用LA-PCR方法克隆东方田鼠部分Y染色体序列
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【 中图分 类号】 ９ —３ 【 献标识码 ］ ［ Ｑ ５３ 文 Ａ 文章编 号］１７ —８ ７２ １ ）４０ ２ —５ ６ ４ ５ １ （０ ２０ —３ ４０
东方 出 鼠（ ｃｏｕ ｏ ｔ ） 啮齿 目、仓 鼠科 、 Ｍｉｒ ｔｓ ｒｉ 属 ｆ ｓ
式 动物 中父系 遗传 结构 的研究 很少 。为 了克服在 Ｙ 染 色体测 序 时存 在 的ｘ染 色体污 染 问题 ， ｅｌｏｇ Ｈ ｌ ｒ 等 ｂ 通 过 比对 小 鼠和人 的序 列 ，预测 出 Ｙ染 色体保 守靶 标 序 ￣ （ ＡＴ ） 以 ＹＣＡＴ Ｆ ＹＣ Ｓ ， Ｊ Ｉ Ｓ设 汁 ３ ９划 引物 ，成
功获 得 少 量 的 Ｙ染 色 体序 列 １ 。
［ 鼠 科 、 田鼠属 ，主 要 分 布 在 我 国 ， 以及 和 我 ± Ｊ 国接 壤 的 俄 罗 斯 、 朝 鲜 、 蒙 古 等 地 …。 东方 出 鼠 是迄今 发现 的唯 一一种 具有抗 血吸 虫病特 性 的哺 乳
类 动 物 ，早 在 １ ６ ９ ０年代 ，我 国学者 便 对其 展 丌研 究 。 目前 我 国 已利 用 东方 田 鼠建 立 了糖 尿 病 、
父 系遗 传 结 构 的研 究 提供 了一 种 新策 略 。
卵 巢癌 等 多种模 Ｉ刚 。有 关 东方 鼠的研 究 大 多 ｓ ， 在 国 内 ，其 遗传 学研 究 尚 处于 初 级 阶 段 ，仅 限 于 染色 体核 、生 化标 记、Ｒ Ｄ及 线粒 体 Ｒ Ｌ ＡＰ Ｆ Ｐ的 初 步研 究 等 ［９ ７］ － 。从基 冈组水 平 进行 相 关 生理 、 病
用 Ｌ Ｐ Ｒ 方法 克 隆东方 田鼠部 分 Ｙ染 色体 序 列 Ａ．Ｃ
姜宪环 蔡慧强 －高 骏 倪丽菊，李 凯 －肖君华 －周宇荀， ， ， ， ， ， ， （． １ 东华大学生物科 学与技术研究所， 上海 ２ １２ ； ． ０ ６０ ２ 上海市农业科学院， 上海 ２ １０ ； ０ １６
３ 上 海 实验 动 物研 究 中心， ． 上海 ２ １０ ） ０２ ３ ［ 摘要】 目的 克隆 东方 田 鼠长江亚种 （ ｃｏｕ ｆｒｓ ａａ ｒｍ） 宁 夏指 名 亚种 （ ｃｏｕ ｆｒｓ Ｍｉ ｔｓｏｔ ｌｍｏｕ 和 ｒ ｉｃ Ｍｉｒｔｓ ｏｔ ｉ
ｆｒｓ ｏｔ） ｉＹ染色体的部分序列，并挖掘这两个亚种 间的单核苷酸多态性位点（Ｎ ｓ Ｓ Ｐ） 。方法 本研究 利用依据 Ｙ染 色体保 守性靶 标位 （ ＡＴ ） 计 的 引物 ，测得 Ｙ染 色体 上 的 ８ 内含 子短 片段序 ￣ ＹＣ Ｓ设 ． 个
本研 究 以湖 南洞庭湖 种群和 宁夏青铜 峡种群 的 东方 田鼠为样 本 ，基 于 ＹＣ Ｔ Ａ Ｓ策 略 ，在 获得 了 些 Ｙ染色体 内含 子序列 后 ，利 用 Ｌ Ｐ Ｒ技 术成 功 Ａ．Ｃ 扩增 出相邻 内含 了之 间的序列 ， 为研究 东方 鼠种 群 的父系遗传 结构打下 坚实基础； 为非模 式动物 的 也
的解 释 ，是 东方 出 鼠研 究 的 重 要 目标 之 一 。 哺乳 动物 Ｙ染色体 和线 粒体 Ｄ Ａ（ ＤＮ 是研 Ｎ ｍｔ Ａ） 究 父 系和 母 系 遗 传进 化 史 的有效 Ｔ 具 。研 究 表 明， ｍｔ Ａ 比 Ｙ染色 体突变 率 高ｌｌｌ 广泛应 用于 东 ＤＮ 】Ｉ 被 ０ｌ ，
供 ，山上海 两 普 尔 一 必凯 实验 动 物 有 限 公 一 繁 殖 、 Ｊ 饲 养［Ｃ （ ２ ０ —０ ６ ， Ｓ ＸＫ 沪）０ ８０ ｌ ］收集 两种 群 的雌雄 东方
［ 稿 日期 １ ０ １１—０ 收 １— １ ２ ３
［ 金 项 目】 海 市 科 技 创 新行 动 计 划 实 验 动 物 专 项 基 金 基
