甲型乙型流感病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)sop
甲型乙型抗原检测试剂盒使用说明书
甲型乙型抗原检测试剂盒使用说明书甲型乙型流感病毒抗原检测试剂盒是一种用于检测甲型和乙型流感病毒抗原的体外诊断试剂。
以下是该试剂盒的使用说明书：一、产品名称甲型乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）二、适用范围本试剂盒用于体外定性检测人鼻咽拭子或唾液样本中甲型和乙型流感病毒抗原。
三、使用方法1. 打开试剂盒，取出采样拭子，伸入鼻腔或口腔采集样本，并放入配套的洗脱液中旋转混合均匀。
2. 取出检测卡，将混合好的洗脱液滴入检测卡的加样孔中，注意不要超过MAX线。
3. 等待15分钟，观察检测卡的反应结果。
4. 根据结果判断是否感染甲型或乙型流感病毒。
四、结果解释若检测卡上仅C线显示红色，表示未感染甲型或乙型流感病毒；若C线和T 线均显示红色，表示感染甲型或乙型流感病毒。
本试剂盒灵敏度高，可有效检出甲型和乙型流感病毒抗原。
但请注意，该试剂盒仅用于体外诊断，不能替代专业医疗机构的诊断结果。
如有疑虑，请及时就医。
五、注意事项1. 本试剂盒仅供一次性使用，用后请销毁。
2. 采样时应避免污染，以免影响检测结果。
3. 试剂盒应存放在2～30℃干燥处，避免阳光直射和潮湿环境。
4. 本试剂盒为体外诊断试剂，不能替代专业医疗机构的诊断结果。
如有疑虑，请及时就医。
5. 不同批次的产品可能存在差异，请按照产品说明书的指引正确使用。
6. 如有任何疑问或需要技术支持，请联系我们的客户服务部门。
以上为甲型乙型流感病毒抗原检测试剂盒的使用说明书，供您参考。
如有任何疑问或需要更多信息，请咨询专业医疗人员或查看产品附带的使用说明书。
甲型乙型流感病毒抗原检测试剂盒(免疫层析法)说明书
【主要组成成份】
试剂盒规格组成
a) 32832 ETAC
试纸条
20 根，存放在密封铝膜 袋中
抽提缓冲液 （含表面活性剂，防腐剂）
2.3mL×1
盐溶液（0.9%氯化钠）
10mL×1
甲型流感病毒阳性质控（人）
1瓶
乙型流感病毒阳性质控（人）
1瓶
标本抽提时用的测试管
20 支
不同批号的试剂盒中的各组分，不可互换。
A. 滴加抽提缓冲液
B.浸入并注意液体前端
C. 阴 A B A 性型型型 流流和 感感 B 型 流 感
【阳性判断值】
1. 实验操作正确 出现黑色的质控线，表明实验操作正确。
2. 甲型流感病毒阳性 如果，除了黑色质控线外，在结果区的下方出现 1 条蓝线，表明甲型流感病毒阳性。
3. 乙型流感病毒阳性 如果，除了黑色质控线外，在结果区的中部出现 1 条蓝线，表明乙型流感病毒阳性。
【检验原理】 本产品包括甲型和乙型流感病毒抗原的抽提和诊断。采用免疫层析法原理，包被了甲型和乙
型流感病毒抗原的单克隆抗体。针对两种类型的抗体结合在蓝色的胶乳颗粒上（检测标记），针 对两类型的抗体被固定在运载膜上，捕捉抗原和乳胶标记的抗体的复合物，显示阳性结果。
乙型流感病毒IBV核酸检测试剂盒说明书
乙型流感病毒（IBV）核酸检测试剂盒说明书技术原理：DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。
双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。
因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
（DNA高温变性低温复性）发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
特点优势：1.特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5. 优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
6. 优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
