1、洁净室微生物控制和检查介绍
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n 受控环境的微生物监测计划应该评估清洁消毒过 程的有效性及人员对受控环境微生物水平的影响。
n 监测计划可以监测到微生物检出率的变化，说明 了环境受控状态的变化。
n 动态取样更有意义
受控环境微生物评估计划的重要性
n 没有任何微生物取样计划那个证明没有微生物污 染，即使没有微生物污染被检出。
n 用于微生物检验的样品中没有微生物生长只说明 未发现生长。
取样用培养基必须在进入洁净室前进行预培养并 进行目检。
CHP2010
ChP2015
《中国药典》2015年版 四部
附录: 9203 “药品微生物实验室质量管理指导原则”
……
用于环境监测的培养基须特别防护，最好要 双层包装和终端灭菌，如果不能采用终端灭菌的 培养基，那么在使用前应进行100%的预培养以防 止外来的污染物带到环境中以避免出现假阳性的 结果。
n 无菌检验无法对整批产品进行100%检验 n 用于无菌检验的培养基存在局限性 n 无菌检验环境只是一个相对无菌的环境
A级环境 ? 无菌环境
n 证明环境中完全没有活的微生物，有可能吗？
n 不能。
n 洁净环境中一定会有污染，通过环境监测的概率 有多大呢？
环境监测的概率
n 环境监测是根据的概率原则判断的。
<1117 >微生物良好实验室规范
USP <1116 >
MICROBIOLOGICAL EVALUATION OF CLEAN ROOMS AND OTHER CONTROLLED ENVIRONMENTS
洁净室和其他受控环境的微生物学评估
…media should be examined for sterility and for
n SDA或含抑制性的SDA可用于检测真菌和酵母菌。 n 通常，不必监测严格厌氧菌，因为其不会在室内
空气中存活。
培养基的选择2
n 培养基制备的灭菌工艺必须经过验证。 n 任何用于环境监测的培养基必须评估其促生长能
力。 n 只要可能，取样用培养基及其包装应当使用湿热、
辐照或其他适当的方式进行终端灭菌。 n 如果必须使用使用无菌技术制备的培养基。所有
洁净环境微生物控制、监测
主题：
1. 环境监测的风险 2. 洁净室如何监测 3. 环境监测培养基的质量控制 4. 洁净室清洁与消毒
Quality isn’t expensive, It’s priceless. 质量不是个昂贵的东西，但一定是无价之宝。
主题：
1. 环境监测的风险 2. 洁净室如何监测 3. 环境监测培养基的质量控制 4. 洁净室清洁和消毒
1. 预培养只能部分的发现培养基染菌，不能保证 无菌。
2. 预培养是双刃剑，在消除“假阳性”的同时， 引入了“假阴性”的可能。
3. 谨慎采用预培养。
关键区域环境监测培养基：
n TSA n TSA+吐温80+卵磷脂 n TSA+酶
GB/T 16294-2010 沉降菌测试特点： 1、静态； 2、测试时间：30分钟； 3、测试平皿培养基灌装量：约20mL。
静态测试
GB16293-2010 GB16294-2010
GB16292-2010 表1 离地面0.8-1.5米
（略高于工作面） 30分钟
企业自行制定
动态监测
GMP2010
风险评估决定
风险评估决定 （风险点） ≤4小时
GB16293-2010 GB16294-2010
GMP2010
受控环境微生物评估计划的重要性
污染控制有效性的物理评估
n 洁净室应当怎样评估？ n 洁净室应当怎样监测？
医药工业洁净室微生物测试方法：
n 静态测试
适应范围：洁净室投入生产前。
n 动态监测
适应范围：非无菌制剂生产监测。
n 连续监测
适应范围：无菌制剂生产监测。
静态测试 Vs 动态监测
依据 取样点数目 取样点位置 取样时间 限度规格
n 一个洁净室称之为无菌是根据概率论来定 义的，说明该环境中，即使一个监测点被 污染的可能性是微乎其微的，可以被接受 的。
环境监测
n 不能用环境监测合格来证明整批产品的无 菌性。
