触酶试验氧化酶试验

触酶试验

⑴原理：

触酶又称过氧化氢酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。

⑵方法：

取洁净玻片1张，用接种环挑取细菌，加3% H2O2 1滴，立即观察结果。⑶结果：

若立即出现大量气泡为阳性。无气泡为阴性。

⑷应用：

大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，但链球菌科阴性，故常用此试验来鉴定。此外，金氏杆菌属的细菌也为阴性。分枝杆菌的鉴别则用耐热触酶试验，结核分枝杆菌为阴性，戈氏分枝杆菌和地分枝杆菌为阳性。注意事项：

①3% H2O溶液要新鲜配制。②不宜用血琼脂平板上生长的菌落，

因红细胞含有触酶，可致假阳性反应。③取对数生长期的细菌。

氧化酶试验

(1)原理：氧化酶(细胞色素氧化酶)是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶

(2)试剂：1溉酸四甲基对苯二胺或1%盐酸二甲基对苯二胺。

(3)方法：常用方法有三种；

1) 菌落法：直接滴加试剂于被检菌菌落上。

2) 滤纸法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。

3) 试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸上。

(4)结果：细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。为保证结果的准确性,

分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。

(5)应用：主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，前者为阴性，后者为阳

性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。

耐酸性染色法（萎-倪二氏法）

2.3.1石炭酸品红染色液碱性品红

0.3g 95汇醇10mL5%&水溶液90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。

232 3% 盐酸—乙醇浓盐酸3mL 95%乙醇97mL

2.3.3复染液吕氏碱性美蓝染色液。美蓝0.3g ; 95%S醇30mL; %氢氧化钾溶液100mL将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。

2.3.4染色法

2.3.4.1将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染5min,倾去染液，水洗。

2.342 滴加盐酸—乙醇脱色，直至无红色脱落为止（所需时间视涂片厚薄而定，一般为1〜3min），水洗。

2.3.4.3 滴加吕氏碱性美蓝染色液，复染30s〜1min,水洗，待干，镜检。

2.3.5结果：耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。

抗酸染色一般步骤

1）初染

用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，岀现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。

2）脱色

3縊酸酒精脱色30秒~1分钟；用水冲洗。

3）复染

用碱性美兰溶液复染1分钟，用水冲洗后用吸水纸吸干。

苯酚、美蓝、盐酸四甲基对苯二胺或盐酸二甲基对苯二胺、双氧水