流感快速检测试盒说明书
病毒分离培养法
Flu A
Flu B
阳性 阴性 小计 阳性 阴性 小计
71 2 73 45 0
45
29 298 327 5 350 355
100 300 400 50 350 400
71.00%
90%
99.33%
100%
92.25%
98.75%
0.77
0.94
根据上述表格，从甲型流感病毒的检测情况来看：艾博试剂与病毒分离培养法 的阳性符合率为 71.00%，阴性符合率为 99.33%，总符合率为 92.25%。对上 述结果进行 Kappa 一致性检验，取 95％可信区间，Kappa=0.77。
【注意事项】
1）本产品仅用于体外诊断！
2）使用前请仔细阅读说明书并按说明书要求操作。
3）铝箔袋开封后请尽快使用，请勿使用超过有效期的产品。
4）避免用手直接接触 Flu 检测试剂的结果判读和样本接触部位。
5）样本处理时，不可用力弯曲棉签，以免折断。
6）所有的样本抽提管、取样棉签、Flu 检测试剂均为一次性使用。
(H5N1) 甲型流感/Brazil/11/78(79/560) 甲型流感/Vietnam/1194/2004(09/184) (H5N1) 甲型流感/Taiwan/1/86(94/510) 乙型流感 Brigit 乙型流感 B/R5 乙型流感 Hong Kong/5/72 乙型流感/Russia/69 乙型流感/Lee/40
甲流乙流抗原检测用法
甲流乙流抗原检测用法
甲流和乙流的抗原检测一般使用试剂盒或试纸，通过从受检者鼻咽部或咽喉部取样来直接检测病毒。
下面以甲流检测试剂盒为例，介绍具体用法：
1. 检测前应做好准备工作，提前洗手、消毒，认真阅读说明书了解详细步骤后再开始操作。
2. 受检者可自行或让他人将取样棒缓缓深入鼻腔内，深度一般为1.5cm左右，然后旋转5圈以上，待充分取样于鼻腔壁后拿出取样棒，打开含有液体的采样试管，将取样棒上的标本充分涮至液体中，取出时挤压取样棒。
然后将采样试管中的标本液滴3-5滴进入检测盒上面的小孔中，等待10-15分钟即可查看检测结果。
阴性仅有C变红，阳性C、T均变红，C 不变红检测无效，需要重新检测。
如果你想要了解其他的检测用法，可以更换关键词或提供更具体的需求再次提问。
乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)操作说明
【注意事项】 1. 2. 开始检测前请仔细阅读本说明全文。 核酸提取一定要在样本采集后 48 小时内尽快进行，否则 DNA 会发生明显降解。不能尽快进行的，应参照【样本要求】 保存。 3. 4. 5. 6. 7. 8. 实验中所用器具均应经过灭菌处理。 使用本品时，应遵循临床基因扩增实验室的技术要求进行操作。 加样时应使样本完全落入反应液中，不应有样本粘附于管壁上，加样后应尽快盖紧管盖。 样本处理等步骤须在生物安全柜或其他防护设施中进行。 实验室人员必须经过专业培训。 实验过程应分区进行（试剂准备区、样本制备区、扩增和产物分析区），实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备， 各区个阶段用品不得交叉使用；各区间人员流动及空气流向应有严格要求，最大限度避免交叉污染。 9. 10. 实验用消耗品（如离心管、吸头等）应有合理的清洁和质检程序，避免污染或扩增反应抑制物造成假阴性结果。 本品仅用于体外诊断。
心数秒，按 43μl/管分装到反应管中。 2. 内参配制 将 n×3μl 内参（单通道仪器不加内参）及 n×50μl 核酸提取液 B 至于一新离心管中混匀备用（混合后避免反复冻融 使用，使用前混匀 5 秒钟） 。 3. 样本、对照品的处理 样本处理：取 100μl 待检血清样本（冻存血清使用前在室温融解，振荡混匀 10 秒钟）分别加入 100μl 核酸提取液 A， 振荡混匀 10 秒种，12000rpm 离心 10 分钟，弃上清；分别加入 50μl 核酸提取液 B 与内参的混合液至沉淀中（使用前一定 要充分混匀， 将颗粒和液体一起加入沉淀中， 其中颗粒量应在 15％以内） ， 振荡混匀 10 秒钟， 100℃保温 10 分钟， 12000rpm 离心 2 分钟。