乳酸菌的分离纯化毕业设计1解读
酸奶中乳酸菌的分离检测及纯化
（4）、乳酸菌的检测、纯化培养
(1)、初步检测
恒温培养48小时过后，取出培养平板；选择菌落分布 较好的平板，先对其菌落形态进行观察，初步找出乳酸菌 菌落。乳酸菌的菌落很小，圆形隆起，表面光滑或稍粗糙， 在产酸菌落周围还能产生CaCO3的溶解圈，如出现圆形稍扁 平的黄色菌落及其周围培养基变为黄色者初步定为乳酸菌。
2、革兰氏染色结果
革兰氏染色结果为蓝紫色，证乳酸菌为革兰氏阳性菌
3、脱脂乳试管检测乳酸杆菌
试管中脱脂牛乳凝固，证为乳酸杆菌
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
另留一管不稀释留作对照（CK）
（2）、分离方法
A．平板划线 接种环挑取10-1菌液，按无菌操作对标有”10-1”的3个平板进
行划操作；划线完毕后，盖上皿盖，倒置放在40℃恒温培养箱中培 养48小时。
B．平板涂布 用无菌移液管分别吸取10-5、10-6、10-7和无菌生理
将7只装9ml无菌水的无菌试管，依次编号1--7，再用无菌移液管 吸10-1的菌悬液1ml放入依次装有9ml无菌水的试管1--6中，稀释混匀 便得到10-2～10-7的稀释液。
酸奶菌悬液的配制
10ml
1.0ml
1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水
（2）、乳酸菌的分离纯化培养
选取乳酸菌典型菌落转至脱脂乳试管中，40℃ 培养8-24h若牛乳出现凝固，无气泡，显酸性，涂 片镜检细胞杆状或链球状，革兰氏染色显阳性， 则可将其连续传代3次，最终选择出在3-6h能凝固 的牛乳管，作菌种待用。
乳酸菌菌种的分离筛选方法解读
乳酸菌菌种的分离筛选方法解读第一篇：乳酸菌菌种的分离筛选方法解读乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。
为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。
营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。
在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。
通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。
乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。
当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类时，SL培养基常用作为选择性培养基。
对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。
M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。
嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。
其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无鞭毛。
粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。
乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。
革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。
在MRS培养基上菌落小，呈白色。
沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。
乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。
分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。
培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。
乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。