n 那么，环境监测合格有能够证明什么呢？
环境监测
n 环境监测本身并不是设计用于保证产品无 菌或产品已灭菌。
n 产品的无菌保证是通过灭菌工艺或无菌工 艺的验证而得到的。
n 以下判断不具有科学性：“符合这些数值即保证 微生物受控”，或“超过这些数值即说明失控”。
主题：
1. 环境监测的风险 2. 洁净室如何监测 3. 环境监测培养基的质量控制 4. 洁净室清洁与消毒
培养基的选择1
n TSA在大部分情况下适用于环境监测。可辅助添 加剂去除消毒剂和抗生素的影响，或使影响最小 化。
环境监测的挑战与风险：
1、洁净环境监测方法都一样的 吗？
环境监测的挑战与风险：
2、沉降菌监测都是4小时吗？
环境监测的挑战与风险：
3、A级区微生物监测都必须是“0” 吗？
环境监测的挑战与风险：
4、成品培养基上有水分正常么？ 如何正确使Biblioteka Baidu成品培养基？
主题：
1. 环境监测的风险 2. 洁净室如何监测 3. 环境监测培养基的质量控制 4. 洁净室清洁与消毒
无菌药品：
n 没有任何活体微生物的药品。（理论定义）
n 符合现行质量标准的药品。 检验项目：无菌检验 限度规格：检验结果阴性 检验方法：现行药典的检验方法 取样方法：现行药典规定的取样方法
无菌产品 Vs 无菌检验合格
整批产品无菌 = 无菌检验合格的产品 无菌检验合格的产品 ≠ 整批产品无菌
无菌检验的局限性：
growth promotion as indicated under Sterility Tests 71 …培养基也应像无菌检测<71>中标示的那做无菌检
测和促生长检验。
预培养前提： - 培养对象是谁？ - 培养时间，培养温度的设定
预培养目的：
仅仅用来评估培养基平板制备过程的污染率。
“预培养”的正确理解：
ISPE CHINA ANNUAL CONFERENCE 2014
GMP2010沉降菌测试：
1、动态； 2、测试时间：≤4小时； 3、沉降菌监测培养基的适用性试验。
ISPE CHINA ANNUAL CONFERENCE 2014
沉降菌测试培养基三个关键点：
1、培养基回收率； 2、培养基含水量； 3、培养基放置时间。
n 监测计划可以监测到微生物检出率的变化，说明 了环境受控状态的变化。
n 动态取样更有意义
受控环境微生物评估计划的重要性
n 没有任何微生物取样计划那个证明没有微生物污 染，即使没有微生物污染被检出。
n 用于微生物检验的样品中没有微生物生长只说明 未发现生长。
取样用培养基必须在进入洁净室前进行预培养并 进行目检。
CHP2010
ChP2015
《中国药典》2015年版 四部
附录: 9203 “药品微生物实验室质量管理指导原则”
……
用于环境监测的培养基须特别防护，最好要 双层包装和终端灭菌，如果不能采用终端灭菌的 培养基，那么在使用前应进行100%的预培养以防 止外来的污染物带到环境中以避免出现假阳性的 结果。
n 无菌检验无法对整批产品进行100%检验 n 用于无菌检验的培养基存在局限性 n 无菌检验环境只是一个相对无菌的环境
A级环境 ? 无菌环境
n 证明环境中完全没有活的微生物，有可能吗？
n 不能。
n 洁净环境中一定会有污染，通过环境监测的概率 有多大呢？
环境监测的概率
n 环境监测是根据的概率原则判断的。
<1117 >微生物良好实验室规范
USP <1116 >
MICROBIOLOGICAL EVALUATION OF CLEAN ROOMS AND OTHER CONTROLLED ENVIRONMENTS
洁净室和其他受控环境的微生物学评估
…media should be examined for sterility and for
n SDA或含抑制性的SDA可用于检测真菌和酵母菌。 n 通常，不必监测严格厌氧菌，因为其不会在室内
空气中存活。
培养基的选择2
n 培养基制备的灭菌工艺必须经过验证。 n 任何用于环境监测的培养基必须评估其促生长能
力。 n 只要可能，取样用培养基及其包装应当使用湿热、
辐照或其他适当的方式进行终端灭菌。 n 如果必须使用使用无菌技术制备的培养基。所有
