小鼠草酸钙肾结石模型建立的初步探索
金钱草对草酸钙结石小鼠红、白细胞数的影响
金钱草对草酸钙结石小鼠红、白细胞数的影响作者：李静贺绍君赵书景等来源：《赤峰学院学报·自然科学版》 2012年第17期李静，贺绍君，赵书景，魏鑫（安徽科技学院动物科学学院，安徽凤阳 233100）摘要：研究金钱草对草酸钙结石模型小鼠的红、白细胞数目的影响.方法：30只小鼠按体重相近原则分为3组，Ⅰ组作为对照组小鼠自由饮用自来水，Ⅱ、Ⅲ组作为试验组小鼠自由饮用主要由1%氯化铵和1%乙二醇配制成的成石液，每组小鼠每日灌服药液0.5mL，Ⅰ、Ⅱ组小鼠灌服生理盐水，Ⅲ组小鼠灌服金钱草水提取液.28天灌服结束后，选取每组小鼠，乙醚吸入麻醉，立即眶后静脉采血，血样放入加了抗凝剂的样品管.采集的血样用于红细胞计数、白细胞计数和白细胞分类计数.结果：与试验Ⅲ组小鼠白细胞数目和嗜中性粒细胞所占比例两项指标相比，对照组Ⅰ组白细胞数目少了3211个/μL（P＜0.01），嗜中性粒细胞所占比例增多11%（P＜0.05）；试验Ⅱ组白细胞数目少了2619个/μL（P＜0.01），嗜中性粒细胞所占比例增多17%（P＜0.05）.结论：金钱草能够通过调整小鼠内白细胞的变化来改变机体的免疫力，进而发挥抗结石的作用.关键词：金钱草；小鼠；草酸结石；红细胞；白细胞中图分类号：S853.7 文献标识码：A 文章编号：1673-260X（2012）09-0151-03随着人们生活节奏不断加快、饮食结构发生变化，结石病的发病率逐年攀升，给人们的健康带来了严重的危害.在结石病的防治方面，目前国内外大部分研究集中在对体内已形成的结石进行处理，促使其排出体外，而对于体内预防结石形成的研究报道较少.金钱草是《中国药典》收录的一味中草药.体外内药理研究表明，金钱草含有多种化学成分，具有利尿和排石作用[1].本研究采用1%乙二醇和1%氯化铵饮水诱导小鼠形成草酸钙结石模型，用金钱草为干预因素进行给药实验，检测小鼠血液红、白细胞的变化，初步探讨金钱草抑制草酸钙结石形成的干预作用，进一步探究其药用价值，为开发防治宠物尿石症的药物提供试验依据，同时也为人类防治泌尿系统结石病提供参考.1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 试验动物30只实验用昆明小鼠（45日龄），雌雄各半.1.1.2 试验药品试剂氯化铵（NH4Cl），分析纯，沪试生产，批号：F20050621；乙二醇（C2H6O2），分析纯，分子量62.07，国药集团化学试剂有限公司生产，批号：T20110608；金钱草，正品，安徽国鑫中药饮片有限公司，批号：20110601；抗凝剂EDTANa2(10%)，浓度为0.01mol/L,分析纯，国药集团化学试剂有限公司生产，批号：T20090303；瑞氏染粉、甲醛、NaCl.1.1.3 试验饲料实验鼠颗粒饲料，安徽长临河医药科技有限公司生产.1.1.4 试验主要仪器设备生物显微镜：SA3000型，北京泰克仪器有限公司制造；苏泊尔电磁炉：SDHC04-210x型，浙江苏泊尔股份有限公司；立式压力蒸汽灭菌器：LDZX-50FBS型，上海申安医疗器械厂；小鼠饲养笼具、电子天平、血细胞计数板、载玻片、染色缸、血盖片、染色架、吸管.1.2 试验方法1.2.1 动物分组实验用昆明小鼠30只，雌雄各半，45日龄，适应性饲养1w后，按体重相近原则分为对照组Ⅰ组和试验组Ⅱ、Ⅲ组.每组雌鼠和雄鼠各5只.用染色笔标记，编号.1.2.2 试验药品配制成石液：1%氯化铵和1%乙二醇溶液的配制，用电子天平称取氯化铵5g，置于500mL容量瓶中，用10mL移液管吸取5mL的乙二醇于容量瓶中，取200mL的蒸馏水注入容量瓶，摇动容量瓶使氯化铵完全溶解，用蒸馏水定容到500mL.金钱草水提取物的制备：将500g的金钱草在2.5L水中浸泡2h，进行煎煮.煎煮30min 后，过滤；药渣再次加入1.5L水煎煮20min后再次滤过.将两次滤液混合，浓缩至250mL，相当于2g/mL.配制完成后倒入药瓶并标记.瑞氏染色液：称取瑞氏染粉0.1g置于研钵中.加20mL甲醛研磨，使其溶解，然后将已溶解的染色液倒入洁净的染色玻瓶，剩下未溶解的染料再加入10mL甲醇研磨，并将溶解的染色液合并，之后每次加入10mL甲醇研磨，如此继续操作3次，直至全部染料溶解为止.在室温中保存7日后即可应用.1.2.3 动物饲养小鼠饲养在安徽科技学院动物科学学院实验动物房进行，每天固定时间换水换料，固定的时间给药，自动饮水瓶每天固定时间清洗，用具每日固定时间紫外线消毒.使用刨花作为小鼠垫料，垫料在阳光下晒干，经紫外灯照射3～4h，再装入自制的布袋中于121℃高温蒸汽灭菌20min，然后置入干燥箱内60℃鼓风干燥后备用.试验Ⅱ、Ⅲ组小鼠饮用配制好的成石液，空白对照组Ⅰ组小鼠饮用自来水，小鼠自由饮水，环境温度20～24℃，湿度50～65%，光照12～13h，每周定期称重一次.小鼠给药采用灌胃方式，空白对照组和试验Ⅰ组灌胃生理盐水0.5mL，试验Ⅱ组灌胃金钱草水提取液0.5mL（相当于1g中药），持续4w.试验过程中认真进行小鼠的一般检查，记录小鼠的精神状态、采食、饮水、活动、临床症状、环境温度与湿度及通风等情况.1.3 样品采集与处理试验结束时，小鼠禁食不禁水过夜，逐只称重，采血，血样放入加有抗凝剂的样品管，用记号笔标记.采血后的小鼠立即解剖，取心、肝、脾、肺、肾、胸腺、脾脏进行称重，记录下重量和观察情况.采集的血液分别用于红细胞计数、白细胞计数和白细胞分类计数.1.4 数据统计分析所有试验数据均采用均数±标准差（M±SD）.spss17.0统计软件进行数据分析，利用单因素方差分析各数据之间的统计学差异，P＜0.05为有统计学意义.2 结果与分析2.1 金钱草对草酸钙结石小鼠红、白细胞数，白细胞比例的影响由表1可以看出，试验Ⅲ组比试验Ⅱ组白细胞数目多出2619个/μL（P＜0.01）、嗜中性粒细胞所占比例低17%（P＜0.05），比对照组Ⅰ组白细胞数目多出3211个/μL（P＜0.01）、嗜中性粒细胞所占比例低11%（P＜0.05）.分析：金钱草能够刺激草酸钙结石小鼠的白细胞的产生，使白细胞数目增多，嗜中性粒细胞所占比例减少来改变机体的免疫力，进而发挥抗结石的作用.3 讨论血液细胞学检查分析是诊断和鉴别诊断系统疾病的主要依据，针对血液成分开展的血液学检验所获得的信息可及时了解发病原因、病情进展、疾病程度以及进行预后判断,从而为疾病的诊断、治疗及预防提供依据[2].金钱草具有缓解疼痛、减少血尿及促进排石等功效的经典中草药，国内外对于体外抑制结石形成方面已有报道[3]，而临床和体内实验研究均鲜有报道.我们通过对小鼠结石模型形成过程进行给药干预，检测试验28日龄小鼠血液红细胞数、白细胞数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞比例、嗜中性粒细胞比例的变化，初步探讨金钱草抑制草酸钙结石形成的干预作用.3.1 金钱草对草酸钙结石小鼠红细胞数的影响与其它器官相比，肾脏内更容易形成结石，从而引起炎症，使肾脏功能降低，分泌红细胞生成素减少，从而引起红细胞数目减少.