分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。
也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。
一.筛选方法： 1.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。
其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。
发酵实验报告三、乳酸菌的分离和酸奶的制作
发酵工程学实验报告实验三、乳酸菌的分离和酸奶的制作学院生命科学学院专业应用生物教育班级12应生A班姓名李顺昌学号124120218实验课程乳酸菌的分离和酸奶的制作指导教师许波开课学期2014—2015学年下学期实验三、乳酸菌的分离和酸奶的制作小组合作：是小组成员：李顺昌、李媛媛、方淑萍、周玉坤一、实验目的1.掌握分离纯化微生物的基本方法2.掌握酸奶制作的基本原理3.学会酸奶的制作方法二、实验设备与材料1、仪器设备：三角瓶、平皿、试管、移液管、玻璃涂布棒、灭菌锅、超净工作台、培养箱、恒温摇床、冰箱等。
2、材料：市售酸奶、奶粉、白糖、棉花、酸奶瓶（自备，1个/人）等。
3、培养基：乳酸菌分离用乳酸菌分离用培养基：牛肉膏：0.5％；酵母膏：0.5％；蛋白胨：1％；葡萄糖：1％；乳糖：0.5％；NaCl：0.5％；琼脂：2.5％；pH6.8。
配制250mL/组，装于2个三角瓶三、实验原理1、酸奶制作的基本原理（1）酸奶：以牛奶为主要原料，接入一定量乳酸菌，经发酵后制成的一种乳制品饮料。
（2）生理生化原理牛奶（乳糖）→接种乳酸菌→β-D-半乳糖苷酶→乳糖（半乳糖和葡萄糖）→乳酸发酵（葡萄糖）→乳酸→破坏钙-酪蛋白-磷酸复合物的稳定性→蛋白质凝结→酸奶2、提供适宜的生长条件、采用一定的微生物分离纯化方法，就能够从酸奶中分离出乳酸菌。
3、酸奶中含有乳酸菌的菌体及代谢产物，因而对人体的肠胃消化道疾病有良好的治疗效果。
四、实验方法步骤（一）乳酸菌的分离纯化——稀释涂布平板法1、倒平板（约6块/100ml）2、制备酸奶稀释液（1）将0.5mL酸奶吸入4.5mL无菌水（自备）中，摇动5min；（2）用无菌吸管吸出0.5mL酸奶悬液，加入盛有4.5mL无菌水的试管中，充分混匀，制备得到10-2稀释液；（3）再从中吸出0.5mL加入盛有4.5mL无菌水的大试管中，混匀后得到10-3稀释液；（4）以此类推，分别制备得到10-4、10-5、10-6酸奶稀释液。
乳酸菌的分离纯化 毕业设计-1解读
LUOYANG NORMAL UNIVERSITY2015届毕业论文乳酸菌的分离纯化及抑菌实验院（系）名称生命科学学院专业名称生物技术学生姓名勾倩倩学号111344045指导老师易力副教授完成时间2015年5月7日乳酸菌的分离纯化及抑菌实验勾倩倩生命科学学院生物技术专业学号：111344045指导教师：易立副教授摘要：本文对乳酸菌的分离纯化，革兰氏染色以及抑菌实验进行阐述，从市售酸菜中分离纯化得到乳酸菌，革兰氏染色进行鉴定，最后进行金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌实验！实验主要是分离纯化，革兰氏染色，最后用抑菌实验比较单菌株的抑菌能力。
关键词：乳酸菌：分离纯化；革兰氏染色；抑菌乳酸菌 (LA B ，Lactic acid bacteria)是指能使碳水化合物(主要为葡萄糖)发酵产生大量乳酸的细菌的通称，这类细菌生长在矿物质和有机营养丰富的微酸性环境中[1,2]。
在自然界中比较常见，用途广泛，它可以改善食物的风味，并延长食品的货架期，作为保健食品和药品，可以改善和提高人的健康水平，延年益寿，还可以作为微生物学和微生态学领域研究的模式生物[3]。
酸菜是世界性大众化蔬菜腌制品,在我国历史悠久[4]，其自然发酵的主要菌群是乳酸菌[5]。
人体在摄人发酵酸菜时，也同时摄入了大量的乳酸菌体及其代谢产物[6]。
乳酸菌是酸菜发酵过程中的有益菌，在发酵速度以及发酵产品品质等方面都起到至关重要的作用。
因此在微生物学和食品科学的研究中，对酸菜中乳酸菌进行鉴定是必要的[7]。
本实验从酸菜中分离纯化得到6株乳酸菌（1,2,3,4,5,6），进行革兰氏染色，为紫色杆状，最后进行抑菌实验，比较6株乳酸菌的抑菌能力。