（ ９ ４ ９ ０１ ２ Ｎｏ０ １ ０ ０ ０ ）
出 鼠各 一 ， ４ 鼠尾 组织样 本 ， ２ ℃保 存备 用 。 ｛ 共 ｌ 一０
１２ 东方 田鼠基 因组 ＤＮＡ的提 取 ．
［ 者 简 介】 宪 （９ ６）男， 』 究 生， 究方 向： 鼠遗 作 姜 １８ 一 ， 倾 研 研 小
列 ，进 而设 计 长 片段 Ｐ Ｒ Ｌ 子之 间的长 片段 序 列 。结果
获 得 东方 田鼠长江 亚种和 宁夏指 名亚种 Ｙ 染 色体上 的 ７０ ｐ 列 ，比对这 两 个亚种 的序 列后 发 ３ ０ｂ 序 现 ４个 Ｓ ｓ 点 。结 论 获得 了田鼠 Ｙ染 色体 上 的 ７３ ０ｂ 列和 ４个 Ｓ ｓ 点 。 ＮＰ 位 ０ ｐ序 ＮＰ 位 ［ 词】东方 田鼠； 核 苷酸 多态性位 点 ； 染 色体保 守性 靶标位 点 ； 片段 Ｐ Ｒ 关键 单 Ｙ 长 Ｃ
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 ．
方 出鼠和 其他 鼠的系统进 化研 究 中［－１ 冈 Ｙ染 １ １。 ２４
色 体上 大部分序 列都 与 ｘ染色体 同源 ， 导致在 非模
所用动物 为湖南涮 庭湖种群 东方 出鼠和 宁夏青 铜 峡种 群 东方 鼠， 山上海 实 验动物 研 究 中心 提 均
传 学 。Ｅｍａｌｉ ｎ ｘａ ｈａ ｗ ｗ＠１３ｃｍ — ｉ ｉ ｇ ｉ ｕ ｎ ｗｗ ：ａ ｎ ６． ｏ
ＤＮＡ提 取采 用 Ｔａ ＧＥ 天根 尘化科 技有 限公 ｉｎ Ｎ（
司 ） 织基 冈组抽 提 试 剂盒 ，操 作 步骤 依 既 书 进 组
［ 讯 作 者】 宇 ｒ （９ ８）史， 教 授 ， 究方 向： 鼠遗 传 通 剧 ０１ ６ 一 ， 削 研 小
３４ ２
实 验 动 物 比较 医 学 Ｌ ｂ ｒ ｏｙＡ ｉ ｌｎ ｏ ａ ｔ ｅＭｅｉｉ ｊ ａｏａ ｒ ｎｍａ ａｄＣ ｍｐｒ ｉ ｄｃ ｅ ｔ ａｖ ｎ
ｄ ｉ ０３ ６ ／ｉ ｎ１７ —８ ７２ １ ． ．１ ｏ： ．９ ９ ．ｓ ． ４５ １ ． ２０ ０ ４ １ ｊｓ ６ ０ ４
东方 出 鼠（ ｃｏｕ ｏ ｔ ） 啮齿 目、仓 鼠科 、 Ｍｉｒ ｔｓ ｒｉ 属 ｆ ｓ
式 动物 中父系 遗传 结构 的研究 很少 。为 了克服在 Ｙ 染 色体测 序 时存 在 的ｘ染 色体污 染 问题 ， ｅｌｏｇ Ｈ ｌ ｒ 等 ｂ 通 过 比对 小 鼠和人 的序 列 ，预测 出 Ｙ染 色体保 守靶 标 序 ￣ （ ＡＴ ） 以 ＹＣＡＴ Ｆ ＹＣ Ｓ ， Ｊ Ｉ Ｓ设 汁 ３ ９划 引物 ，成
功获 得 少 量 的 Ｙ染 色 体序 列 １ 。
［ 鼠 科 、 田鼠属 ，主 要 分 布 在 我 国 ， 以及 和 我 ± Ｊ 国接 壤 的 俄 罗 斯 、 朝 鲜 、 蒙 古 等 地 …。 东方 出 鼠 是迄今 发现 的唯 一一种 具有抗 血吸 虫病特 性 的哺 乳
类 动 物 ，早 在 １ ６ ９ ０年代 ，我 国学者 便 对其 展 丌研 究 。 目前 我 国 已利 用 东方 田 鼠建 立 了糖 尿 病 、
父 系遗 传 结 构 的研 究 提供 了一 种 新策 略 。
卵 巢癌 等 多种模 Ｉ刚 。有 关 东方 鼠的研 究 大 多 ｓ ， 在 国 内 ，其 遗传 学研 究 尚 处于 初 级 阶 段 ，仅 限 于 染色 体核 、生 化标 记、Ｒ Ｄ及 线粒 体 Ｒ Ｌ ＡＰ Ｆ Ｐ的 初 步研 究 等 ［９ ７］ － 。从基 冈组水 平 进行 相 关 生理 、 病
用 Ｌ Ｐ Ｒ 方法 克 隆东方 田鼠部 分 Ｙ染 色体 序 列 Ａ．Ｃ
姜宪环 蔡慧强 －高 骏 倪丽菊，李 凯 －肖君华 －周宇荀， ， ， ， ， ， ， （． １ 东华大学生物科 学与技术研究所， 上海 ２ １２ ； ． ０ ６０ ２ 上海市农业科学院， 上海 ２ １０ ； ０ １６