处理后的样品应在 1 小时内使用，或在-20℃～-80℃最长保存 1 个月（不宜反复冻融）。 血清对照品处理：按照血清标本处理方法处理试剂盒内阳性血清对照、弱阳性血清对照、阴性对照。（冻存血清对照品 使用前在室温融解，振荡混匀 10 秒钟）。 定量校准品处理：定量校准品无需处理，在样本加样前直接将定量校准品 1 号至 5 号振荡混匀 10 秒钟，低速离心数秒 后加样。 4. 样本加样 将样品处理上清液（冻存样品使用前室温充分融化，振荡混匀数秒，12,000rpm 离心 2 分钟）、阳性血清对照、弱阳性 血清对照、阴性对照以及定量校准品各 7μl 分别加入反应管中，低速离心数秒，取出置定量 PCR 仪上。 5. 仪器扩增程序 1、ABI7300/7500/Mx3000P/SLAN 双通道仪器：反应管先在 50℃反应 2 分钟，然后 94℃保温 5 分钟，再按 94℃10 秒→60℃45 秒 循环 40 次。60℃采集 FAM、JOE 荧光通道的信号。 2、LightCycler 480 仪器：反应管先在 50℃反应 2 分钟，然后 94℃保温 5 分钟，再按 94℃10 秒→60℃45 秒 循环 40 次。 60℃采集 FAM、RED 610 荧光通道的信号。 3、单通道仪器：反应管先在 50℃反应 2 分钟，然后 94℃保温 5 分钟，再按 94℃10 秒→60℃45 秒 循环 40 次，60℃采集 FAM 荧光通道信号。 6. 质量控制 试剂盒中提供定量校准品五个，阴性对照，阳性血清对照和弱阳性血清对照各一个。如试剂质量完好并操作正确，阳性 血清对照、弱阳性血清对照、定量校准品应表现为阳性结果，阴性对照应表现为阴性结果，阳性血清对照定量值为 5.0±2.5 ×10 IU/ml，弱阳性血清定量值为 5.0±2.5×10 IU/ml。如超过范围则实验无效，应检查仪器、试剂、扩增条件等方面的 误差。在每次检测中都应设置阴阳性对照品。 7. 结果判断 仪器程序运行完成后，按软件要求进行结果保存，输入HBV 定量校准品的量值，选择自动分析模式，软件将自动给出标 准曲线并计算各样本的HBV DNA 含量Q(IU/ml）。
乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)操作说明
1 弱阳性血清对照 100μl/管 0 1 定量校准品 1 号 15μl/管 7 1 （7.5×10 IU/ml） 1 定量校准品 2 号 15μl/管 6 2 （7.5×10 IU/ml） 1 定量校准品 3 号 15μl/管 5 3 （7.5×10 IU/ml） 1 定量校准品 4 号 15μl/管 4 4 （7.5×10 IU/ml） 1 定量校准品 5 号 15μl/管 3 5 （7.5×10 IU/ml） 注：不同批号试剂盒中各组份不能互换。 自备实验耗材：适用规格的离心管、微量移液器等。
乙型肝通用名称：乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 英文名称：Diagnostic Kit for Quantification of Hepatitis B Virus DNA (PCR-Fluorescence Probing) 【包装规格】 32 人份/盒 【预期用途】 乙型肝炎病毒是乙型病毒性肝炎的病原体，具有较强传染性，传播途径复杂，流行面广，发病率高等特点，可导 致急慢性乙型肝炎，淤胆型肝炎，严重的可导致急性肝衰竭，临床上主要表现为肝功能损害，部分患者可有黄疸。隐形感 染较为常见。 目前临床上常用的 HBV 检测方法主要有酶免疫法、化学发光法检测 HBV 标志物和核酸检测 HBV DNA 方法。本试剂 盒定量检测人血清和血浆样本中的乙型肝炎病毒 DNA，主要是通过对乙肝患者血中 HBV DNA 基线水平和变化情况的监测， 用于评估抗病毒治疗的应答和治疗效果监测。