1 材料与仪器1.1 菌种乳酸菌1.2 样品来源市售新鲜酸菜1.3 培养基（1）乳酸菌分离培养基（固体MRS培养基）：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖10g，磷酸氢二钾1g，柠檬酸铵1g，乙酸钠2.5g，硫酸镁0.29g，硫酸锰0.125g，吐温80 0.5 mL，琼脂8.5g，蒸馏水500mL，pH7.0（2）乳酸菌纯化培养基：MRS培养基+1%的碳酸钙溶液（碳酸钙1g，蒸馏水100mL）（3）乳酸菌富集培养培养基（液体MRS培养基）：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖10g，磷酸氢二钾1g，柠檬酸铵1g，乙酸钠2.5g，硫酸镁0.29g，硫酸锰0.125g，吐温80 0.5 mL，蒸馏水500mL，pH7.0（4）抑菌实验培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）：牛肉膏1.5g，蛋白胨5g，NaCl 2.5g，琼脂粉7.5g，水500mL，pH7.21.4 仪器及用具恒温培养箱，高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，培养皿，锥形瓶，移液枪，涂布棒，接种针2 方法与过程2.1 酸菜中菌种的分离培养（平板涂布法）吸取汤汁0.1ml，加入9ml无菌水中进行100倍稀释，依次做5个梯度，每个梯度分别取0.2ml涂布于灭好菌MRS培养基中，并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀，然后用封口膜封住培养皿，平放于试验台上20 min，然后倒置于37℃恒温箱中培养48h。
乳酸菌的分离与纯化实验报告
乳酸菌的分离与纯化实验报告一、实验目的：1. 掌握乳酸菌的分离与纯化方法；2. 学习乳酸菌的形态特征及生长特性；3. 熟悉微生物实验室操作规范和安全注意事项。
二、实验原理：乳酸菌属于革兰氏阳性细菌，可以利用革兰染色方法进行初步鉴定。
乳酸菌的形态特征有很大差异，有的呈短杆状、短圆柱状，有的呈梭形或球形。
乳酸菌的培养基选择要根据实验目的而定，一般常用的是MRS培养基。
常规乳酸菌分离方法有两种：血漂白法和渐进稀释法。
血漂白法是用过氧化氢或次氯酸钠等对血液进行漂白处理后加入培养基进行分离，由于血液中含有多种抑菌物质，故需漂白处理后方能使用。
渐进稀释法则是将混菌液逐步稀释后按一定比例接种于选定的培养基上，经过多次传代，可得到单一的菌落。
三、实验步骤：1. 取适量样品加入1ml生理盐水中，充分摇匀。
2. 再从上述稀释液中取出1ml加入9ml生理盐水中，得到10-2悬液。
3. 再抽取1ml悬液加入9ml生理盐水中，得到10-3悬液。
4. 分别取适量的10-2和10-3悬液接种于MRS培养基上，并分别转移多次，培养时间一般为24-48小时，必要时可延长到72小时。
5. 分离菌落后进行鉴定。
四、结果及分析：实验结果显示，经过分离培养，从10-2和10-3悬液中分别分离出了多个菌落，经过重复转移，逐步稀释，最终获得了单一的菌落，可见分离培养方法的有效性和行之有效的可行性。
鉴定乳酸菌的一般方法包括形态学鉴定、生化特性鉴定和分子生物学鉴定等。
形态学鉴定包括形态、大小、形状和染色等方面；生化特性鉴定则主要包括代谢途径、酸产生量和果糖发酵能力等；分子生物学鉴定则是通过特异性引物扩增菌株中的核酸，进行分子水平鉴定。
五、实验心得：本次实验通过乳酸菌分离、培养和鉴定的过程，使我对乳酸菌的形态特征、生长特性和鉴定方法有了更深入的了解。
同时，要时刻注意实验室的操作规范和安全问题，确保实验顺利进行。
在今后的实验中，我将更加重视实验操作的规范性和安全性。
乳酸菌毕业设计
乳酸菌毕业设计乳酸菌毕业设计毕业设计是每个大学生必须完成的重要任务之一。
在我即将毕业的时候，我选择了乳酸菌作为我的毕业设计的研究对象。
乳酸菌是一类广泛存在于我们日常生活中的微生物，它具有许多重要的功能和应用价值。
通过对乳酸菌的深入研究，我希望能够为乳酸菌的应用领域做出一些贡献。
乳酸菌是一类革兰氏阳性菌，能够在无氧条件下通过乳酸发酵产生乳酸。
乳酸菌广泛存在于我们的食品中，比如酸奶、酸黄瓜等。
这些食品不仅味道酸甜可口，而且还具有许多益生菌的功能。
乳酸菌可以改善肠道菌群平衡，增强免疫力，预防肠道疾病等。
因此，乳酸菌在保健品和食品工业中有着广泛的应用前景。
在我的毕业设计中，我选择了一种具有潜在应用价值的乳酸菌进行研究。