本试验数据显示，试验Ⅱ组和Ⅲ组比试验Ⅰ组红细胞数目少，但对照组和试验组红细胞数目比较差异不显著（P＞0.05），说明结石在一定程度上能够引起红细胞数目减少，但这种减少变化轻微.试验Ⅲ组比试验Ⅱ组红细胞数目多，说明金钱草可以通过干扰草酸钙结石的形成，从而缓解因肾脏结石引起的炎症反应对机体造成的影响.3.2 金钱草对草酸钙结石小鼠白细胞数的影响动物机体发生炎症或其他疾病时，可引起白细胞总数的变化，因此检查白细胞总数成为辅助诊断的一种重要方法[4].体内结石的刺激容易引起炎症，反之，炎性产物的聚集也促进结石的形成.研究表明，当机体由结石造成的损伤引起炎症时机体会进行免疫反应，白细胞的数目会出现一定程度上的增多[12].本试验数据显示试验Ⅱ组和试验Ⅲ组比对照组Ⅰ组白细胞数目多，试验Ⅲ组比试验Ⅱ组白细胞数目多（P＜0.01）说明结石引起炎症反应后刺激机体白细胞大量生成，进入感染部位进行抗炎，金钱草促进草酸结石小鼠白细胞数目的增多，增强机体免疫反应，金钱草对草酸钙结石小鼠白细胞数的影响较大.3.3 金钱草对草酸钙结石小鼠淋巴细胞的影响淋巴细胞是在适应性免疫中起关键作用的白细胞.研究表明，当机体由结石造成的损伤引起炎症反应时机体会进行免疫反应，结石引起的炎症反应对机体淋巴细胞的产生影响不大[5].本试验数据显示试验Ⅱ组比对照组Ⅰ组淋巴细胞所占比例减少（P＞0.05），试验Ⅲ组和试验Ⅱ组、试验Ⅰ组相比淋巴细胞所占比例出现增大（P＞0.05），说明金钱草可以促进草酸钙结石小鼠淋巴细胞的产生，但影响不显著.3.4 金钱草对草酸钙结石小鼠嗜酸性粒细胞的影响嗜酸性粒细胞是白细胞的一种，一般认为在抗寄生虫感染及I型超敏反应中发挥重要作用.本试验中，对照组Ⅰ组和试验组Ⅱ组嗜酸性粒细胞所占比例相比较结果相等差异不显著（P＞0.05），试验Ⅲ组比试验Ⅰ组、试验Ⅱ组嗜酸性粒细胞所占比例大（P＞0.05）说明金钱草能够刺激草酸钙结石小鼠机体产生嗜酸性粒细胞但影响不明显.3.5 金钱草对草酸钙结石小鼠嗜中性粒细胞的影响嗜中性粒细胞是白细胞的一种，结石引起的炎症反应能够刺激机体嗜中性粒细胞的产生.本试验中，试验Ⅱ组比对照组Ⅰ组嗜中性粒细胞所占比例大（P＞0.05），试验Ⅲ组比试验Ⅱ组、对照组Ⅰ组嗜中性粒细胞所占比例小（P＜0.05），说明金钱草能够干扰小鼠体内草酸结石的形成过程，从而减少炎症反应过程.综上所述，金钱草对草酸钙结石小鼠白细胞影响较显著，金钱草能够刺激草酸钙结石小鼠的白细胞的产生，使白细胞数目增多，嗜中性粒细胞所占比例减少.金钱草作为经典治疗泌尿系结石的中草药，能够通过影响白细胞来改变机体的免疫力.4 结论金钱草能够刺激草酸钙结石小鼠的白细胞的产生，使白细胞数目增多，嗜中性粒细胞所占比例减少来改变机体的免疫力，进而发挥抗结石的作用.为进一步探究了其药用价值，开发防治宠物尿石症的药物提供试验依据，同时也为人类防治泌尿系统结石病提供参考.参考文献：〔1〕杨玲娟,狄留庆,方芸.中药防治泌尿系结石概述[J].中国医院药学杂志,2006,26(11):1401-1403.〔2〕中华检验医学编辑部,加强形态的临床检验专家座谈会纪要[J].中华检验医学杂志,2005,28(2):147-148.〔3〕Gohel MD,Wong SP.chinese herbal medicines and their efficacy in treating renal stones.Urol Res,2006,34,365-372.〔4〕GENG J G.Diretional migration of leukocytes: Their path ological roles in inflamm ation and strategies for development of anti-inflammatory thera-pies[J].Cell research,2001,11(2):85-88.〔5〕崔治中,崔保安.兽医免疫学[M].北京：中国农业出版社,2004.109-110.。
关于肾病小鼠模型创建的研究进展
关于肾病小鼠模型创建的研究进展引言肾脏疾病是全球范围内导致死亡和病残的主要原因之一。
为了更好地理解和治疗肾脏疾病，科学家们一直致力于肾病小鼠模型的创建和研究。
本文将介绍肾病小鼠模型创建的研究进展。
1. 肾脏疾病的重要性肾脏是人体的重要器官，负责排除废物和调节体内水平衡。
肾脏疾病包括慢性肾病、肾衰竭和肾癌等，对患者的生活质量和寿命造成了严重的影响。
因此，研究肾脏疾病的发病机制和寻找治疗方法具有重要意义。
2. 肾病小鼠模型的创建方法创建肾病小鼠模型是研究肾脏疾病的关键一步。
目前常用的肾病小鼠模型创建方法主要包括药物诱导、基因敲除和基因突变等。
- 药物诱导：通过注射特定的药物，如阿米洛利德(Amiloride)、环磷酰胺(Cyclophosphamide)等，诱导小鼠出现肾脏病理变化，模拟人类肾脏疾病的发生过程。
- 基因敲除：通过特定的基因敲除技术，使小鼠的基因发生缺陷，进而导致肾脏病变。
- 基因突变：通过诱导基因突变，使小鼠产生与人类肾脏疾病相似的表型。
3. 肾病小鼠模型在研究中的应用肾病小鼠模型在肾脏疾病的研究中发挥着重要作用。
- 发病机制研究：通过肾病小鼠模型，研究者可以深入了解肾脏疾病的发病机制，如肾小球肾炎的发生、肾肿瘤的生成等。
- 药物筛选和治疗评估：通过肾病小鼠模型，可以对新药进行评估和筛选，寻找治疗肾脏疾病的有效方法。
- 基因治疗研究：通过肾病小鼠模型，可以研究基因治疗对于肾脏疾病的疗效和安全性，为基因治疗的临床应用提供参考。
4. 近年来的研究进展近年来，肾病小鼠模型的创建和研究取得了一些重要的进展。
- 利用基因编辑技术：利用CRISPR/Cas9等基因编辑技术，科学家们成功地创建了一系列与肾脏疾病相关的基因突变小鼠模型，如肾小管上皮细胞特异性基因敲除小鼠、肾小球特异性基因突变小鼠等。
- 结合转基因技术：通过结合转基因技术和药物诱导等方法，科学家们成功地创建了一些肾脏病变特异性的小鼠模型，如IgA肾病小鼠模型、糖尿病肾病小鼠模型等。
肾茶提取物抑制小鼠草酸钙结石作用研究
肾茶提取物抑制小鼠草酸钙结石作用研究
蔡华芳;罗砚曦;蒋幼芳;钟宇森
【期刊名称】《中国实用医药》
【年(卷),期】2008(003)007
【摘要】目的研究肾茶提取物的抗结石作用.方法小鼠饲饮含乙二醇和氯化铵的水建立草酸钙肾结石模型,测定肾脏、尿液中草酸和钙的含量.肾脏病理切片观察,进行草酸钙结晶的评分.结果肾茶提取物能明显降低肾结石小鼠尿液及肾组织中草酸和钙含量,减少草酸钙结晶在肾组织中的沉积.结论实验结果提示,肾茶提取物可能通过降低尿液草酸钙浓度,抑制结晶在肾脏的沉积而发挥作用.