检测结果仅供临床参考，不能作为患者病情单独的评价指标，必须结合临床 表现和其他实验室检测指标对患者病情进行评价，亦不能作为血液筛查 HBV 病毒的筛查试剂使用。 【检验原理】 本品基于 TaqMan 探针实时荧光 PCR 技术。在 PCR 反应过程中，同时利用 Taq 酶的 5’→3’聚合酶活性和核酸外 切酶活性， 使得 TaqMan 探针降解， 荧光报告基团和淬灭基团分离使得荧光信号发射， FAM 荧光检测乙型肝炎病毒， JOE/RED 610 nm 波长通道检测内参。 本品使用外源性内参，可以监控和避免由于样本中的 PCR 抑制物或操作不当引起的“假阴性”结果。 【主要组成成份】 每个反应 组份名称 装量 主要成份 中的用量 1 2 3 4 5 6 7 8 9 核酸提取液 A 核酸提取液 B 内参 MgCl2 PCR缓冲液A Taq酶 HBV引物探针 阴性对照 阳性血清对照 3×1.1ml/管 2×1ml/管 160μl/管 450μl/管 480μl/管 160μl/管 320μl/管 100μl/管 100μl/管 100μl 50μl 3μl 13μl 15μl 5μl 10μl － － － 7 μl 7 μl 7 μl 7 μl 7 μl 聚 乙 二 醇 、 NaCl NaOH、SDS、Tween-20、 Chelex-100 合成病毒 MgCl2 Buffer、dNTPs Taq酶、UNG酶 HBV 引物和探针，内参 引物和探针 HBV 阴性血清 HBV 阳性血清 HBV 阳性血清 寡核苷酸片段 寡核苷酸片段 寡核苷酸片段 寡核苷酸片段 寡核苷酸片段 【储存条件及有效期】-20℃保存12个月。探针若单独储存，应注意避光。 【适用仪器】 本品适用于 AB 7300/7500/Mx3000P/LightCycler 480/SLAN 实时荧光定量 PCR 仪。 【样本要求】 用一次性的针筒抽取病人静脉血 1ml，置于灭菌的一次性试管中室温自然凝固或 800～1600g 离心 20 分钟，取分离出的 血清 0.2ml 左右送检。血清标本 2～8℃可放置 72 小时，-70℃可长期保存，标本不宜反复冻融。 【检验方法】 1. 试剂配制 按样本数（样本数＝待检血清样本数＋血清对照品 3 个＋定量校准品 5 个）n 配制反应液： 取 PCR 缓冲液 A n×15μl、HBV 引物探针 n×10μl、Taq 酶 n×5μl、MgCl2 n×13μl 至于一离心管中混匀；低速离
甲型流感病毒检测步骤
甲型流感病毒核酸检测步骤所用仪器与试剂盒：实时荧光定量PCR仪、Simply P总RNA提取试剂盒需要的配套设备和材料无菌无酶的1.5ml离心管无菌无酶的各种规格移液器吸头离心机（最大转速〉14000rpm）无酶无水乙醇操作步骤：1、样品预处理a）抗凝全血直接取全血（≤100μｌ）加等量的Solution R1，振荡混合30s，室温静置1min，放入1.5ml离心管中进行下一步。
b）白细胞全血取出后尽快离心（3000rpm×10min）吸取白膜层，或用红细胞裂解液／淋巴细胞分离获取白细胞进入下一步。
c）组织块取不大于30mg组织，于液氮中研磨，取出放入1.5ml离心管中进入下一步。
d）液体及其它液体样本（尿液，腹水，胸水，脑积液等）可以直接取样本100μｌ放入1.5ml离心管中进入下一步。
e）细菌取适量细菌培养液（最多2×10＾6个细菌），离心5000rpm×1min，弃去上清。
加入100μｌSolution R1，振荡混合30s，室温静置1min，进入下一步。
2、处理好的样品中，加入Solution R2 600μｌ充分振荡混匀，室温静置3-5min，此步骤不可离心，取上清时尽量避免吸到悬浮杂质，以避免下步离心时堵塞离心柱。
3、将上清液吸入Spin columns，Spin columns要套上离心管离心30s。
4、弃去外管中液体，向Spin columns中加入600μｌWash buffer，离心30s弃去接液管中液体，重复洗涤一次，然后空柱于10000rpm离心1min后将离心柱转移到一个新1.5ml 离心管。