首先，我通过文献调研了解到该乳酸菌具有较高的耐受性和适应性，能够在不同环境条件下生存和繁殖。
接下来，我进行了一系列实验，研究了该乳酸菌的生长特性、代谢产物和对人体健康的影响等方面。
实验结果显示，该乳酸菌在低温、酸性和高盐等环境条件下仍能够生存和繁殖，这表明它具有较高的耐受性。
此外，该乳酸菌在发酵过程中产生的乳酸含量较高，具有较强的抗菌作用。
这些结果为该乳酸菌在食品工业中的应用提供了理论基础。
除了对该乳酸菌的基本特性进行研究外，我还对其对人体健康的影响进行了评估。
通过动物实验和人体试验，我发现该乳酸菌具有调节肠道菌群、增强免疫力、降低胆固醇和改善消化功能等作用。
这些结果表明，该乳酸菌有望成为一种新型的益生菌，有助于预防和治疗肠道相关疾病。
基于以上研究结果，我进一步探索了该乳酸菌在食品工业中的应用潜力。
通过发酵实验，我成功地将该乳酸菌应用于酸奶和酸黄瓜等食品的生产中。
与传统产品相比，添加了该乳酸菌的产品不仅口感更好，而且具有更多的益生菌含量。
这些结果为该乳酸菌在食品工业中的推广应用提供了实践基础。
通过我的毕业设计，我深入研究了乳酸菌的生物学特性、应用潜力和对人体健康的影响等方面。
我相信这些研究结果对乳酸菌的应用领域有着重要的意义。
乳酸菌的分离纯化
1、分离培养基采用MRS培养基, 分离培养基中添加溴甲酚紫作为指示剂;采用稀释平板涂布法进行平板涂布分离, 挑取直径在115mm以下能使培养基中溴甲酚紫变红或变黄的单菌落, 菌落表面光滑的菌株，采用划线法进行分离纯化，获得纯种。
2、MRS 固体培养基：蛋白胨10g，肉膏10g，酵母提取物5g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，K2HPO4 2g，MnSO4·4H2O 0.25g，MgSO4·7H2O 0.58g，葡萄糖20g，吐温80 1mL，琼脂25g，水1000mL。
调pH6.2～6.4，1% CaCO3，121℃灭菌15min。
改良MRS培养基：向MRS培养基中加入1% CaCO3。
10 倍比稀释至10-10，分别吸取稀释液各0.2mL，涂布于含钙MRS 培养基平板上，37℃静置培养48h。
挑取含钙培养基上具有明显钙溶圈的菌落，划线分离纯化2~3 次，最后选择单菌落，经镜检确认为纯种3、MRS 固体培养基: 蛋白胨10g, 牛肉膏10g, 酵母提取物5g, K2HPO4 2g, 柠檬酸二铵2g, 乙酸钠5g, 葡萄糖20 g, 吐温-801mL, MgSO4 #7H2O 0.5g, MnSO4 0.25g, 琼脂25g，蒸馏水1000mL, pH6.2~ 6.4, 3%的CaCO3, 121℃灭菌20min。
稀释倾倒平板法分别接种于MRS固体培养基上，30 ℃培养24h30℃培养24h, 在MRS+3%CaCO3 固体培养基上形成明显的透明圈, 表面光滑湿润。
45、培养基MRS液体培养基(pH5. 0) , 富集培养用; 改良MRS固体培养基(pH6.8) : 在培养基成分中,加入2%的CaCO3菌种分离方法先在MRS( pH5. 0) 液体培养基中进行富集培养, 18～24h后采用改良的MRS固体培养基进行稀释平板法分离,挑取生长在平板中下层且具溶钙圈的乳白色菌落,按常规方法进行纯化,获得纯菌。
乳酸菌的检测实训报告
一、实训目的本次实训旨在通过实验操作，掌握乳酸菌的检测方法，了解乳酸菌的基本特性，提高对微生物检测技术的实际操作能力，并加深对乳酸菌在食品、医药等领域的应用认识。
二、实训时间2023年10月25日至2023年11月5日三、实训地点生物实验室四、实训内容1. 乳酸菌样品的采集与处理2. 乳酸菌的分离纯化3. 乳酸菌的形态观察4. 乳酸菌的生理生化特性鉴定5. 乳酸菌产酸能力的测定五、实训方法1. 乳酸菌样品的采集与处理（1）采集：从市场上购买含有乳酸菌的酸奶、酸奶饮料等样品。
（2）处理：将样品用无菌生理盐水进行梯度稀释，制成系列稀释液。
2. 乳酸菌的分离纯化（1）平板划线法：将稀释后的样品涂布在MRS平板上，用无菌接种针进行划线。
（2）培养：将平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
（3）挑取单菌落：根据菌落的特征，挑取疑似乳酸菌的单菌落。
3. 乳酸菌的形态观察（1）制作临时玻片：将挑取的单菌落涂布在载玻片上，用无菌盖玻片覆盖。