【总页数】2页(P1-2)
【作者】蔡华芳;罗砚曦;蒋幼芳;钟宇森
【作者单位】310013,杭州,浙江省医学科学院药物研究所;310013,杭州,浙江省医学科学院药物研究所;310013,杭州,浙江省医学科学院药物研究所;310013,杭州,浙江省医学科学院药物研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.夏枯草提取物抑制大鼠肾草酸钙结石形成作用的研究 [J], 何彦丰;高锐;江涛;林曦;毛厚平
2.傣药嘿盖贯不同提取物对小鼠耳廓肿胀抑制作用的研究 [J], 张娅; 项朋志; 高敏;
赵远; 何鹏飞
3.太子参参须提取物对免疫抑制小鼠免疫保护作用的研究 [J], 衣伟萌;陈赛红;闵思明;陈俊宇;甘思言;黄一帆;张炎达;马玉芳
4.车前子提取物抑制扑热息痛诱导小鼠肝损伤的作用研究 [J], 代国年;王桂荣;王萌;赵改红;杜丽娟;豆艳丽;叶得河
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草酸钙型肾结石体外模型的研究进展
草酸钙型肾结石体外模型的研究进展泌尿系统结石是生物体内病理矿化的产物，是一种世界范围的常见病、多发病，其发病率呈上升趋势[1]。
泌尿系统结石中以草酸钙结石最多且最常见[2]。
另外，肾结石的形成是一个缓慢的矿化生长过程，由于人体内环境非常复杂，很难在原位进行观测。
因此，体外模拟成为研究其形成机理的重要手段。
本文就近年来草酸钙型肾结石体外模拟模型现状进行综述。
1无籽晶凝集反应系统白铁男等[3]采用无籽晶凝集反应系统及余志运等[4]采用体外45Ca-CaCl2示踪的草酸钙晶体生长动力学方法以及叶章群等[5]采用45Ca-CaCl2示踪的草酸钙晶体生长动力学模型[6]，能在较短的时间内观察到草酸钙晶体生长和凝集的变化，缩短了实验观察的时间。
2人体玻璃肾孟尿石生长模型叶章群等[7]自制了玻璃肾盂模型模拟人体内尿石生长过程，1个月后，结石有不同程度的增长，但所需实验时间较长。
3 Robertson籽晶粒度法尹春萍等[8]采用无籽晶粒度法，研究泽泻水提取液在体外对草酸钙结晶生长和聚集的影响。
结果表明，该系统下，能生成以一水草酸钙为主的体外模型。
4 凝胶体系模拟系统凝胶作为一种中性介质，是体外研究生物分子结晶和生物矿化的一种理想介质[9]。
杨德同等[10]通过采用明胶凝胶体系中研究了草酸钙形成周期沉淀的规律以及探索了环状周期沉淀生成的条件，发现间隔系数随CaCl2和Na2C2O4浓度升高而减少。
欧阳健明等[11]通过采用双扩散法，用硅酸钠等物质制成U形管凝胶，再在U形管左右两侧分别加入氯化钙溶及草酸，形成硅酸钠凝胶体系模拟系统。
岳文谨等[12]以琼脂为介质，采用双向扩散法，模拟肾结石体外模型，模拟草酸钙尿结石的形成。
欧阳健明等[13，14]采用硅胶凝胶体系模拟系统模拟肾结石体外模型，观察晶型的变化以及凝集的速度，有利于探讨草酸钙晶体结石形成的影响因素。
通过采用不同基质的凝胶体系模拟系统，均能以生成一水草酸钙为主的体外模型。
刺苋根提取物化学成分分析及其排石活性初探
刺苋根提取物化学成分分析及其排石活性初探目的：对刺苋根分部位成分进行分析及对正丁醇提取部分进行排石活性研究。
方法：采用不同极性溶剂对刺苋根提取后进行成分分析；选取正丁醇提取部位，对乙醛酸诱导的C57BL/6小鼠连续灌胃5d后，取心脏血测血浆肌酐（CRE）及血浆尿素氮（BUN）浓度；取左侧肾脏测肾组织钙含量。
结果：刺苋的正丁醇部位提取物，在25mg/ml及50mg/ml两个剂量水平均能明显降低肾脏组织的钙含量，确实具有明确的排石效果；同时能明显降低血浆CRE及BUN含量，能够明显恢复肾脏排泄功能。
结论：刺苋对乙醛酸所致的小鼠草酸钙结石模型有明确的排石活性。
标签：刺苋根；乙醛酸；C57BL/6小鼠；排石Abstract：Objecive：This study was aimed to analyze the chemical compositions of Amaranthus spinosus Linn. extracts obtained using various solvent systems. N-butanol extract was further evaluated for the discharging effect of kidney calculus. Methods：Amaranthus spinosus Linn. extracts were obtained with solvent systems of different polarity and subject to chemical composition analysis. N-butanol extract was selected and administered daily by oral gavage to C57BL/6 mice for five continuous days. At the time mice were removed from the study，the heart blood plasma was collected for creatinine （CRE）and blood urea nitrogen （BUN）level，and the left kidney tissue was collected for Ca2+ concentration. Results：N-butanol extract of Amaranthus spinosus Linn. clearly decrease the calcium level in kidney tissue at 25mg/ml and 50mg/ml doses，demonstrating the calculus discharging effect. Meanwhile，the creatinine （CRE）and blood urea nitrogen （BUN）levels were also clearly decreased，indicating the recovery of kidney function. Conclusion：The result clearly indicates n-butanol extracts of Amaranthus spinosus Linn. demonstrate discharging effect of kidney calculus in glyoxylic acid-induced calcium oxalate calculus mice model.Keywords：Amaranthus spinosus Linn.；glyoxylic acid；C57BL/6 mice；discharging effect of urinary calculus刺苋为苋科苋属植物刺苋（Amaranthus spinosus L）的全草，分布于华东、中南、西南、陕西等地。
