浅谈胚胎移植受体牛的选择标准

中国奶牛·2009年第8期

时间(min)活力1960.3500002200.4000002250.4079002400.4041672450.4041672500.391667255

0.384722

表1

不同平衡时间的平均精子活力

注:表中各时间点分别试验过3次,显示的活力是3次活力的平均值,而3次的活力又是每次中12头牛的平均值。

图1

平衡时间与精子活力的函数关系

繁殖在室温下将采集的鲜精分别记录品种、牛号、采集量、采集时间，测密度，检查活率，密度高于每毫升6亿、活率大于0.65、无异常的精液为合格精液。

将鲜精根据采集量、密度和预测的冻后活力做适当倍数的稀释，摇匀。稀释和摇匀的动作轻缓。然后分装。

1.3.3精液的平衡、冷冻

将分装后的各牛的精液平铺于冷冻架上,一头一架,

每架分为7组，置于4℃的平衡柜中平衡,各组的平衡时间依次为196min 、220min 、225min 、240min 、245min 、250min 、

255min ；到设定时间后,将平衡后的精液置于冷冻柜中,

开始冷冻；冷冻开始时,设定的液氮压力、冷冻曲线、液氮罐内的液氮量、各头牛在冷冻柜内的相对位置都一致，冷冻结束后，快速取出冻精。

1.3.4冻精的检测分析

将冻后的精液在38℃的水浴锅中解冻，每头牛取3

支精液检测活力,记录牛号、品种，并算出平均值。

2结果结果见表1。

将表1的试验数据用SPSS 软件进行处理，得出平衡时间与冻后活力之间存在如下函数关系：y=-4.524E-

0.5x 2+0.021x-2.0271，此公式中y 代表冻后活力，x 代表平衡时间，-4.524E-0.5表示-4.524×10-5。根据此公式得出平衡时间x 为232.0174时，冻后活力y 达到最高值为0.40844（图1）。

3讨论

从图1、表1可以看出,在一定范围内,随着平衡时间

的延长,冻后活力在提高；当达到最高值后,随着时间的延长,活力又在下降。笔者认为,平衡过程对牛精液既有积极的一面，又有消极的一面。牛精液经稀释后,精细胞环境发生巨大变化，精子在平衡过程中，精细胞内外物

质重新流动,趋于平衡;稀释液中保护物质通过平衡进入细胞内可以保护和增强精子抗冻的能力,这是积极的方面。另一方面,物质流动对精细胞壁是一种冲击,会使其受到损伤；而且由于平衡是在4℃的环境下进行,精子在运动过程中消耗其自身能量；这都是其消极的一面。所以平衡时间太长和太短都对精子是不利的。

结束语：由于笔者采用的时间点和牛头数有限,对这方面的研究,只是开始;以后随着试验牛数量的增多和时间范围的扩大我们会继续加深对这方面的研究。

浅谈胚胎移植受体牛的选择标准

贾福德，朱芳贤，马毅

（天津市奶牛发展中心，天津

300384）

中图分类号：S 823.3+6

文献标识码：A

文章编号：1004－4264（2009）08－0036－03

摘要：牛胚胎移植技术对牛业的发展具有重要意义。通过胚胎移植技术的大范围应用，提高了良种牛覆盖率，加快了牛育种进程。胚胎移植技术同分子标记辅助选择、基因诊断、体细胞克隆等技术相结合，将发挥更大作用。胚胎移植效果受胚胎质量、移植技术水平和受体牛的状况三因素制约。因此，受体牛的选择对胚胎移植效率具有重要影响。本文将就受体牛的选择标准做一简单综述。关键词：牛；胚胎移植；受体收稿日期：2009－04－14

基金项目：天津市农业科技成果转化与推广项目（0603010），天津市农场局科技攻关项目（0803），天津市自然科学基金（08JCYBJC04500）资助。作者简介：贾福德(1949-)，男，黑龙江人，高级畜牧师，主要从事奶牛胚胎工程研究与推广。

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中国奶牛·2009年第8期

胚胎移植俗称人工授胎或借腹怀胎。它是将家畜的胚胎，从胚胎供体移植到另一个体，即受体的子宫内，使之附植、妊娠并分娩，达到生产优良后代的目的。在生产中，移植妊娠率受胚胎质量、移植技术水平和受体牛状况三大因素制约，其中，受体牛的选择占有重要地位。将胚胎准确无误地移植到具有相同生理环境下的受体牛子宫内，并保证胚胎附植前的存活显得十分重要。原因之一：移植时所用胚胎大多是发育到第7天的桑椹胚或囊胚，被移植到子宫内并不立刻发生附植，而要游离存在20～30d，与子宫发生密切联系的时间大体在受精后60d （45～75d）；其二，大多数胚胎死亡发生在妊娠最初的18d。