（2）显微镜观察：在显微镜下观察乳酸菌的形态、大小、排列等特征。
4. 乳酸菌的生理生化特性鉴定（1）革兰氏染色：将挑取的单菌落涂布在载玻片上，进行革兰氏染色。
（2）生化反应：进行糖发酵试验、氧化酶试验、V-P试验等。
5. 乳酸菌产酸能力的测定（1）制作MRS培养基：按照实验要求配制MRS培养基。
（2）接种：将挑取的单菌落接种于MRS培养基中。
（3）培养：将培养皿置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
（4）测定pH值：使用pH计测定培养基的pH值，计算产酸能力。
六、实训结果与分析1. 乳酸菌样品的采集与处理采集了5个样品，均成功制成系列稀释液。
2. 乳酸菌的分离纯化共分离纯化出10个疑似乳酸菌的单菌落。
3. 乳酸菌的形态观察在显微镜下观察到乳酸菌为杆状，大小约为0.5～1.0μm，排列呈链状。
4. 乳酸菌的生理生化特性鉴定10个疑似乳酸菌均呈革兰氏阳性，能发酵乳糖，不产生硫化氢，氧化酶试验阴性。
酸奶中乳酸菌的分离与纯化
酸奶中乳酸菌的分离与纯化一、实验目的1.掌握分离乳酸菌的基本原理和操作技术；2.学习并掌握稀释法和微生物纯培养操作。
二、实验设备及材料培养基材料：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、番茄汁、葡萄糖、吐温、溴甲酚绿、琼脂。
实验材料：无菌水、培养皿、电热套、高压蒸汽灭菌锅、电子分析天平、涂布棒、酒精灯、无菌试管、移液枪、无菌吸管。
三、实验原理乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。
大多数不运动，少数以周毛运动。
菌体常排列成链。
根据细胞形态分为球状或杆状，可分为两大类，即乳酸链球菌和乳酸杆菌。
在乳酸菌培养基平板上，乳酸菌菌落大约1～3mm，圆形隆起，表面光滑，呈乳白色、灰白色或暗黄色；在产酸周围还能产生CaCO3溶解圈。
乳酸菌革兰氏染色后呈蓝色，为革兰氏阳性菌。
四、实验步骤1.乳酸菌培养基的制作配方蛋白胨 2.0g酵母膏 2.0g番茄汁40g葡萄糖 2.0g吐温0.10mL碳酸钙 3.4g溴甲酚绿0.02g琼脂2～4g水200mL①称量：按照培养基配方依次称取药品放入烧杯中。
②熔化：在烧杯中加入略少于200mL水，加热至沸腾。
依次加入药品，用玻璃棒不断搅拌，待其完全溶解后，加入琼脂，搅拌至完全熔化，最后补足所损失的水分。
③分装：将配置的乳酸菌培养基装入三角瓶中。
④加棉塞、包扎⑤灭菌：将乳酸菌培养基在压力0.11MPa，温度121℃条件下灭菌20min。
⑥无菌检查2.倒平板将乳酸菌培养基熔化，待冷却至55～60℃时，倒平板，倒好后，在室温下培养2～3d，或37℃培养24h，检查无菌落及皿盖无冷凝水后再使用。
3.制备稀释液量取酸奶10mL，放入盛有90 mL无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，震摇约20min，使酸奶与无菌水充分混合，将酸奶分散。
用一只1 mL无菌吸管从中吸取1 mL酸奶悬浊液注入盛有9 mL无菌水的试管中，吹吸三次，使充分混匀。
然后再用一支1 mL无菌吸管从此试管中吸取1 mL注入另一盛有9 mL无菌水的试管中，以此类推，制成10−3、10−4、10−5各种稀释度的酸奶稀释液。
酸奶中乳酸菌的分离检测及纯化ppt课件
【实验材料、仪器与试剂】
实验材料：市售乳酸饮料或酸奶。 实验仪器：保温箱、高压蒸汽灭菌锅、水浴锅、 培养皿、试管、涂布器、酒精灯等。 实验试剂：脱脂乳试管、脱脂奶粉、5%蔗糖水、 1.6%溴甲酚紫、95%乙醇溶液、酵母膏、 琼脂、无菌水
【实验步骤】
1、1.6%溴钾酚紫牛乳培养基的制备
2、脱脂乳试管的制备
3、酸奶中乳酸菌的分离 4、乳酸菌的检测、纯化培养
（1）、1.6%溴甲酚紫牛乳培养基的制备
配料： （A）液：脱脂奶粉100g，水500ml，加入1.6%溴甲酚紫、乙醇溶液1ml， 80℃灭菌20min。 （B）液：酵母膏10g，水500ml，琼脂20g ，pH6.8， 121℃湿热灭菌20min。 操作： （1）、按照配方正确称取所需药品放于烧杯中，在搪瓷杯中加入所需水 量，玻棒搅匀，加热溶解，用1N NaOH或1N HCl调pH，加琼脂溶化，加 热过程要不断搅拌，可适当补水。琼脂完全溶解后 倒入250mL的锥形 瓶中，贴上标签，在高压锅中灭菌20min。 （2）、灭好菌的A液和B液趁热充分混合，并在酒精灯的附近趁热倒平板 。
10ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml
10-1
花园酸奶 90ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
另留一管不稀释留作对照（CK）
（2）、分离方法
A．平板划线 接种环挑取10-1菌液，按无菌操作对标有”10-1”的3个平板进 行划操作；划线完毕后，盖上皿盖，倒置放在40℃恒温培养箱中培 养48小时。
B．平板涂布
乳酸杆菌实验报告
一、实验目的1. 掌握乳酸杆菌的分离与纯化方法。
2. 了解乳酸杆菌的形态特征和生理特性。
3. 鉴定乳酸杆菌的种类。
二、实验原理乳酸杆菌是一种革兰氏阳性菌，属于乳酸菌，广泛存在于自然界中，如土壤、水体、植物和动物体内。
在人体肠道中，乳酸杆菌具有重要的生理功能，如调节肠道菌群平衡、增强机体免疫力、降低胆固醇、促进消化等。
本实验通过分离纯化乳酸杆菌，观察其形态特征和生理特性，并对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 土壤样品- MRS培养基- 琼脂糖- 酵母提取物- 葡萄糖- 乳糖- 麦芽糖- 蛋白胨- 氯化钠- 酚红指示剂- pH试纸- 显微镜- 高压蒸汽灭菌器- 灭菌平板计数器2. 实验仪器：- 灭菌锅- 灭菌培养箱- 灭菌移液器- 灭菌镊子- 灭菌培养皿- 灭菌试管- 灭菌剪刀- 灭菌烧杯四、实验方法1. 土壤样品的处理- 取一定量的土壤样品，加入适量的无菌水，充分振荡后静置。
- 取上层悬液作为实验样品。
2. 乳酸杆菌的分离与纯化- 将MRS培养基在高压蒸汽灭菌器中灭菌后，倒入培养皿中制成平板。
- 将处理好的土壤样品悬液用无菌移液器取适量，涂布在MRS平板上。
- 将培养皿放入培养箱中，在适宜的温度下培养。
3. 乳酸杆菌的形态特征观察- 取分离得到的单菌落，在显微镜下观察其形态。
4. 乳酸杆菌的生理特性检测- 将分离得到的单菌落接种到含有不同糖类的培养基中，观察其在不同糖类上的生长情况。
- 用pH试纸检测培养基的酸碱度变化。
5. 乳酸杆菌的鉴定- 根据乳酸杆菌的形态特征、生理特性和生化反应，将其与已知菌种进行比对，确定其种类。
五、实验结果与分析1. 乳酸杆菌的分离与纯化- 成功分离得到多个单菌落，表明土壤样品中存在乳酸杆菌。
2. 乳酸杆菌的形态特征观察- 分离得到的乳酸杆菌为杆状，大小约为0.5～1.0μm×1.0～2.0μm。
3. 乳酸杆菌的生理特性检测- 分离得到的乳酸杆菌在葡萄糖、乳糖、麦芽糖培养基上均能生长，表明其可以利用这些糖类作为碳源。
鲜奶的乳酸发酵及乳酸杆菌的分离纯化
实验四鲜奶的乳酸发酵及乳酸杆菌的分离纯化一、实验目的1.掌握酸奶的制作工艺;2.掌握乳酸杆菌发酵鲜奶的原理;3.掌握分离纯化乳酸杆菌的方法.二、实验原理无氧，菌乳酸菌糖乳酸酸奶酸奶发酵过程是双菌或多菌的混合培养实现的。
酪蛋白小肽或氨基酸促进球菌生长、甲酸促进杆菌产生中间有大量的乳酸、乙醛、双乙酰产生乳酸菌发酵过程是双菌或多菌的混合培养实现的，酪蛋白分离成小肽或氨基酸，促进球菌的生长，产生大量的乳酸、乙醛、双乙酰。
乳酸菌利用牛奶为底物进行厌氧发酵，得到主要发酵产物乳酸。
三、实验材料与仪器材料：纯牛奶，乳酸菌（益力多），白砂糖；仪器：高压灭菌锅、恒温培养箱。
四、实验步骤（一）酸奶的制作1、配奶：150mL的纯牛奶加15~20g白砂糖，搅拌好，砂糖需完全溶解；2、接种：按总体150mL鲜奶加15mL益力多，桌面上水平摇匀10min；3、装瓶4、保温：40~42度，3~4h，常观察，整瓶上下层均出现凝乳时停止培养，转至4~5度低温下冷藏1~2h。
5、加热：低温后加热6、品尝：口感与风味接种剂品牌PH 凝结程度口感香味异味品评益力多 6.0 无凝结甜，无酸味奶香无太甜（二）乳酸杆菌的分离纯化益力多中乳酸菌的分离，按10倍稀释法，原液大约为109/mL编号 1 2 3 4 5 6 7 810倍108/mL 107/mL 106/mL 105/mL 104/mL 103/mL 102/mL 10/mL 划线法每组做四种浓度，每种浓度2个平行，划八个皿，37度倒置培养。
纯化：划线，染色（划一个单菌落在载玻片，用10uL的水涂匀，烤干，加一滴美篮染色，烤干，加香柏油，在油镜下观察）分离：取以上培养的两个浓度，分别取一个单菌落接到一个新的培养皿上，同样条件继续培养。