肾结石成因的相关研究
肾结石成因的相关研究摘要】目的：了解肾结石患者肾脏是否存在氧化应激损伤，探讨泌尿系结石形成过程中的促进因素。
方法：比较肾结石患者和健康人24H尿液生化以及尿液中的单核细胞驱化因子（MCP-1）、生长转化因子（TGF-β）和脂质过氧化产物8-异前列腺素（8-IP）、丙二醛（MDA）的含量。
结果：与健康对照组比较，结石组尿液中细胞因子MCP-1、TGF-β和脂质过氧化产物 8-IP、MDA无明显差别，无统计学差异（p>0.05）,而24H尿钙、磷排泄量增加，p<0.05，24H 尿镁、枸橼酸排泄量减少，p<0.05。
结论：肾结石患者肾脏不存在氧化应激损伤，氧化应激损伤可能不参与肾结石形成过程中集聚和生长阶段,高钙、磷排泄和结石抑制因子减少可能是肾结石集聚和生长的促进因素。
【关键词】肾结石氧化应激损伤细胞因子脂质过氧化【中图分类号】R692.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）08-0012-02泌尿系结石形成过程可分为：成核，集聚，生长三个阶段。
在这三个阶段中，有那些因素发挥作用？本研究通过检测对比肾结石患者和健康人24H尿液生化和尿液中脂质过氧化产物8-IP、MDA和细胞因子MCP-1、TGF-β的含量，明确肾结石患者肾脏是否存在氧化应激损伤，探讨肾结石形成集聚和生长阶段中主要由那些因素发挥作用，进而为防止结石发展以及预防复发提供依据。
1 材料与方法1.1临床资料结石组来为2012年3月1日-2012年10月30日在广西医科大学第一附属医院住院泌尿系结石患者，排除存在泌尿系感染，肾功不全的患者，共45例，男20例，女25例，年龄：44.77±12.2岁。
对照组为住院患者家属，体检无泌尿系结石和其他泌尿系疾病，不存在泌尿系感染和肾功不全，共45例，男27例，女18，年龄45.34± 11.7。
检测两组血生化和24H尿液生化。
1.2血生化及24 h尿液分析统一生化仪器测定患者空腹血液生化指标。
草酸钙型肾结石小鼠模型的研究
・ ２ ２ ｌ ３・
草 酸钙 型 肾结石 小 鼠模 型 的研 究
曾春 晖 李先梅 蔡妮 娜 谭娥 玉 覃 文慧 韦乃球 秦 树森 马 雯芳 杨 柯
（ １广西 中 医药 大 学 药 学 院 ， 南 ５ ３ ０ ０ ０ １ ； ２广 西 钦 州 市卫 生 学 校 ， 钦州 ， ５ ３ ５ ０ ０ ０； ３南 宁 市 中 医 医 院 ， 南宁， ５ ３ ０ ０ ０ １ ；
模 型。
关键词
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
草 酸钙型肾结 石； 小 鼠； 动物模 型
Ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｏ ｆ Ｃａ ｌ ｃ ｉ ｕ ｍ Ｏｘ ａ ｌ ａ ｔ ｅ Ｃｒ ｙ ｓ ｔ ａ ｌ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｉ ｎ Ｍｉ ｃ ｅ
Ｃ ａ ｉ Ｎｉ ｎ ａ ¨
４江门市 五邑中医院， 江ｆ 】 ， ５ ２ ９ ０ ０ ０ ； ５桂林市妇女儿童医院 ． 桂林 ， ５ ４ １ ０ ０ １ ）
摘要 目的 ： 摸 索简单 易行的方法诱 导草酸钙型 肾结石 小鼠模 型， 为后续 药效学研 究提供 可靠的动物模 型。方法 ： 将健康
小鼠分为正常组（ Ａ组） 、 模 型组（ Ｂ组 ） 、 模 型组 （ Ｃ组 ） ， Ｂ组灌 胃给 予诱 石 荆（ 含０ ． ７ ５ ％ 乙二 醇和 ０ ． ７ ５ ％ 氯化 铵 的水溶
出现 不同数量的动物死亡 ， 且 Ｃ组 死亡率高于 Ｂ组 ； Ｂ组和 Ｃ组 小鼠尿液 中草酸 、 钙 浓度均 明显 高于 Ａ组 （ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ． Ｂ
组尿 草酸 浓度明显 高于 ｃ组（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５～ ０ ． Ｏ Ｉ ） ， 而尿钙浓度 明显 低 于 ｃ组 （ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ； 病理 学结果表 明 ， Ａ组 小鼠 肾小管 未见扩张和草酸钙晶体沉积 ， Ｂ组 、 ｃ组 小鼠肾组织均 出现肿胀 ， 肾小管管腔明显扩张 、 变性 、 坏死 ， 肾问质有明显慢性 炎性
肾茶提取物抑制小鼠草酸钙结石作用研究
肾茶提取物抑制小鼠草酸钙结石作用研究【摘要】目的研究肾茶提取物的抗结石作用。
方法小鼠饲饮含乙二醇和氯化铵的水建立草酸钙肾结石模型，测定肾脏、尿液中草酸和钙的含量。
肾脏病理切片观察，进行草酸钙结晶的评分。
结果肾茶提取物能明显降低肾结石小鼠尿液及肾组织中草酸和钙含量,减少草酸钙结晶在肾组织中的沉积。
结论实验结果提示，肾茶提取物可能通过降低尿液草酸钙浓度，抑制结晶在肾脏的沉积而发挥作用。
【Abstract】Objective To study the effects of orthosiphon extract on inhibiting renal calculus.Methods The mice were fed ethylene alcohol and ammonium chlorideto cause renal calculus.The concentrations of calcium and oxalate acid in urine and kidney were determined in mice of kidney stone.The renal sections were observed to score calcium oxalate crystallization.Results Orthosiphon extract groups demonstrated obvious decrease concentration of oxalic acid and calcium in urine and kidney,and reduce calcium oxalate deposition in kidney.Conclusion The results suggest the effect of orthosiphon extract on inhibiting renal calculus in mice.【Key words】Orthosiphon;Renal calculus；Calcium oxalate;Ethylene alcohol肾结石是泌尿系统常见疾病，发病率为3．4%～4．8%，发病率随年龄增加，危险性也增大。
实验动物尿路结石的体内外模型.