洁净环境微生物控制、监测
主题：
1. 环境监测的风险 2. 洁净室如何监测 3. 环境监测培养基的质量控制 4. 洁净室清洁与消毒
Quality isn’t expensive, It’s priceless. 质量不是个昂贵的东西，但一定是无价之宝。
主题：
1. 环境监测的风险 2. 洁净室如何监测 3. 环境监测培养基的质量控制 4. 洁净室清洁和消毒
1. 预培养只能部分的发现培养基染菌，不能保证 无菌。
2. 预培养是双刃剑，在消除“假阳性”的同时， 引入了“假阴性”的可能。
3. 谨慎采用预培养。
关键区域环境监测培养基：
n TSA n TSA+吐温80+卵磷脂 n TSA+酶
GB/T 16294-2010 沉降菌测试特点： 1、静态； 2、测试时间：30分钟； 3、测试平皿培养基灌装量：约20mL。
静态测试
GB16293-2010 GB16294-2010
GB16292-2010 表1 离地面0.8-1.5米
（略高于工作面） 30分钟
企业自行制定
动态监测
GMP2010
风险评估决定
风险评估决定 （风险点） ≤4小时
GB16293-2010 GB16294-2010
GMP2010
受控环境微生物评估计划的重要性
污染控制有效性的物理评估
n 洁净室应当怎样评估？ n 洁净室应当怎样监测？
医药工业洁净室微生物测试方法：
n 静态测试
适应范围：洁净室投入生产前。
n 动态监测
适应范围：非无菌制剂生产监测。
n 连续监测
适应范围：无菌制剂生产监测。
静态测试 Vs 动态监测
依据 取样点数目 取样点位置 取样时间 限度规格
n 一个洁净室称之为无菌是根据概率论来定 义的，说明该环境中，即使一个监测点被 污染的可能性是微乎其微的，可以被接受 的。
环境监测
n 不能用环境监测合格来证明整批产品的无 菌性。
n 那么，环境监测合格有能够证明什么呢？
环境监测
n 环境监测本身并不是设计用于保证产品无 菌或产品已灭菌。
n 产品的无菌保证是通过灭菌工艺或无菌工 艺的验证而得到的。
n 以下判断不具有科学性：“符合这些数值即保证 微生物受控”，或“超过这些数值即说明失控”。
主题：
1. 环境监测的风险 2. 洁净室如何监测 3. 环境监测培养基的质量控制 4. 洁净室清洁与消毒
培养基的选择1
n TSA在大部分情况下适用于环境监测。可辅助添 加剂去除消毒剂和抗生素的影响，或使影响最小 化。
环境监测的挑战与风险：
1、洁净环境监测方法都一样的 吗？
环境监测的挑战与风险：
2、沉降菌监测都是4小时吗？
环境监测的挑战与风险：
3、A级区微生物监测都必须是“0” 吗？
环境监测的挑战与风险：
4、成品培养基上有水分正常么？ 如何正确使Biblioteka Baidu成品培养基？
主题：
1. 环境监测的风险 2. 洁净室如何监测 3. 环境监测培养基的质量控制 4. 洁净室清洁与消毒
无菌药品：
n 没有任何活体微生物的药品。（理论定义）
n 符合现行质量标准的药品。 检验项目：无菌检验 限度规格：检验结果阴性 检验方法：现行药典的检验方法 取样方法：现行药典规定的取样方法
无菌产品 Vs 无菌检验合格
整批产品无菌 = 无菌检验合格的产品 无菌检验合格的产品 ≠ 整批产品无菌
无菌检验的局限性：
growth promotion as indicated under Sterility Tests 71 …培养基也应像无菌检测<71>中标示的那做无菌检
测和促生长检验。
预培养前提： - 培养对象是谁？ - 培养时间，培养温度的设定
预培养目的：
仅仅用来评估培养基平板制备过程的污染率。
“预培养”的正确理解：
ISPE CHINA ANNUAL CONFERENCE 2014
GMP2010沉降菌测试：
1、动态； 2、测试时间：≤4小时； 3、沉降菌监测培养基的适用性试验。
ISPE CHINA ANNUAL CONFERENCE 2014
沉降菌测试培养基三个关键点：
1、培养基回收率； 2、培养基含水量； 3、培养基放置时间。