五、结果与讨论1、鲜奶的乳酸发酵图一图二图一图二便是我做的乳酸发酵结果，从图中可以明显的看到奶瓶中并未出现凝结情况，牛奶还是呈现液状，开启品尝后发现口味很甜，似乎乳酸菌并未利用糖进行发酵或者是因为我们使用的从超市买回来的罐装鲜奶中含有较高浓度的防腐剂，从而抑制乳酸菌的生长，导致乳酸菌的发酵能力大打折扣，因此鲜奶并未如预期那样成功发酵成酸奶。
酸菜中乳酸菌的分离筛选与鉴定分析
为0.725、0.694、0.712，对照柠檬酸和乳酸的Rr 值分别为0.483、0.731，证明其三菌株都有乳酸，均为产乳酸菌株:2.形态学鉴定。
在MRS 培养基上分别涂上已经经过分纯操作的菌种，在38°C 的环境中培养24小时，然后观察其特征情况，进行试剂染色处理，运用油镜进行观察：观察 结果为：1号菌株在培养基上的菌落形态为突起，0.5到1 毫米的菌落直径，呈圆形、光滑和灰白色，在革兰氏染色 上呈阳性，具有厌氧兼性，且生长物浑浊，豆状或球状的 菌体，0.8到1.2um 的直径，列为短链或单个2号和1号的不同之处是菌体直径不同，菌体为圆端直杆状，0.9到 1.2L U T 1的直径，且排列为成对或单个3号菌落中间突起且为深色，菌体粗短杆状，0.9到1.2画的直径，从形态学特 征角度分析可知，1号有肠膜明串珠菌形态学特征，2号有 植物乳酸杆菌特征，3号有短乳杆菌特征：3. 生理特性鉴定和生化鉴定。
在培养基中引入1%的对应菌液，每隔4小时吸取菌液，进行梯度性稀释，结合结果 将生理特性明显的1号、2号和3号菌株再培养2-3小时，以 培养时间为横坐标、菌落总数为纵坐标，绘制生长曲线， 明确培养时间和温度等情况对乳酸菌的影响（图1 ) 生化特性鉴定的试验方法有很多，如明胶液化试验、硝酸盐还 原试验等，根据试验需要有序进行试验即可C 寸》O C 寸》c 丨O ，《 N V O Q时阐(h >图1:三种菌株生长曲线经这两种鉴定结果反馈，1号最佳生长温度在2 5 °C - 30°C , 2号和3号最佳生长温度为30°C -35°C ,都为乳酸菌， 结合其生化特性鉴定情况，确定1号菌株为肠膜明串珠菌，2号菌株为短乳杆菌，3号菌株为植物乳酸杆菌.7!作者简介：杨家玉（1999.7.5-),女，河北盐山县， 本科；研究方向：食品。
■文I 杨家玉青岛工学院菜是经过乳酸发酵而形成的蔬菜制品，其增进食欲 的功效是因为含有乳酸菌。
保加利亚乳酸杆菌的分离纯化
酸奶中保加利亚乳酸杆菌的分离纯化一、实验目的提取分离酸奶中的保加利亚乳酸杆菌得到纯培养。
二、实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或者某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
平板分离法主要有以下两种：1、平板划线分离法，2、稀释涂布平板法。
分离微生物根据不同的材料，可以采取不同的方法，将待培养菌液经过适当稀释，涂布在平板上，经过培养后再平板上形成肉眼可见的菌落，由于待培养菌液样品往往不易完全分散成单个细胞，平板上形成的每个菌落不一定是单个细胞生长繁殖而成，有的可能来自两个或多个细胞，因此其最终目的是要在培养基上出现欲分离的微生物的单个菌落，再对单菌落进一步分离纯化，在稀释平板法分离微生物时，还可以同时测定待分离的微生物的数量。
三、材料用具1、样品：酸奶10ml2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）3、溶液试剂：10%的酚，盛有90ml水的三角烧瓶，用三角烧瓶装的100ml水。
4、仪器用具：三角烧瓶，无菌玻璃涂棒，培养皿，试管，接种环，1ml移液管，10ml移液管，酒精灯，电子天平，高压蒸汽灭菌锅等等。
四、实验步骤1、培养基的制备：根据牛肉膏蛋白胨培养基的配方比例，准确称取0.6g牛肉膏，2g蛋白胨，1g氯化钠，3~4g琼脂，200ml水溶解在三角烧瓶中，调节pH在7.0~7.2左右。
取两支试管，将培养基注入约1/5试管高度的，用塞子塞好。
2、高压灭菌：将盛有90ml水的三角烧瓶，装有100ml水的三角烧瓶，两支注入培养基的试管，试管，平皿，移液管等放入高压蒸汽灭菌锅内，用0.1MPa,121℃高温灭菌20分钟。
3、倒平板：灭菌结束取出后，待培养基冷却至55~60℃时，无菌操作倒入5个已灭菌的平皿中约15ml，加盖后轻轻摇匀培养基使其分布在平皿底部，平置于桌面上，待凝后即为平板。
