选区域,然后应用Primer Express及PrimerPremier 5.0软件包对候选引物进行进一步配对及筛选,得到最优特异性检测引物.同时,由病毒全长cDNA扩增出NP基因,琼脂糖凝胶电泳检测NP基因的扩增情况并对目的条带进行切胶回收及纯化,对回收后的NP全长基因进行核酸浓度测定,并换算成拷贝数,作为定量标准品.结果应用ABI公司的Power SYBR Green PCR MasterMix及StepOne实时荧光定量PCR仪,该检测系统灵敏度可达10<'2> copies/μL,不同梯度标准品间线性关系(R<'2>)达0.999,斜率为-0.3433,扩增效率为95.572%,所有标准品均在83.2℃出现尖且窄的特异性熔解峰.结论利用该检测系统可以快速定量检测季节性流感病毒H1N1,灵敏度高,可用作基础及临床实验室对季节性流感病毒H1N1感染的辅助诊断方法和临床效果的监测手段,对实验操作者要求相对较低,具有实际的应用价值.【总页数】5页(P62-66)【作者】许黎黎;鲍琳琳;秦川【作者单位】中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,北京,100021;中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,北京,100021;中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,北京,100021【正文语种】中文【中图分类】R332【相关文献】1.SYBR GreenⅠ实时PCR检测甲型H1N1与季节性流感病毒方法的建立 [J], 李文悌;孙菲;王晓春2.快速检测人新甲型H1N1、季节性和乙型流感病毒多重PCR方法的建立 [J], 孙菲;李文悌;欧新华;王晓春3.新型甲型H1N1／季节性流感病毒神经氨酸酶抑制剂评价体系的建立 [J], 张超;郭颖4.北美H7亚型禽流感病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 王晨曦;张谞霄;蒲娟;孙洪磊5.甲型H1N1流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 尹航;杨焕良;陈艳;孟沙沙;刘丽萍;辛晓光;陈化兰;乔传玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
定量实时 PCR 技术快速检测甲型 H1N1流感病毒
定量实时 PCR 技术快速检测甲型 H1N1流感病毒纪衍瑾;孙雯雯;朱喆【期刊名称】《中国民康医学》【年(卷),期】2015(000)017【摘要】目的：：对采集来的疑似甲型 H1N1流感患者咽拭标本进行核酸检测，不断摸索快速检测流感的 PCR 方法。
方法：实验方法按照 WHO 标准的实时PCR(Real-time PCR)检测法操作，选取343份疑似甲型 H1N1流感咽拭子采用实时定量核酸检测和快速分型。
结果：在343份咽拭子标本检测结果中，甲型H1N1流感病毒核酸阳性为52份，阳性率15.16%，乙型流感病毒阳性11份，甲3型流感病毒阳性13份，甲1型流感病毒未检出。