３ 上 海 实验 动 物研 究 中心， ． 上海 ２ １０ ） ０２ ３ ［ 摘要】 目的 克隆 东方 田 鼠长江亚种 （ ｃｏｕ ｆｒｓ ａａ ｒｍ） 宁 夏指 名 亚种 （ ｃｏｕ ｆｒｓ Ｍｉ ｔｓｏｔ ｌｍｏｕ 和 ｒ ｉｃ Ｍｉｒｔｓ ｏｔ ｉ
ｆｒｓ ｏｔ） ｉＹ染色体的部分序列，并挖掘这两个亚种 间的单核苷酸多态性位点（Ｎ ｓ Ｓ Ｐ） 。方法 本研究 利用依据 Ｙ染 色体保 守性靶 标位 （ ＡＴ ） 计 的 引物 ，测得 Ｙ染 色体 上 的 ８ 内含 子短 片段序 ￣ ＹＣ Ｓ设 ． 个
本研 究 以湖 南洞庭湖 种群和 宁夏青铜 峡种群 的 东方 田鼠为样 本 ，基 于 ＹＣ Ｔ Ａ Ｓ策 略 ，在 获得 了 些 Ｙ染色体 内含 子序列 后 ，利 用 Ｌ Ｐ Ｒ技 术成 功 Ａ．Ｃ 扩增 出相邻 内含 了之 间的序列 ， 为研究 东方 鼠种 群 的父系遗传 结构打下 坚实基础； 为非模 式动物 的 也
的解 释 ，是 东方 出 鼠研 究 的 重 要 目标 之 一 。 哺乳 动物 Ｙ染色体 和线 粒体 Ｄ Ａ（ ＤＮ 是研 Ｎ ｍｔ Ａ） 究 父 系和 母 系 遗 传进 化 史 的有效 Ｔ 具 。研 究 表 明， ｍｔ Ａ 比 Ｙ染色 体突变 率 高ｌｌｌ 广泛应 用于 东 ＤＮ 】Ｉ 被 ０ｌ ，
供 ，山上海 两 普 尔 一 必凯 实验 动 物 有 限 公 一 繁 殖 、 Ｊ 饲 养［Ｃ （ ２ ０ —０ ６ ， Ｓ ＸＫ 沪）０ ８０ ｌ ］收集 两种 群 的雌雄 东方
［ 稿 日期 １ ０ １１—０ 收 １— １ ２ ３
［ 金 项 目】 海 市 科 技 创 新行 动 计 划 实 验 动 物 专 项 基 金 基
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１２ 东方 田鼠基 因组 ＤＮＡ的提 取 ．
［ 者 简 介】 宪 （９ ６）男， 』 究 生， 究方 向： 鼠遗 作 姜 １８ 一 ， 倾 研 研 小
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获 得 东方 田鼠长江 亚种和 宁夏指 名亚种 Ｙ 染 色体上 的 ７０ ｐ 列 ，比对这 两 个亚种 的序 列后 发 ３ ０ｂ 序 现 ４个 Ｓ ｓ 点 。结 论 获得 了田鼠 Ｙ染 色体 上 的 ７３ ０ｂ 列和 ４个 Ｓ ｓ 点 。 ＮＰ 位 ０ ｐ序 ＮＰ 位 ［ 词】东方 田鼠； 核 苷酸 多态性位 点 ； 染 色体保 守性 靶标位 点 ； 片段 Ｐ Ｒ 关键 单 Ｙ 长 Ｃ
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 料 ．
方 出鼠和 其他 鼠的系统进 化研 究 中［－１ 冈 Ｙ染 １ １。 ２４
色 体上 大部分序 列都 与 ｘ染色体 同源 ， 导致在 非模
所用动物 为湖南涮 庭湖种群 东方 出鼠和 宁夏青 铜 峡种 群 东方 鼠， 山上海 实 验动物 研 究 中心 提 均
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［ 讯 作 者】 宇 ｒ （９ ８）史， 教 授 ， 究方 向： 鼠遗 传 通 剧 ０１ ６ 一 ， 削 研 小
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实 验 动 物 比较 医 学 Ｌ ｂ ｒ ｏｙＡ ｉ ｌｎ ｏ ａ ｔ ｅＭｅｉｉ ｊ ａｏａ ｒ ｎｍａ ａｄＣ ｍｐｒ ｉ ｄｃ ｅ ｔ ａｖ ｎ
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