5、将Spin columns移入新的1.5ml离心管中，在膜中央加入Elution Buffer 20-50μｌ，室温静置1min,离心30s，获得总RNA。
6、取适量PCR反应管，每管加入IV A PCR反应液A17ul、IVC PCR反应液B3ul。
乙型流感病毒抗原检测试剂国家参考品使用说明书
最低检
S1
出限参
S2
考品
S3
S4
S5
【检测标准】
甲型 H1N1 季节性 H1N1 B/Victoria B/Yamagata 季节性 H3N2
冻干剂 冻干剂 冻干剂 冻干剂 冻干剂
500μL/支 500μL/支 500μL/支 500μL/支 500μL/支
1、阳性参考品符合率：PC01~PC04 要求乙型流感病毒均为阳性，甲型流感病毒
【组成和性状】
参考品 类型 阳性 参考品
编号
PC01 PC02 PC03 PC04 PC05 PC06 PC07 PC08 PC09 PC10
病原体种类 及型别
B/Victoria B/Victoria B/Yamagata B/Yamagata 甲型 H1N1 甲型 H1N1 季节性 H1N1 季节性 H3N2 季节性 H3N2 甲型 H7N9
3、本参考品使用过程中应按照传染性物质进行处理； 4、本参考品效期根据长期稳定性结果确定； 5、本参考品仅适用于甲/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（层析法），如用于其 它类型流感病毒抗原检测试剂盒，应另行制定质量标准
3
中国食品药品检定研究院 体外诊断试剂标准物质
甲/乙型流感病毒抗原检测试剂国家参考品
使用说明书
【中文名称】甲/乙型流感病毒抗原检测试剂国家参考品
【英文名称】National Standard for Influenza A/B Viral Antigens Detection Kit
【用 途】甲/乙型流感病毒抗原检测试剂的质量评价和控制
【保存条件】—20℃及以下
【批准文号】（2015）国生参字 0068
【批号及效期】370013-201501
一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及使用方法[发明专利]
![一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及使用方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/a4d105dd67ec102de3bd8970.png)
专利名称：一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及使用方法
专利类型：发明专利
发明人：赵百慧,杨孙孝,李春明,向军喜
申请号：CN202011186596.0
申请日：20201029
公开号：CN112176109A
公开日：
20210105
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明的一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒，包括核酸扩增反应液、酶混合液、甲/乙型流感病毒混合反应液、阳性对照液、弱阳性对照液和阴性对照液，其中，甲/乙型流感病毒混合反应液包括甲型流感病毒上游引物、甲型流感病毒下游引物、甲型流感病毒探针、乙型流感病毒上游引物、乙型流感病毒下游引物、乙型流感病毒探针、内参RNase P上游引物、内参RNase P下游引物、内参RNase P探针和DEPC水，其中内参是对产品本身内参的检测，本实施例的内参会参与核酸提取到RT‑PCR的过程，可用于对样本采集、保存和运输以及核酸提取过程和扩增过程进行监控，避免假阴性判读结果的出现。
申请人：上海伯杰医疗科技有限公司
地址：200000 上海市奉贤区沪杭公路1588号3号楼1302、1303、1304、1305、1306、1307、1309室
国籍：CN
代理机构：上海乐泓专利代理事务所(普通合伙)
代理人：苏杰
更多信息请下载全文后查看。