结论：实时 PCR 技术操作方法简便、耗时短、特异性强、灵敏度高，是一种适合应用于甲型 H1N1流感病毒可靠、快速诊断的检测方法。
【总页数】2页(P61-62)【作者】纪衍瑾;孙雯雯;朱喆【作者单位】辽宁省抚顺市疾病预防控制中心，辽宁抚顺 113006;辽宁省抚顺市疾病预防控制中心，辽宁抚顺 113006;辽宁省抚顺市抚顺县疾病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】R373.1+3【相关文献】1.TaqMan荧光定量RT-PCR 快速检测甲3型流感病毒 [J], 严菊英;卢亦愚;冯燕;史雯;茅海燕2.甲型(H1N1)(2009)流感病毒三重RT-PCR快速检测方法的建立 [J], 王云龙;李彦霞;李智涛;王国强;昌静峰;孙新城;徐桂超3.快速检测A型流感病毒的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法的建立 [J], 马继红;于海;周艳君;李国新;闫丽萍;张善瑞;王斌;童光志4.实时荧光定量PCR技术快速检测甲型H1N1流感病毒 [J], 谷宇佳5.快速检测A型流感病毒的Taq Man实时荧光定量RT—PCR方法的建立 [J],因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
甲型流感病毒快速基因分型POCT方法的建立
甲型流感病毒快速基因分型POCT方法的建立王大刚;王雅杰;潘美晨;焦炳欣;郭杰;王爽;郭晶晶;徐飞;吴吟妮【摘要】目的建立一种无需核酸提取,直接检测鼻咽拭子中甲型流感病毒H1HA pdm09、H3HA亚型和季节性流感病毒H1HA non-pdm09的POCT快速分型方法 .方法针对3种流感病毒的血凝素(hemagglutinin,HA)基因序列保守区设计高度特异性的引物和HyBeacon探针,同时以人类RNaseP基因作为内参.优化多重PCR反应条件,建立用熔解曲线分析甲型流感病毒基因分型的方法,并将其应用到ParaDNA核酸POCT检测仪,对50例甲型流感病毒抗原初筛阳性且经过实时荧光定量PCR检测的临床鼻咽拭子标本进行检测.结果该方法可在1.5 h内完成对3种甲型流感病毒亚型HA基因的特异性扩增和分型,与其他7种呼吸道病原微生物无交叉反应,其核酸检测下限为50 cop ies/μl.对临床50例甲型流感病毒抗原阳性的鼻咽拭子标本进行直接检测,检出H1HA pdm09阳性标本48例,H3HA阳性标本2例,未检出季节性流感H1HA non-pdm09阳性标本.结论基于HyBeacon探针和ParaDNA核酸POCT检测仪所建立的甲型流感病毒快速分型方法能同时检测H1HA pdm09、H3HA和季节性流感病毒H1HA non-pdm09.该方法无需核酸提取,操作简便,检测时间短,适于对甲型流感病毒抗原初筛阳性的鼻咽拭子开展现场基因分型检测,可为流感的诊治和防控提供及时快速的实验室依据.