实验动物尿路结石的体内外模型作者：彭婕,孙西钊,葛卫红,方芸作者单位：南京大学医学院附属鼓楼医院：1. 临床药学室；2. 泌尿外科，江苏南京 210008【关键词】实验动物尿路结石模型尿石症(urinary calculus)是一种常见的泌尿系统疾病，是肾、输尿管、膀胱及尿道结石的总称。
在过去的20年中，尿石症的发病率逐年上升[12]。
尿石症引起的病理损害主要有直接损害、梗阻和感染，三者互为因果，促使病变发展，最终破坏肾组织，损害肾功能，甚至造成肾功能衰竭。
因此，尿石症是一种严重危害人类健康的常见病、多发病。
随着对尿石症研究的深入，各种利用实验动物的体内和体外尿石模型也逐渐发展起来。
尿石实验模型不但可以深入了解尿石的形成过程和机理，而且可以筛选抗尿路结石的中西药物，确认其药理作用和机制。
因此，设计和建立尿路结石的动物及体外模型，无疑为探讨尿路结石的发病机理、寻找有效防治尿路结石的药物奠定良好的基础。
1 食饵性尿路结石的动物模型尿路结石中最常见的是含钙结石(作为草酸盐或磷酸盐沉淀)，占尿石症的75%～85%，而草酸钙结石又占含钙结石的92%[35]。
因此，草酸钙结石模型是最常用、也是研究最为广泛的动物结石模型。
草酸钙结石动物模型按病因可分为高钙尿、高草酸尿、维生素缺乏等。
从使用动物的种属上分，有大鼠和小鼠模型。
1.1 草酸钙结石模型草酸钙结石动物模型常以乙二醇为诱石剂。
乙二醇是草酸的前体物质，在体内可转化为草酸，从肾脏分泌排泄，辅以氯化铵酸化尿液，有利于草酸钙结晶。
1.1.1 大鼠草酸钙结石模型 De Water等[6]用0.5%、0.75%、1.0%、1.5%等不同剂量的乙二醇作为诱石剂，发现0.5%剂量组大鼠肾组织几乎无晶体形成，而其他组草酸钙沉积显著增加，故认为乙二醇饮水诱石最低浓度应为0.75%。
Pragasam V[7]和Marengo SR[8]亦使用0.75%乙二醇饮水分别于28d和8周成功建立了大鼠草酸钙结石模型。
夏枯草对草酸结石小鼠钙代谢及肾脏组织结构的影响
司产 品 ； 钙测定试 剂盒 （ 批号 ２ ０ １ ２ ０ ４ １ ３ ） 、 磷 测 定 试
剂盒（ 批号 ２ ０ １ ２ ０ ４ １ ８ ） 、 用 于 测 定组 织 蛋 白的 考 马斯 亮 蓝试 剂盒 （ 批号 ２ ０ １ ２ ０ ４ １ ５ ） ， 南京 建 成 生 物 工程 研
１ ． １ ． ２ 药 品 与 试 剂 氯 化 铵 （ ＮＨ Ｃ １ ） ， 批号：
Ｆ ２ ０ ０ ５ ０ ６ ２ １ ， 分 析 纯 ，乙 二 醇 （ Ｃ ２ Ｈ Ｏ ） ，批 号 ：
Ｔ２ ０ １ １ ０ ６ ０ ８ ， 分 析纯 ， 均 为 国 药集 团化 学 试 剂 有 限公 司产 品 ； 夏枯 草 ， 安徽 省福 春 堂 中药饮 片有 限公 司产
品（ 经安徽 科 技 学 院食 品药 品学 院 时 维 静 教 授 鉴定 为正 品） ， 产地 ： 湖南 ， 批号 ２ ０ １ １ ０ ６ ３ ； 生 化 分 析 试 剂 盒： 钙试 剂 盒 （ 批号 １ ４ ２ ２ １ １ ０ １ ４ ） 、 无 机磷试剂盒 （ 批 号 １ ４ ２ ４ １ １ ０ １ ３ ） ， 深 圳迈 瑞 生 物 医疗 电子 股 份 有 抑 制 肿 瘤 生 长 方 面 广 泛 应 含 量 １ ． ４ ３ ％， 磷含量 ０ ． ８ ７ 。小 鼠饲 养 环境 温 度 用【 ３ ］ 。Ｕｔ ｓ ｕ ｎ ｏ ｍｉ ｙ ａ Ｍ 等［ ４ 首 次发 现 在 体 外 模 拟 试
２ Ｏ℃ ～ ２ ４℃ ， 湿度 ５ Ｏ ～６ ５ ， 光照 １ ２ ｈ ～１ ３ ｈ 。
链荚豆提取物对草酸钙肾结石损伤的保护作用
链荚豆提取物对草酸钙肾结石损伤的保护作用陈璐;陈兰妹;蔡小禧;柯俊芳;吴琦;唐灵芝【期刊名称】《科技视界》【年(卷),期】2024(14)1【摘要】目的:探究链荚豆正丁醇提取物对草酸钙型肾结石潜在的治疗作用。
方法:腹腔注射80.mg/kg体重乙醛酸建立肾结石小鼠模型。
设置阴性对照组、模型组、溶剂组、阳性对照药组、链荚豆正丁醇提取物高剂量与低剂量组。
实验期间观察记录小鼠状态,实验结束后,收集血浆及肾组织样本。
肾组织切片行HE染色,定性观察肾结石形成程度及组织病理变化;测定血浆肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及肾组织钙含量,定量评价小鼠肾脏排泄功能变化。
以7.5.mmol/L.Ca2+干预HK-2细胞建立高钙损伤细胞模型,同步给与链荚豆正丁醇提取物干预24.h,以CCK8法测试细胞存活率,评价链荚豆提取物对高钙诱导的人肾小管上皮细胞损伤的保护作用。
结果:链荚豆提取物可改善肾结石模型小鼠的精神状态,在高、低两个剂量水平均能改善小鼠肾组织形态与功能变化,且可不同程度地降低血浆Cr与BUN水平,降低小鼠肾组织钙的质量分数,存在较为明确的对模型小鼠肾脏功能的改善作用;在受试浓度下,可将模型细胞的存活率从78.61%提高至91.10%,也表现出对高钙离子浓度诱导的人肾小管上皮细胞损伤明显的保护作用。
结论:链荚豆正丁醇提取物对草酸钙型肾结石损伤的动物实验模型和细胞实验模型均具有明确的保护作用,对草酸钙型肾结石具有潜在的治疗意义。
【总页数】5页(P20-24)【作者】陈璐;陈兰妹;蔡小禧;柯俊芳;吴琦;唐灵芝【作者单位】厦门医学院药学系【正文语种】中文【中图分类】R69【相关文献】1.镰形棘豆提取物对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及机制2.老鸦珠提取物对草酸钙型肾结石形成的抑制作用研究3.刺苋根提取物对草酸钙损伤HK-2细胞保护作用研究4.刺苋根提取物对草酸钙损伤HK-2细胞保护作用研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
浅谈草酸钙肾结石在大鼠实验领域的研究进展
浅谈草酸钙肾结石在大鼠实验领域的研究进展泌尿系结石是泌尿系的常见病，严重威胁人类健康，确切研究其发病机制因素有着重要的意义。
目前国内、外研究学者从大鼠实验领域做了大量关于草酸钙肾结石基础研究，包括造模、抑制药物、治疗药物等，抗氧化作用机制是目前研究一大热点。
标签：草酸钙肾结石；大鼠实验；研究泌尿系结石是泌尿系的常见病。
结石种类中，以代谢性结石最为常见，草酸钙结石约占70%～80%。
酸钙结石形成原因是由于体内或肾内代谢紊乱，尿酸排泄增加，大量草酸与钙结合而导致[1]。
确切研究大鼠泌尿系草酸钙结石的形成原因过程、以及机制，对于人类结石的预防保健、疾病诊治有着非常重要的意义。
本文将就目前泌尿系草酸钙肾结石在大鼠实验领域研究进展进行总结描述。
1大鼠草酸钙肾结石模型建立动物实验模型是研究尿石形成及防治结石药物筛选的重要手段，模拟研究人类尿石发病的原因和评价解释生长[2]，研究促进或抑制因子在尿石形成过程中的作用。
许多研究表明肾小管细胞损害利于晶体滞留和生长[3]。