新型冠状病毒、甲型和乙型流感病毒全预混冻干多重荧光PCR检测试剂
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011571695.0(22)申请日 2020.12.27(71)申请人 青岛巴特菲科技发展有限公司地址 266000 山东省青岛市高新区河东路368号蓝色生物医药产业园5号楼101室(72)发明人 李然栋 马清霞 薄慧文 (51)Int.Cl.C12Q 1/70(2006.01)C12Q 1/686(2018.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称新型冠状病毒、甲型和乙型流感病毒全预混冻干多重荧光PCR检测试剂盒及其检测方法(57)摘要本发明公开了新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒的多重荧光PCR快速检测试剂盒，包括冻干固态RT ‑PCR Mix，液态复溶Buffer、冻干固态阳性对照、冻干固态阴性对照，所述冻干固态RT ‑PCR Mix含有SARS ‑CoV ‑2特异性基因ORF1ab、甲型流感M基因、乙型流感M基因和人源内参基因RNAse P引物序列对应的引物组，本试剂盒将多重荧光定量PCR技术和冷冻干燥工艺相结合，利用3对特殊引物和人源内参基因，体外扩增3种病原体的特异性序列，并结合荧光探针进行实时检测。
并且该检测方法操作简便，对检测人员的操作水平要求低，可一次性检测3种常见的呼吸道病原体，大大节约检测时间和检测成本，实现大批量样本的快速筛选，全程检测仅需40分钟‑1小时，结果准确可靠。
权利要求书2页 说明书9页 附图1页CN 112760415 A 2021.05.07C N 112760415A1.新型冠状病毒、甲型和乙型流感病毒的三重荧光PCR快速检测试剂盒，其特征在于：包括冻干固态RT‑PCR Mix，液态复溶Buffer、冻干固态阳性对照、冻干固态阴性对照和病毒RNA提取试剂，所述冻干固态RT‑PCR Mix含有SARS‑CoV‑2特异性N gene、甲型流感M基因、乙型流感M基因和人源内参基因RNAse P引物序列对应的引物组。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
甲型乙型流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）操作规程
1 目的：规范操作流程，确保检测结果的准确性可靠性。
2 范围：甲型/乙型流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）
3 操作人：甲型/乙型流感病毒核酸检测人员对此规程负责
4 内容：
4.1 核对本次实验所有标本与申请单对应的编号，统计本次实验标本总数，确定所需实际量。
实际检测数量为所需检测样本数量和阴阳对照品总和。
4.2 试剂准备：
4.2.1 进入试剂准备区，更换本区实验服和实验鞋，戴上手套、口罩。
4.2.2 打开照明灯，从冰箱中取出本次实验所需试剂。
4.2.3 打开超净工作台，在废液缸中加入新鲜配置的10%的次氯酸钠溶液。
4.2.4 取出本次实验所需耗材，如离心管、离心管架、吸头。
将试剂盒中的核酸扩增反应液、酶混合液、检测液、阳性对照、空白对照、DNA提取液取出，置于离心管架上。
待室温溶解后，瞬时离心，备用。
4.2.5 根据样本量计算需准备检测试剂人份数N（N=样本数+阳性对照+空白对照）。
4.2.6 按比例（核酸扩增反应液7.5μl/人份+酶混合液5μl/人份+甲型/乙型流感病毒反应液4μl/人份+去RNA酶水 3.5μl/人份）将各组分在离心管中混匀后瞬时离心，配置成PCR-mix，并按20μl/管依次分装到对应编号PCR八连管中。
4.2.7 将分装好的PCR-mix盖上PCR板盖，放到传递窗，收拾好试验台，将垃圾桶内的废弃物丢弃到医疗垃圾桶中并用10%的次氯酸钠溶液清洗干净，将移液器调回最大量程，换下本区工作服。
4.3 样本处理：
4.3.1 进入样本处理区，更换本区实验服和实验鞋，戴上手套、口罩。