【期刊名称】《传染病信息》【年(卷),期】2019(032)004【总页数】5页(P307-311)【关键词】甲型流感;HyBeacon探针;熔解曲线;ParaDNA;基因分型【作者】王大刚;王雅杰;潘美晨;焦炳欣;郭杰;王爽;郭晶晶;徐飞;吴吟妮【作者单位】100015,首都医科大学附属北京地坛医院检验科;100015,首都医科大学附属北京地坛医院检验科;100015,首都医科大学附属北京地坛医院检验科;100015,首都医科大学附属北京地坛医院检验科;100015,首都医科大学附属北京地坛医院检验科;100015,首都医科大学附属北京地坛医院检验科;100015,首都医科大学附属北京地坛医院检验科;100015,首都医科大学附属北京地坛医院检验科;100070,北京英诺特生物技术有限公司【正文语种】中文【中图分类】R511.7WHO估计全球每年有10亿流行性感冒（流感）病例，其中重症病例约300万～500万，流感相关呼吸道疾病死亡病例约29万～65万。
甲型(H1N1)(2009)流感病毒三重RT-PCR快速检测方法的建立
甲型(H1N1)(2009)流感病毒三重RT-PCR快速检测方法的建立王云龙;李彦霞;李智涛;王国强;昌静峰;孙新城;徐桂超【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2010(50)32【摘要】目的建立一种早期快速检测甲型(H1N1)(2009)流感流行病毒株的方法.方法将2009年分离的甲型(H1N1)流感流行病毒株基因与以前的流感病毒株进行序列比对,找出其特异的基因序列,设计针对甲型(H1N1)(2009)流行株的血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)基因的三对特异引物,采用RT-PCR同时扩增三条目的片段,通过琼脂糖凝胶电泳进行检测.结果此方法对临床标本的阳性检出率为71%.结论采用三重PCR同时扩增甲型(H1N1)(2009)流感流行病毒的三段特异序列既缩短检测时间又提高了检测特异性,无交叉反应,是一种有效可行的快速检测甲型(H1N1)(2009)流感流行病毒株的方法.【总页数】3页(P22-24)【作者】王云龙;李彦霞;李智涛;王国强;昌静峰;孙新城;徐桂超【作者单位】郑州轻工业学院,郑州,450002;河南省生物工程技术研究中心;郑州轻工业学院,郑州,450002;河南省生物工程技术研究中心;河南省生物工程技术研究中心;河南省生物工程技术研究中心;郑州轻工业学院,郑州,450002;河南省生物工程技术研究中心;河南师范大学【正文语种】中文【中图分类】R511.7;R446.1【相关文献】1.一步法多重RT-PCR快速筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒 [J], 莫秋华;杨泽;杨翠兰;林继灿;谭华;涂承宁;叶立青;刘志明;杜坚;孙虹2.H1N1亚型猪流感病毒HA和NA基因双重RT-PCR定型检测方法的建立与应用[J], 温肖会;蔡春梅;魏文康;翟少伦;吕殿红;贾春玲;袁洁;黄忠;周秀蓉3.甲型H1N1(2009)流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价 [J], 秦智锋;曾少灵;陈书琨;廖立珊;花群义;张彩虹;孙洁;刘建利;卢体康;阮周曦;林庆燕;吕建强;曹琛福4.H1N1亚型猪流感病毒3种谱系三重RT-PCR检测方法的建立与应用 [J], 兰德松;魏澍;侯振中5.H9和H10亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立 [J], 李丹; 谢志勤; 邓显文; 曾婷婷; 张艳芳; 谢芝勋; 李孟; 罗思思; 谢丽基; 张民秀; 黄娇玲; 范晴; 王盛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