因此，设计肾结石动物模型不仅要能形成高草酸尿，而且要使草酸钙晶体滞留在肾脏。
1978年Robertson提出了尿石形成6项危险因子：尿钙、尿草酸、尿pH、尿酸、尿量及尿酸性黏多糖[4]。
草酸钙结石，危险因子主要为尿钙和尿草酸。
目前研究的诱石法主要集中在增加尿草酸排泄量和肾毒性药物上，相对忽视了增加尿钙排泄这一机制[5-6]。
国内关于肾脏草酸钙结石的造模传统采用0.75%乙二醇饮水8 w。
乙二醇是草酸的前体，乙二醇进入体内后变成羟乙酸，后者既可在羟乙酸氧化酶的作用下直接转化成乙酸，也可通过乳酸脱氧酶的催化转化成乙醛酸，乙醛酸又可在非酶作用下直接转化成草酸，生成的草酸从肾脏分泌排泄，增加尿液中的草酸浓度[7]。
正常情况下体内尿浓度中尿钙为草酸的5～10倍，因此，尿草酸浓度的增加对于草酸钙结晶的生成要明显高于尿钙浓度的增加。
乙二醇诱导的大鼠肾结石模型草酸钙晶主要在肾髓质锥体集合管和肾乳头处生成晶体，符合人类肾结石生成的病理过程，研究学者通过肾脏组织切片，显微镜下观察草酸钙结晶数量，即可得到造模效果。
NRF2HO-1通路介导复方金钱草对小鼠草酸钙结晶肾损伤的实验研究的开题报告
NRF2HO-1通路介导复方金钱草对小鼠草酸钙结晶
肾损伤的实验研究的开题报告
该研究旨在探讨复方金钱草对小鼠草酸钙结晶肾损伤的保护作用及
其机制。
草酸钙结晶肾损伤是一种常见的肾脏疾病，常见于肾结石患者，其发病机制尚不完全清楚。
复方金钱草是一种草本植物，具有抗炎、抗氧化、解痉等多种药理
作用。
研究表明，复方金钱草可以通过激活 NRF2HO-1 通路来发挥其保
护作用。
因此，本研究将针对复方金钱草的这一特性，探究其在草酸钙
结晶肾损伤中的应用价值。
本研究将选用小鼠作为研究对象，并通过建立草酸钙结晶肾损伤小
鼠模型来模拟人体疾病。
然后将小鼠随机分为对照组、模型组和复方金
钱草治疗组，观察小鼠肾脏形态学和生化指标的变化，以评估复方金钱
草的保护作用。
同时，本研究还将通过实验室技术手段如免疫荧光、Western blotting 等，对 NRF2HO-1 通路进行检测，以了解复方金钱草的保护作用是否是通过 NRF2HO-1 通路来实现的。
通过本研究，我们将进一步明确复方金钱草在草酸钙结晶肾损伤中
的保护作用，增强对其机制的了解，并为其在临床治疗中的应用提供实
验依据，具有一定的研究价值和临床应用前景。
SAHA对草酸钙肾结晶小鼠肾功能的影响
KEY WORDS CTStalizatiox of calcium oxalate Histoxe deacetylase indiditor SAHA Oxidative stress The apoptosis of renal tuUular cells
肾结石是一种常见病、多发病，全球肾结石的发 病率逐年升高。在西方国家，约10% ~12%的男性和 5% ~6%的女性承受肾结石带来的痛苦，在中国人群 中肾结石发病率约6. 4% m2] o肾结石可引起急性肾 损伤，增加慢性肾脏病及肾脏肿瘤发生的风险，还给 患者带来昂贵的经济负担®5]o故解决肾结石这一
ABSTRACT Objective: To estaPUsh calcium oxalate 0X10 costal mice 1^0X61, and te explore the effeei of SAHA on 0X10 functiou. Methods：Twenty four C57BL/6 male mice were randomly divideP inte four groups： blang coutroi group (withoxi any treaiment) , moPct group ( NS group) , interventiox group ( DMSO , SAHA/DMSO group) ; NS group: 5。mg/kg oormat saUoe (NS) + 102 mg/kg glyoxylate; DMSO group: 52 mg/kg DMSO + 102 mg/kg glyoxylate; SAHA group: 52 mg/kg SAHA/DMSO + 102 mg/kg glyoxylate; experimentai group: NS, DMSO, SAHA in aPvadce 52 mg/kg was injecteP inWaperitoxeallp, and 102 mg/kg glyoxylate was injecteP inWaperimxeally sin hours later in alt three groups. Alt mice were gilleP 7 daps nter coxtieuoxs aPminisWagox. Under lighi microscope, the distridutiox of calcium oxalate crystal in renat tissee of mice in each group was oPserveP, and the percentage of calcium salt depositiox was compared , Serum creatinioc ( Scr) , bloob urea nitropeo ( BUN) , urine injury factor -1( KIM - 1) , urT oary calcium/creatinioc ratio , catalase (CAT) and vitamin E (VE) in gidoep were detecteP , TUNEL stainino and semi quantitative analysis were useP te compare the expression of apoptotic cello io renal tubules. Respltt ： ： 1 ) SAHA rePuceP the formatiox of calcium oxalate renal CTStal； (2) SAHA rePuceP the probuctiox of Scr, BUN and uriov KIM - 1 in moPci mice; (3) SAHA repulateP oxidative stress； (4)The apoptosis of renal tuUular cello in SAHA group mice decreaseP. Conclcsion:The resuUs of this stupp confirmeP thai SAHA can impTve the renal fuvetiox of calcium oxalate cTStaPizeP mice, rePuce the apoptosis of renal tubular ceXs.