4.3.2 开启生物安全柜照明灯，将样本、试剂、分装好的PCR-mix放入生物安全柜内，在废液缸中加入新鲜配置的10%的次氯酸钠溶液。
4.3.3 取200μl的待测样本、阳性对照、弱阳性对照和空白对照用病毒核酸提取试剂盒提取核酸。
本试剂盒的阳性对照、弱阳性对照、空白对照参与提取，用于对环境的监控和试剂的质控。
4.3.4 小心打开PCR八联管盖，每份待测样本核酸溶液、阳性对照、弱阳性对照和空白对照按照5μl/管依次加入对应编号的PCR八联管中，总体积为25μl/管。
4.3.7 盖紧PCR八联管盖，做好标记，低速短暂离心，置于反应管架上，放到去检测室的传递窗。
4.3.8 收拾好生物安全柜，将垃圾桶内的废弃物丢弃到医疗垃圾桶中并用10%的次氯酸钠溶液清洗干净，将移液器调回最大量程，换下本区工作服。
4.4 PCR扩增检测
4.4.1 进入样本处理区，更换本区实验服和实验鞋，戴上手套、口罩。
4.4.2 将反应管和管架带入核酸扩增区，按《ABI7500荧光定量PCR仪的使用维护标准操作程序》的相关程序操作。
4.4.3 循环参数设定
注：ABI7500实时荧光PCR仪不选 ROX 校正，淬灭基团选 None。
4.4.4 结果分析设置
反应结束自动保存结果，根据分析后图像调节Baseline的Start值、End值以及Threshold值（可以根据实际情况自行调整，Start值可以在3~15、End值可设在5~20，调整空白对照的扩增曲线平直或低于阀值线），点击Analysis自动获得分析结果，在Report 界面察看结果。
4.5 结果分析和判读
在仪器正常，空白对照、阳性对照均正常的情况下进行结果分析：FAM通道代表甲型，VIC通道代表乙型，ROX通道代表内标。
4.5.1 质量控制
4.5.1.1 空白对照：扩增阶段无典型 S型扩增曲线，结果分析为阴性。
4.5.1.2 阳性对照：阳性对照的FAM、VIC、ROX通道扩增阶段有典型S型扩增曲线且Ct≤30.0 。
4.5.1.3 弱阳性对照：弱阳性对照的FAM、VIC、ROX通道扩增阶段有典型S型扩增曲线且Ct≤33.0 。
4.5.1.4 以上要求需在同一实验中同时满足，否则本次实验无效。
4.5.2 结果判读
4.6.1 本试剂盒为体外检测试剂。
操作人员应经过专业培训并具有一定经验。
4.6.2 为保证实验结果的准确性和可靠性请使用已校准的移液器，选用合格的一次性使用的PCR反应管、离心管、枪头等进行样本处理及配液等操作，所有用具应不含DNA酶和RNA酶。
4.6.3 实验严格分区操作；各区物品、工作服均为专用，不得交叉使用，避免污染，实验后立即清洁工作台。
4.6.4 本试剂盒使用前应在室温充分融化，混匀并瞬时低速离心。
4.6.5 样本处理应在生物安全柜中进行，以保护操作人员安全和防止对环境的污染。
4.6.6 待测样本尽可能新鲜，-70℃保存的核酸DNA，加样前应在室温充分融化、混匀并瞬时低速离心后使用。
4.6.7 每次实验应设置空白对照和阳性对照。
不同批号的试剂请勿混用，在有效期内使用试剂盒。
4.6.8 分装有反应液的反应管应扣盖或装入密实袋内再转移至样本处理区。
4.6.9 加样时应使样品完全加入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快盖紧管盖。
4.6.10 反应液分装时尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，避免泄露污染。
4.6.11 扩增完毕取出反应管，密封在专用塑料袋内，丢弃于指定地点。
4.6.12 实验中用过的枪头请直接打入盛有10%次氯酸钠的废物缸内，并与其他废弃物品一同丢弃。
4.6.13 工作台及各种实验用物品经常用10%次氯酸钠、75%酒精和紫外灯进行消毒。
4.6.14 实时荧光 PCR 仪需定期校正和清洁载样板板孔。
4.6.15 本试剂盒涉及的待测样本应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》相关要求。