多重实时RT-PCR快速检测新型甲型H1N1流感病毒
多重实时RT-PCR快速检测新型甲型H1N1流感病毒潘朝思;罗宝正;薄清如;莫秋华;徐海聂;沙才华;廖秀云【期刊名称】《农业生物技术学报》【年(卷),期】2010(018)002【摘要】从GenBank中获取新型甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)HA和NA基因序列,通过多重序列比对之后,设计合成H1和N1基因特异性的引物和探针,用来建立新的甲型H1N1亚型流感病毒的多重实时RT-PCR检测方法.合成的两条荧光探针分别标记FAM和CY5荧光报告基团,荧光淬灭均使用BHQ基团.多重实时RT-PCR实验在ABl7500实时PCR仪上进行,经过40个循环的扩增之后,阳性对照出现标准的S型曲线,并且具有良好的特异性,可以很好地将新的甲型H1N1与传统的甲型H1N1以及H3N2、H5N1、H6N2和H9N2等流感病毒区分.多重实时RT-PCR可以检测到10个拷贝的模板,灵敏度接近检测方法的极限.检测时间短,从加样到反应结束只需要90 min.在对243例发热病人临床样品检测过程中发现7例阳性,1351份猪临床样品检测中未发现阳性,该检测结果和采用中国检验检疫科学研究院研制的试剂盒获得的检测结果一致.本研究所建立的快速、准确和高敏感性的多重实时RT-PCR方法非常适用于新型甲型H1N1流感病毒的实验室筛查.【总页数】4页(P352-355)【作者】潘朝思;罗宝正;薄清如;莫秋华;徐海聂;沙才华;廖秀云【作者单位】珠海出入境检验检疫局,国家外来病检测重点实验室,珠海,519015;珠海出入境检验检疫局,国家外来病检测重点实验室,珠海,519015;珠海出入境检验检疫局,国家外来病检测重点实验室,珠海,519015;珠海出入境检验检疫局,国家外来病检测重点实验室,珠海,519015;珠海出入境检验检疫局,国家外来病检测重点实验室,珠海,519015;珠海出入境检验检疫局,国家外来病检测重点实验室,珠海,519015;珠海出入境检验检疫局,国家外来病检测重点实验室,珠海,519015【正文语种】中文【相关文献】1.甲型H1N1流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的优化及应用 [J], 李永利;刘立明;廖华芳;王雪飞;王海滨2.应用含内参的多重实时荧光RT-PCR方法快速检测登革病毒和基孔肯雅病毒 [J], 郑夔;丁国允;周惠琼;谢雪妹;李小波;师永霞;苏锦坤;黄吉城3.一步法多重RT-PCR快速筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒 [J], 莫秋华;杨泽;杨翠兰;林继灿;谭华;涂承宁;叶立青;刘志明;杜坚;孙虹4.多重RT-PCR方法检测新型甲型H1N1流感病毒的研究 [J], 罗吉新;李海妙;林志达;王振全;苏惠龙;罗宝正5.实时荧光RT-PCR及RT-PCR快速检测肠道病毒71型和柯萨奇A16病毒 [J], 何雅青;肖性龙;杨洪;张海龙;姚相杰;阳帆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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普通 季节性 流感进行鉴别 区分 。