显然，选择的受体牛优劣对承载的胚胎能否持续发育是胚胎移植技术成功的关键环节之一。为寻求稳定的胚胎移植妊娠率，笔者基于多年的胚胎移植实践，试图提出一套适于奶牛生产应用的受体牛选择标准，以供同行借鉴。

1受体牛的一般选择标准

尽管对受体牛品种、遗传性状、生产性能等没有严格的要求，只要母牛无繁殖障碍，体格发育及营养良好的健康母牛均可选用，但在实践中，为保证较高的移植妊娠率和体现胚胎移植技术实用价值，应注意以下几方面选择标准。

1.1年龄

通常情况下，对受体牛的年龄无特别要求。为充分发挥母牛的繁殖潜力，应尽量选择青年、壮年母牛做受体。在天津地区，标准化饲养管理条件下的奶牛养殖场、小区，应选择14～15月龄、体重360kg以上的育成牛或2.5～5岁、1～2胎的成母牛作为受体牛。

1.2体躯结构

体型结构匀称，体格大小适中；长、宽、深发育充分；身体前、中、后躯，胸深、四肢比例协调；被毛要有光泽。体高不低于125cm，130cm以上为宜。尖、斜尻、坐骨结节窄的牛不能作为受体。

1.3体况（膘情）

体况直接反映出受体牛的营养状况。大量研究证明，营养对母牛的健康，特别是繁殖性能具有主导作用。选择具有良好体况（膘情）的受体牛是母牛发情、排卵、胚胎附植及妊娠的基础。因此，受体牛膘情应达到中等以上水平，过肥过瘦者均不宜做受体选用。

1.4体质健康

受体牛应为性情温顺，无肢蹄、乳房疾病及影响健康的各种传染疾病。

1.5繁殖状况

（1）选择育成牛做受体，应有2个以上连续正常的发情周期记录；选择经产牛做受体，胎间距在13个月左右、产后在60d以上，产后生殖器官恢复情况正常。经产牛在产后的第一个发情期一般不进行移植。

（2）产犊性能良好，无流产史，上胎无难产、助产情况。

（3）屡配不孕或胚胎移植两次未孕者不能选为受体。

（4）患有子宫内膜炎、子宫积液、阴道炎、卵巢机能不全、卵巢囊肿等繁殖障碍的母牛不能选做受体。

（5）对预选的受体牛必须进行初期直检，如若查出系异性孪生母犊、先天性卵巢或输卵管发育不全；先天性无子宫角、双子宫颈、子宫颈闭锁无法通过子宫颈；阴门、阴道发育不全等，均不能作为受体来选择。

（6）对配种后短时间内无法确定是否怀孕或配种后因疏忽而遗漏妊检的牛只不得作为受体来选择，否则在同期发情处理中会造成流产，不仅带来经济损失，而且影响以后的利用。

1.6产奶水平

头胎305d产奶量不足4500kg的成母牛、母亲头胎305d产奶量低于5000kg的育成牛可作为受体来选择。2受体牛发情的选择标准

2.1发情周期

母牛的正常发情周期平均为21d（18～24d），在未受精的情况下，发情周期始终是周而复始，直到母牛衰老、性机能活动终止为止。如果发情周期不正常，可能与母牛患有繁殖疾病或饲养管理粗放等有关。一般而言，选择的受体牛应来自90%以上的母牛处于正常发情周期的群体。

2.2发情标志

母牛的正常发情表现是以母牛站立不动，接受其他牛爬跨作为奶牛发情的外部判断标准。在人工授精实践中，不仅依靠外观表现来揭示正常的发情牛，更重要的是必须进行直肠检查，触诊卵巢上卵泡的存在与大小变化，准确判断母牛的发情与否，发情的实质是卵泡的生长发育、成熟及排卵。因此，卵巢上卵泡的发育是母牛发情的根本标志。

实际生产中，正常发情的母牛并非百分之百的卵泡都能如期完成排卵，所以在选择受体时，要通过认真仔细的直肠检查，准确判别48h内其卵泡是否停止发育、退化或发生排卵迟缓的情况，并要仔细分辨黄体化卵泡形态之间的差异。

2.3发情同步化

胚胎从供体牛体内取出移植到受体牛体内，只要两者生殖系统处于相同的生理状态，胚胎就会在受体体内继续发育生长，这就要求胚胎发育阶段和受体牛的发情时间相吻合，这是发情同步化成功与否的重要标志。

移植的胚胎和受体牛子宫的生理环境不同期化将会导致胚胎死亡。其缘由：①子宫环境只能接纳同步

繁殖

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