草酸钙结石的肾脏模型
草酸钙结石的肾脏模型草酸钙结石的肾脏模型前言目前主要有两种模型来描述草酸钙结石的在尿路中的始动过程。
Finlayson 和Reid将其命名为游离颗粒型，固定颗粒型。
游离颗粒型学说认为结石形成的始动因素是由于管液中的草酸钙超饱和，从而在肾脏中的一个位点，草酸钙的核心开始形成。
当草酸钙的核心通过肾脏的其它部分时，它们可以生长，并可能聚集。
如果这个过程发生的足够的快，关键的一些颗粒就会形成，而且达到足够的大，在肾集合管内受挤压前，就可以在肾小管的一些狭窄处停留。
一旦颗粒停留就会持续生长，直到最后结石的形成，并且产生一定的临床症状。
1978年，Finlayson 和Reid 利用简式的肾脏数学模型进行计算，计算认为在尿通过肾脏的短时间内，上述的过程不可能发生。
根据他们的模式，他们认为单一结晶在集合管内受压前，没有足够的时间可形成足够大的颗粒而停留。
相反，他们建议使用改良的模型。
他们认为很小的CaOx的核的形成是因为小管液中的CaOx过度的超饱和，由于结晶的砂粒的作用或者是感染、或其它原因的细胞的坏死引起的肾上皮细胞一些位点的损伤，这个损伤点就成为了小管液中的CaOx 过度的超饱和所析出来的结晶核的粘附点。
他们将此称为结石形成的固定颗粒模型。
固定颗粒模型学说在此后的近二十年中并没有得到挑战，在此间，固定颗粒模型学说成为刺激人们对CaOx结晶在各种肾细胞培养的单分了膜上完全的、新领域、涉及到结晶的成核、生长的研究方面的来源。
1994年，Kok和Khan重新评估了Finlayson 和Reid的结石形成模型并且纠正了一些原始模型中的错误。
Kok和Khan又结合了一些新的关于肾小管管径和通过小管尿流率的证据。
基于这些修改的模型，他们的结论是：原则上他们依然同意Finlayson 和Reid的发现，但他们又认为，在特定的情况下，当CaOx结晶在肾脏内始动后，通过剩余的肾小管时，结晶的粘附可以产生，此时游离颗粒模型也是可行的。
被动吸烟对小鼠草酸钙型肾结石模型影响的研究
被动吸烟对小鼠草酸钙型肾结石模型影响的研究蒲唯高;黄珍;黄东东;扈秀生;蒲小勇;陈纯静【期刊名称】《激光生物学报》【年(卷),期】2018(027)004【摘要】本研究旨在探索被动吸烟对小鼠肾草酸钙结石模型形成的影响.将55只小鼠随机分为正常对照组(A组)、模型组1(B组)、模型组2(C组)、模型3组(D 组).A组正常对照组予以单纯生理盐水灌胃;B组诱石+被动吸烟组予以诱石剂灌胃(含0.75％乙二醇、0.75％氯化铵),同时将小鼠放入吸烟染毒箱建立被动吸烟模型;C组单纯诱石灌胃组予以单纯诱石剂灌胃;D组单纯被动吸烟组予以等量生理盐水灌胃的同时将小鼠放入吸烟染毒箱建立被动吸烟模型.实验期间观察小鼠的进食进水情况、活动情况、生命体征及个体体毛等变化.分别于造模7、14、21、28 d 收集尿液进行尿草酸和尿钙含量的测定;于造模结束后采集小鼠血清比较血肌酐浓度;剖取肾脏称量并计算肾脏系数.造模3 d后,B、C两组小鼠出现爬行困难,部分灌胃后出现深大呼吸,活动减弱,食欲减退,体毛无光泽,B组小鼠较C组小鼠表现更明显:造模7 d后,B、C组开始出现不同数量的动物死亡,且B组死亡率明显高于C组;造模21天后,D组小鼠也开始出现死亡,但A组小鼠实验中均未观察到死亡.不同时间点比较,B、C组小鼠尿草酸、尿钙、血肌酐浓度均高于正常对照A组和单纯被动吸烟D组(P<0.05),同时发现,B组(诱石灌胃+被动吸烟)尿草酸、尿钙浓度均明显高于C组(诱石灌胃)(P<0.05).与A组和D组比较,模型组B、C组小鼠肾脏系数均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05).结果表明,被动吸烟可促进小鼠草酸钙型肾结石的形成.【总页数】5页(P381-384,封3)【作者】蒲唯高;黄珍;黄东东;扈秀生;蒲小勇;陈纯静【作者单位】长沙医学院临床医学系, 湖南长沙410000;长沙医学院临床医学系, 湖南长沙410000;长沙医学院临床医学系, 湖南长沙410000;长沙医学院临床医学系, 湖南长沙410000;广东省人民医院, 广东省医学科学院泌尿外科,广东广州510080;长沙医学院病理生理学教研室, 湖南长沙410000【正文语种】中文【中图分类】R692.4【相关文献】1.草酸钙型肾结石小鼠模型的研究 [J], 曾春晖;李先梅;蔡妮娜;谭娥玉;覃文慧;韦乃球;秦树森;马雯芳;杨柯2.MG132对草酸钙肾结石模型TGF-β1及EMT的影响 [J], 王锐;刘亚东;于时良;任昌;安瑞华3.敦煌医方瞿麦汤对草酸钙型肾结石模型大鼠肾功能的影响及可能机制 [J], 安方玉;颜春鲁;刘永琦;赵文坤;牛彦强;刘明月;辛阳;杨晓蓉4.被动吸烟对小鼠草酸钙型肾结石模型影响的研究 [J], 蒲唯高; 黄珍; 黄东东; 扈秀生; 蒲小勇; 陈纯静5.白藜芦醇介导Nrf2/ARE信号通路对大鼠草酸钙肾结石模型的抗氧化损伤作用[J], 阿不都赛买提·艾力;辛瑞平;阿斯木江·阿不拉;郭明月;关永志;陈庆虎;木拉提·马合木提因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于单细胞测序的草酸钙肾结石大鼠髓袢细胞亚群基因表达谱特征分析
基于单细胞测序的草酸钙肾结石大鼠髓袢细胞亚群基因表达谱特征分析许婷;张颖;邓琼;梁辉;王铸【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》【年(卷),期】2024(34)2【摘要】目的:探讨草酸钙肾结石大鼠模型肾脏组织髓袢细胞亚群基因表达谱特征。
方法:应用乙二醇氯化铵诱导法构建草酸钙肾结石大鼠模型,通过Von Kossa′s组织染色验证模型构建成功。
单细胞测序方法鉴定髓袢细胞,对比分析草酸钙肾结石大鼠模型肾脏组织髓袢细胞亚群基因表达谱特征,应用生物信息学方法进行差异表达基因的GO、KEGG以及GSEA富集分析。
结果:相较于对照组,实验组大鼠肾脏组织中发现钙盐沉积区域呈黑色或棕黑色,表明草酸钙肾结石大鼠模型构建成功。
单细胞测序分析发现,在实验组髓袢细胞亚群共有差异表达基因3 510个,其中880个表达上调,2 630个表达下调;其中LOC499584,白介素7(interleukin 7,Il7),双特异性磷酸酶1(dual specificity phosphatase 1,Dusp1)以及基质Gla蛋白(matrix Gla protein,Mgp)表达上调最为显著;HORMA结构域蛋白质2(HORMA domain containing 2,Hormad2),LOC361914,JUN二聚体蛋白2(Jun dimerization protein 2,Jdp2)以及生长抑素-B和血小板反应蛋白1型结构域蛋白(somatomedin-B and thrombospondin type-1 domain-containing protein,Sbspon)表达下调最为显著。
KEGG分析发现实验组髓袢细胞亚群氧化磷酸化、代谢途径、丙酸代谢、自噬、溶酶体以及胞吞作用等信号通路发生显著改变。
结论:本研究首次揭示了草酸钙肾结石大鼠模型肾脏组织髓袢细胞亚群基因表达谱特征,为肾结石的形成及其介导的肾损伤研究提供了一定的参考依据。
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小鼠草酸钙肾结石模型建立的初步探索摘要】目的探索一种简便、成石效果好的小鼠草酸钙肾结石模型。