１ 材 料 与 方 法
ｎ Ｎ Ｈ１ １与 Ｈ Ｂ混合 ，Ｈ Ｎ ｓ １ Ｉ与 ｓ ３ ２混 合 ，Ｈ１ １与 ＨＮ ｓ Ｎ Ｈ Ｂ混合 ，Ｈ Ｎ ｓ ３ ２与 Ｈ Ｂ混 合 ，Ｈ Ｎ 、Ｈ Ｎ ｓ １ １ ｓ ３ ２与 Ｈ Ｂ混 合 ，Ｈ１ Ｉ ｓ １ １ ｓ ３ ２与 Ｈ ｎ Ｎ 、Ｈ Ｎ 、 Ｎ Ｈ Ｂ混合 ， 每个管内加入 ４
ｉ ｅ ｅ ｔ ｎｈ ｃ ｏｌ ｈ ｒ Ｊ ．Ｃｉ Ｃ ｅ ｎ ｒ ｌｉ ｓｉ ｉ ｓｈｏ ｃｉ ｅ ｔｒａｏ ｐ ｎ ｄ ｎ［ ］ ｌ ｈｍ，１９ ，４ ｎ ９７ ３
（ ） ５ ７—１ ８ ． ９ ：１ ７ ５ １
［ ５］ 宫琳 ， 周延 民，李春艳 ，等．快速建立兔骨质疏松症动物模型 的方法［ ］ Ｊ ．吉 林 大学 学报 ：医学 版 ，２ ０ ０ ８，３ ５） ０ ４（ ：９ ３—
ｅ ｅ ｔｏ ｓｄ ｆ ｎ ａ ｍｉ ｉｔ ｒ ｄ ｓ ｂ ｕ ａ ｅ ｕ ｌ ｏ ｒ ｔ ｕ ｎ ｆ ｃ ｆｋ ｉ ｉ ｄ ｎ ｓｅ ｅ ｕ ｃ ｔ ｎ ｏ ｓｙ ｔ ａｓ ｄ ｒ ｇ ｉ ｏ ｉ ｍｍｏ －
ｏｇｎｚｔ ｎａ ｄａ ｈｓ ｎ Ｊ ．Ｂ ｎ ， ０ １ ４ （ ： ６ ９ ４ ｒａｉ ｉ ｎ ｄｅｉ ［ ］ ｏｅ ２ １ ， ９ ５） ９ ５— ７ ． ａｏ ｏ ［ ］ Ｃ ＯＦ Ｏ ＷＡ Ｅ ＪＣ，Ｔ Ｙ Ｏ Ｒ，ｅ ａ．Ｓｒｍ ｃｎ ４ Ｒ Ｆ Ｎ Ｐ Ｍ， Ｄ Ａ Ｌ Ｒ Ｍ ｔ １ ｅ ｏ— ｕ
ｅ ｏ ｒ ｖ ｔ ｎ ｏ ｔｏ ｌ ｓ ｏ ｅ ｒ ｓ ｒ ｔｏ ｎ ｓｅ ｂ ａ ｔ ｃ ｔｓ ｅ ｅａ ｒ ｇ ａ ｉ ｏ ｓｅ ｃａ ｔ ｂ ｎ ｅ ｏｐ ｉｎ ａ ｄ ｏ ｔ ｏ ｌｓ ｙ ｏ ｋ ｌ ｔ ｙ ｌ
ｐｏ ｅｒ，ａｄｃａｇｓ ｕ ｎ ｋｌｔ ｔｒｔ ｎ ］ ｎｔ ｅ ， ｈｍ ｔ ｙ ｎ ｈｎ ｅ ｒ ｇｓｅ ａ ｍａ ａｉ ．Ａ ａ Ｒ ｃ ｄｉ ｅｌ ｕ ｏｌ Ｊ
性 强 ， 用 于人 类流 感病 毒 的 鉴 别 分 型 检 测 。 可
【 关键 词 】 人 流感 ； 甲型 Ｈ１ １ 新 Ｎ ；多重 Ｐ Ｒ； 测 Ｃ 检
流 感 病 毒’ｉ ｕｎａｖ ｕ ） 单 负 链 分 节 段 的 （ｎ ｅｚ ｉ ｓ 是 ｌ ｆ ｒ
Ｒ Ａ病毒 ， Ｎ 病毒 的表 面抗 原 血凝 素 （ ｅ ａｇ ｔ ｉ） ｈｍ ｇｌ ｉ ｎ 和 ｕｎ 神经氨酸 酶 （ ｅｒ ｉｉａｅ 易 发 生变 异 ， 导 致其 引 ｎｕａ ｎｄｓ） ｍ 是
同时伴有季节性 Ｈｌ １ Ｈ Ｎ Ｎ 、 ３ ２和 乙型流感 的散 发。在
型 ＨＮ １ １的同时 ， 季节性 流感 病 毒 的监 测也 相 当重 对 要 。目前普遍 推荐 快 速检 测 流感 病 毒 的方 法 为逆 转