方法采用1%乙二醇自由饮水法增加小鼠尿草酸和/或腹腔注射10%葡萄糖酸钙增加尿钙排出量，比较小鼠24小时尿草酸（O x）、尿钙（C a2+）、过氧化氢H2O2、乳酸脱氢酶(L D H)、丙二醛（M D A）含量，观察肾草酸钙结晶形成情况，免疫组化法观察CD68蛋自在肾脏中的表达位置并用灰度值法计算其表达水平，评价小鼠草酸钙肾结石造模效果。
结果单独诱导高草酸尿或高钙尿的小鼠肾内氧化应激指标增高和巨噬细胞浸润增多但未见结晶，同时介导高草酸尿和高钙尿的小鼠肾内氧化应激损伤指标增高和巨噬细胞浸润增多且有较多结晶。
结论单独诱导高草酸尿和高钙尿不足以使小鼠肾内生成结晶，同时诱导高草酸尿和高钙尿成石效果好，巨噬细胞可能在肾结晶形成和/或清除中起到重要作用。
【关键词】草酸钙肾结石动物模型小鼠【中图分类号】R692.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）05-0078-02泌尿系结石草酸钙大鼠动物模型肾结石是一种常见疾病，其中草酸钙结石居多。
因此实验动物草酸钙结石模型是肾结石基础与临床研究的重要方法。
目前国内主要通过乙二醇饮水法介导大鼠草酸钙肾结石模型[1]。
用小鼠诱导草酸钙肾结石模型比较少见。
目前认为，小鼠较之于大鼠肾结石形成有较高的耐受性，草酸钙晶体形成几天后即被清除[2]。
因此建立一个成石效果好，且简便，经济的小鼠草酸钙肾结石模型并研究小鼠肾内一些结石相关的指标变化及结晶清除机制，对研究肾结石的形成机制和指导临床治疗有重要的意义。
1 材料1.1 试剂与仪器乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、过氧化氢（H2O2）测试盒，南京建成生物工程研究；C D68兔抗小鼠多克隆抗体、即用型S A B C免疫组化染色试剂盒、D A B显色试剂盒，北京博奥森生物技术有限公司；乙二醇(分析纯，天津市化学试剂一厂)。
2550 型紫外一可见光分光光度计(日本岛津公司)；病理图像分析仪（德国莱卡公司），离子色谱仪（德国D I O N E X公司）；自动生化分析仪（美国雅培公司）；LAMB DA BIO 20双光束紫外分光光度计（美国PE公司）；7170A自动生化分析仪（日本日立公司） J A l203型电子天平(上海天平仪器厂)。
1.2 动物昆明小白鼠40只，雄性，体重18～23 g，由广西医科大学实验动物中心提供。
2 方法2.1 动物分组及给药方法动物饲养1周后，选体重20-25 g 昆明小白鼠随机分为4组，每组10只，正常颗粒饲料喂养。
造模A组：1％乙二醇饮水；造模B组：1％乙二醇+10％葡萄糖酸钙， ip 2mL/kg.d；造模C组：10％葡萄糖酸钙，ip2mL/kg.d 造模D组：正常饮水。
各组小鼠均在相同的条件下饲养。
造模共8周。
2.2 观察指标及检测方法实验结束前用代谢笼收集并测24 h尿量以及用于检测尿草酸（离子色谱法）、尿钙（自动生化分析）、过氧化氢、乳酸脱氢酶、丙二醇的浓度。
脱颈椎处死小鼠，切取小鼠的双肾，观察其外观改变，右肾置10％中性福尔马林中固定，作常规HE石蜡切片和Von Kossa染色及免疫组化，左肾精密称重后计算各组大鼠的左肾/体重比值。
2.3统计学分析实验数据以X±S 表示，用SPSS16.0统计软件分析。
计量资料组间比较用One．Way ANOVA方差分析，LSD用于比较组内差别。
P<0.05为差异有统计学意义。
3 结果3.1 动物存活情况各组至实验结束均无动物死亡。
3.2 各组小鼠24h 尿草酸、钙离子、左肾/体重比值与D组比较，饮用了乙二醇的A、B组尿草酸排泄量显著增加，但两者之间无显著差异（P>0.05）；而腹腔注射了葡萄糖酸钙的B、C组尿钙排泄量显著增加，但两者间无显著差异（P>0.05）；与D组比较， B组肾脏/体重比值高于D组（P<0.05）。
表1.各实验组客观指标H2O2、MDA、LDH的表达“#”代表与空白组比较，P<0.053.3 各组小鼠24h 尿乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、过氧化氢（H2O2）含量与D组比较，运用了药物干预的A、B、C 3组尿H2O2、L D H浓度显著增加，但三者之间无显著差异（P<0.05）；A、B 2组尿液MDA、显著增高（P<0.05）。
表2.各实验组客观指标H2O2、MDA、LDH的表达。
“#”代表与空白组比较，P<0.053．4 肾组织病理学检查及钙盐染色检查肾脏病理检查结果显示，造模B组大鼠的肾体积均较对照组(D组)稍大，外观灰白，表面触摸粗糙不平。
造模B组出现结晶，镜下可见肾皮质近曲小管大量结晶体(HE 染色中晶体为浅黄或棕黄色，Von Kossa染色中晶体呈黑褐色)，结晶成堆分布相互连接，部分近曲肾小管细胞疏松水肿、远曲小管扩张以及管腔内可见脱落细胞，肾间质血管充血，可见炎细胞。
造模A、C组镜下未见结晶体，仅发现肾间质血管充血(见图1)。
免疫组化病理切片结果提示CD68主要表达于肾脏间质，与D组比较，运用了药物干预的A、B、C 3组CD68灰度值显著降低。
图1 肾脏切片H E染色和钙盐染色（×200） A:为空白组肾脏（H E染色）；B、C、D为造模B组的小鼠肾脏（B为H E染色，C、D为Von Kossa染色），图B、C、D显示小管内结晶形成，且肾小管损伤，管腔扩大。
图2 巨噬细胞抗原CD68在各组小鼠肾脏内的表达（×200）图3 各组小鼠肾脏切片CD68灰度值比较，“#”代表与空白组比较，P<0.054 讨论肾结石患者可出现高钙、高草酸盐、高无机磷、高钠和低枸橼酸尿等，其中钙与草酸盐的排泄量是形成结石的重要因素，而无机磷排出增加可使磷酸盐易在尿中形成结晶，成为微小核心，介导异质成核过程，导致草酸钙结石的形成；本研究中各组模型动物的各项肾损伤指标结果以及病理切片观察结果显示，造模B组小鼠肾结石模型造模成功,A、C 组均无结石形成，说明单独增加尿草酸和尿钙浓度不足以在小鼠体内产生结晶，同时增加尿草酸和尿钙浓度可以成功诱导小鼠草酸钙肾结石。
肾结石动物模型以及临床肾结石患者肾脏处于氧化应激的现象，而抗氧化治疗可以减轻肾损伤和肾内结晶情况，因此肾内发生氧化应激损伤在肾结石的发病过程中起到重要的作用[3,4]。
LDH为细胞内酶成分，是胞浆标志酶，只有在细胞壁受损伤的情况下才释放到细胞外，是细胞受损伤的重要指标之一。
H2O2是活性氧簇中最主要的组成成分，其含量的多少可以反映R O S的含量。
M DA是细胞脂质过氧化反应水平的重要指标。
本研究中造模A、B、C 3组尿液中LDH、MDA、H2O2含量均高于空白组，说明结石小鼠肾内发生氧化应激损伤。
小鼠较之于大鼠有较强的肾结石耐受性，有文献报道小鼠肾内草酸钙晶体形成几天后即被清除。
这种清除的机制与肾内单核/巨噬细胞的吞噬、转运清除能力有关[2,5]。
CD68是单核/巨噬细胞的表面标志。
本研究通过免疫组化的方法比较各组的巨噬细胞的表达情况，发现造模A、B、C组的C D68灰度值明显低于空白组，说明巨噬细胞表达高于空白组。
表明巨噬细胞可能在肾结石的形成和/或清除过程中起到重要的作用。
乙二醇法是目前复制泌尿系统结石动物模型比较成熟的方法，是草酸的前体，进人体内后转化成羟乙酸，后者既可以在羟乙酸氧化酶的作用下直接转化为草酸，也可以通过乳酸脱氧酶的催化转化成乙醛酸，乙醛酸又可以直接在非酶作用下转化为草酸。
而传统用于大鼠草酸钙肾结石造模法的乙二醇饮水法应用于小鼠未取得成功，本文通过同时增加尿钙和尿草酸的方法成功建立小鼠草酸钙肾结石，为以后建立小鼠肾结石模型和研究肾脏清除结晶的机制奠定了基础。
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