录 一聚合酶链 式反 应 （ Ｔ—Ｐ Ｒ） ｒ ｌ ｉｅＰ Ｒ， Ｒ Ｃ 和 ｅ —ｔ Ｃ ａ ｍ ｒ ｌ ｉ ｅＰ Ｒ需要 的试剂 与仪器 比较 复杂 ， ｅ —ｔ Ｃ ａ ｍ 基层疾控 部 门难 以实现 。因此 ，０ ０年 １ ２１ ２月至 ２ １ 年 １ ０１ ０月 ， 本实验 旨在建立一种适用于基层疾控部门 的多重 Ｐ Ｒ Ｃ
ｃｎｒｔｏ ｓｏ ａｂ ｘ ｌ—ｔｒ ｉａ ｒｐ ｐｉｅ ｏ ｙ ｅ ｐｏ ｏｌ— ｅ ｔａｉｎ ｆｃ ｒｏ ｙ ｅ ｎ ｌｐ ｏ ｅ ｔ ｆｔｐ Ｉ ｒｃ ｌ ｍ ｄ ａ
ｇｎ ｍｎ ｅ ．ａ ｉｏ—ｔ ｍｉａ ｐｏ ｅ ｔ ｅ ｏ ｐ Ⅲ ｐｏ ｏｌ ｅ ｒｓ ｅ ｎ ｌ ｒ ｐｉ ｆｔ ｅ ｒ ｐ ｄ ｙ ｒｃ ｌ ｇ ｎ ｃｏｓ— ａ
ｍｏ ｅｉ ｇ ｉ ａ ｒ ｂ ｅ ｌｒ ｂ ｎ ｄ ｌ ｎ ｒ ｔ ｔａ ｅ ｕ ａ ｏ ｅ： ｍｏ ｈ ｌ ｙ， ｄ ｎ ｍｉ ｉｔ ｍｏ ｎ ｐ ｏｉ ｇ ｙ ａ ｃ ｈ ｓｏ ｒ
［ Ａ Ｅ Ａ ＤＲ ２］ Ｌ Ｘ Ｎ ＥＣ，Ｖ Ｃ ．Ｐ ｔｏｈ ｓ ｌｇ ｆ ｏ ｅｌ ｓｉ ｉ ｓ ＩＯ Ｌ ａ ｐ ｙｉｏｙｏ ｎ ｓ ｄｓ ｅ ｈ ｏ ｂ ｏ ｎ ｕ ｏｔ ｐｒｓ ［ ］ ｏ ｔ ｏｅＳｉｅ ２ １ ， ８ ６ ： ７ ｓ ｏ ｏｏｉ Ｊ ．Ｊｉ ｎ ｐｎ ， ０ １ ７ （ ） ５ ２—５ ６ ｅ ｓ ｎＢ ７． ［ ］ Ｎ Ｂ Ｖ Ｋ ＡＮ Ａ Ｉ Ｃ Ｒ ＤＡ， ｔ １ ｆｃｓ ｆ — ３ ＡＡＩ Ｎ， Ｈ Ｄ Ｎ ＡＭＩＡＮ ｅ ａ．Ｅ ｅｔｏ ｍｉ Ａ，
起世界大流行 的原 因。２０ ０ ９年 ４月 ， 由墨西 哥发端 的 Ｈｌ １ Ｎ 流感 疫情在 短时 间内蔓延 至全球 ３ ０多个 国家 ，
未来数年 内 ， 预计 新 甲型 Ｈｌ １ Ｎ 流感 病 毒会作 为 季节 性病毒继续传播 ， 在高风险人群 以及健康人 中间 ， 可能
会 出现严重病 例… ， 对这 类病例 做 到早 期识 别和 及时 治疗很重要 。新 的研 究 显示 ， 甲型 Ｈｌ １与季 节性 新 Ｎ 流感发生严重并发症 的风险相 当 。可见在监 测新 甲
９ ６． ０
［２ １ ］唐学 阳，刘利君 ， 虎，等．废用性骨质疏松幼龄大 鼠骨维生 郑
素 Ｄ受体表达的研究 ［ ］ Ｊ ．四Ｊ 大 学学报 ： ｉ Ｊ 医学版 ， ０ ０ ４ ２ １， １
（） ０ １ ：１６—１０ １．
［ ］ 郑 少雄 ， ６ 蔡文仪 ， 邱明才 ， 等．血尿羟脯氨酸测定方法的改进
湖南省科技 计划 项 目（ 编号 ：０ １ Ｋ ２０ ， ２ １ Ｓ ３ ６ ） 湖南 省 出入 境 检验
检疫 局科技项 目（ 编号 ：０ ９ ｎ０ １ 长沙市科 技计划 项 目（ ２０ ｈｋ ０ ）， 编号 ：
Ｋ ９４５ ０ ０ １ ０—１ ） １
△通信作者 。Ｅ—ｍａ ：ｘｌ＠ｙｈｏ ｃｒ． ｎ ｉｗ ｅ ｌ ｘ ａ ｏ。ｏ ｃ ｎ
病毒 的多重 Ｐ Ｒ方法。方法 Ｃ
病毒特异性 片段 的多重 Ｐ Ｒ的方法。用人的 Ｇ Ｐ Ｈ基 因作 为 内参判 断标本 来源和 实施质 量控 制 的依 据。并进 Ｃ ＡＤ 行敏 感性 、 特异性和 盲样检 测评价 实验 。结 果 １６ｂ （ 甲型 Ｈ１ １ 、３ ｐ 季节性 Ｈ１ １ 、 １ ｐ 季节性 Ｈ Ｎ ） １０ｂ （ ０ ｐ 新 Ｎ ） １５ｂ （ Ｎ ） ｌ８ｂ （ ３ ２ 、７ ｐ 乙型 流感病毒 ） 。该 实验检 测新 甲 型 Ｈ Ｎ１ Ａ ｅｌｏ ａ０ ／２０ ） １ （ ／ ｏｆｍｉ ７ ０ ９ 的敏 感性为 １ ｏｉｓｇ ） ｉ ／ ０ｅｐｅ／ ，￣。特异性 实验 结果 显示每 对 引物 只检 测对 应的病毒 ， ． ３ ２份盲样检 测结果特异性好。结论 该 多重 Ｐ Ｒ方 法可同时检 测新甲型 Ｈ１ １ 季节性 流感病毒 ， Ｃ Ｎ及 敏感性 、 特异
【 摘要 】 目的
建立一种可 以同时检测人类新 甲型 Ｈｌ 、 Ｎｌ 季节性 Ｈｌ 和 Ｈ Ｎ Ｎ１ ３ ２亚型流 感病 毒及 乙型流感 根据以上 ４种流感病毒的特异 性基 因设 计 ４对引物 ， 立可 同时扩 增 出 ４个流感 建 该 方法 可 同时扩 增 出流感病毒 亚型 的 Ｈ Ａ基 因片段 长度分 别为
１８ ２ ８ １ ：１７—１５ ９４， ０ （ ） ３ ４．
［ ］ 李 明，刘植珊 ，高建 章，等．中频 电流预 防废用性骨质疏松症 ９ 的实验观察 ［ ］ Ｊ ．中华 理疗杂 志，１９ （ ） ９ ９ １ ４ ：１５—１６ ９． ［０ ＨＶ Ｔ １ ］Ｓ Ｅ ＳＶ Ｎ，Ｐ Ｋ Ｖ ，Ｋ ＢＴ Ｋ Ａ Ｏ Ｅ ｓ ｏｒ ｉ ＡＮ Ｏ Ａ Ａ Ｓ Ａ ＩＳ ＡＩ ．Ｏ ｔ ｔ ｐｃ ｅ ｏ
（ 收稿 日期 ：０ ２—０ ２ 编辑 ： ２１ ２— １ 陈嘉伟 ）
陕速 检 测 人 新 甲型 ＨＩ １ 季 节 性 和 乙型 流感 、 Ｎ
病 毒 多 重 Ｐ Ｒ方 法 的建 立 水 Ｃ
孙 菲 李 文悌 ， ，欧新 华 ，王 晓春
湖南 国际旅行 卫 生保健 中心 综合 实验 室（ 沙 ４ ０ １ ； 中南 大 学 湘雅 医 学院 医学检 验 系 （ 沙 ４０ １ ） 长 １０ ６） 长 １０ ３ ； ’ 湖南省长 沙市疾病 预防控制 中心微生物科 （ １０ １ ４００ ）
ｍａ ｅ ｒ ｔ ｔｅ ｕ ｔ ｓ ｔ ｅ ｂ ｎｅ ａ ａ ｏ ｉ ｅ ｐ ｎ ｅ ｏ ａ ｈ ｒ ｐ ｕ ｉ ｌ ａｓ ａ ｔｎ ａ ｅ ｈ ｏ ｎ ｂ ｌ ｒ ｓ ｏ ｓ ｔ ｔ ｅ ａ ｅ ｔｃ ｃ
［］ Ｊ ．中华医学检验杂志 ，１８ ， （ ） ３ ９ ３ ６ ３ ：１３—１６ ３． ［ ］ Ｚ Ｎ Ｅ Ｓ Ｂ Ｇ Ｎ Ａ ＡＥ，ｅ ａ．ＴｍｅＲ ｓｏ ｓｓｏ ７ Ｅ Ｇ Ｑ Ｑ，Ｊ ＥＷ ， Ｉ Ｏ Ｉ ｔ １ ｉ ｅｐ ｎｅ ｆ
广 东 医学
２１ ０ ２年 ９月 第 ３ ３卷 第 １ ８期 Ｇｕ ｎ ｄ ｎ ｄｃｌ ｏ ｒ Ｍ Ｓｐ ０ ２， ｏ．３ Ｎ ．１ ａ ｇ ｏ ｇＭｅ ｉ ｕ ｎ ａＪ ｅ ．２ １ Ｖ １ ３， ｏ ８
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２ ７３１ ・
参 考 文 献
［ ］ Ｔ ＲＮ Ｒ Ｒ Ｔ，Ｌ ＴＮＵ ，ＨＥ Ｆ Ｒ Ｎ Ｔ Ｅ ｉ ｓ ｄ ｌ １ Ｕ Ｅ Ｏ Ｉ ＮＳ Ｆ Ｅ Ａ ．Ｄ ｓ ｅｉ ａｕｔ ｕ ｎ
．
２３ ７２．
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Ｇ ａｇｏｇ ｅｉｌｏｒ￣ Ｓ ． ０２ Ｖ１３ ， ｏ １ ｕｎｄｎ ｄ ａＪｕ Ｍ ｃ ｎ ｅ ２１， ｏ ３ Ｎ． ８ ｐ ．