将注入有培养基的试管倾斜使其中的培养基成斜面约占试管的一半左右，保持倾斜待凝后即制成培养斜面。
4、杆菌稀释液的制备：取5支试管分别准确加入9ml无菌水，再量取10ml酸奶，加入已灭菌的盛有90ml无菌水的三角烧瓶中即制成10﹣1稀释液，接着用无菌移液管吸取1ml稀释液加入装有9ml无菌水的试管中制成10-2稀释液，以此类推制成10-3、10-4、10-5、10-6几种稀释度的稀释液。
应用微生物学实验
应用微生物学实验————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：实验一、酸奶生产菌的分离纯化及应用一、实验目的和内容了解乳酸菌的生长特性，学习乳酸发酵和制作乳酸菌饮料的方法。
内容包括：1. 从新鲜酸乳中进行乳酸菌的分离纯化；2. 乳酸菌饮料制作；3. 自制乳酸饮料质量的品尝。
二、原理酸奶是采用优质纯鲜牛奶加入白糖均质，经超高温灭菌后接入乳酸菌发酵后制成的一种发酵型乳制品，具备鲜奶的全部营养成分，含有人体必需的蛋白质、脂肪、维生素、矿物质、乳糖酶和活性乳酸菌等。
在发酵过程中，鲜牛奶中的酪蛋白遇酸凝固，成为有弹性的凝块，颜色乳白、气味清香、酸甜可口，别具一番风味。
乳酸菌具有把奶类中的乳糖转化成乳酸的功能，称为乳酸发酵。
在形成乳酸的同时也产生其他一些酸类物质，从而导致了pH 值的下降，当达到乳类蛋白质的等电点时（如牛奶蛋白质的等电点约在pH4.5 左右），引起蛋白质的沉淀，使原来流动性较大的乳类，因凝固作用而变成类似果冻的胶状物，称之为“凝乳”。
不管是何种酸奶，其共同的特点都是含有乳酸菌。
这些乳酸菌在人体的肠道内繁殖时会分泌对人体健康有益的物质，因此酸奶对人体有较多的好处：一是能将牛奶中的乳糖和蛋白质分解，使人体更易消化和吸收；二是酸奶有促进胃液分泌、提高食欲、加强消化的功效；三是乳酸菌能减少某些致癌物质的产生，因而有防癌作用；四是能抑制肠道内腐败菌的繁殖，并减弱腐败菌在肠道内产生的毒素；五是有降低胆固醇的作用，特别适宜高血脂的人饮用。
和普通牛奶相比，酸奶的最大特点是含有大量活着的微生物，是具有生命力“活”着的特殊食品。
酸奶中的微生物根据它们功能分为2大类：1．发酵用乳酸菌：是指那些起源于奶制品长期用于酸奶制造的乳酸菌。
2．生物活性用乳酸菌：是近年从人体分离、驯化而成具有特定生物活性的乳酸菌，基本都是后述的益生菌。
乳酸菌的分离与纯化
乳酸菌的分离与纯化及土豆（大豆）发酵1．乳酸菌的种类、形态、生理生化特征乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。
大多数不运动，少数以周毛运动。
菌体常排列成链。
在其发酵产物中只有乳酸的称为同型乳酸发酵，而产物中除乳酸外还有较多乙酸、乙醇、CO２等物质的称为异型乳酸发酵。
有微好氧菌和专性厌氧菌。
根据细胞形态为球状或杆状，可分为两大类，即乳酸链球菌族（Strepto coccea e）和乳酸杆菌（Lactoba cillea e）。
乳酸链球菌族，菌体球状，通常成对或成链，在固体培养基上菌落较小，生长缓慢。
多数为同型发酵，如链球菌属（Strepto coccus），是与人类关系密切的重要菌群，有些菌是人和温血动物的致病菌；有些是人体的正常菌群存在于口腔和肠道；有些是乳制品及植物发酵食品中的常用菌，常在食品工业中使用，如乳链球菌（S．lactis）。
少数为异型发酵，如肠膜状明串珠菌（Leucono stocme senter oides）是制药工业上生产右旋糖酐（即代血浆）的重要菌种，但也是制糖工业的一种害菌，常使糖汁发粘稠而无法加工。
乳酸杆菌族，菌体杆状，单个或成链，有时成丝状、产生假分枝。
在BCG 牛乳培养基琼脂平板上，乳酸菌菌落大约1-3 mm，圆形隆起，表面光滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黄色；在产酸菌落周围还能产生CaCO3的溶解圈。
乳酸菌革兰氏染色呈阳性，涂片镜检细胞杆状或链球状。
2.实验材料2.1试验设备天平1个、牛角匙、电炉1个、 pH试纸（1套）、 100ml量筒（2个）、漏斗、漏斗架（1套）、玻璃棒（2根）、棉塞、培养基（15个）、无菌移液管（3支）、牛皮纸（5张）、线绳、标签、 500mL锥形瓶3个、 250mL锥形瓶2个、试管20只、 500mL烧杯2个、 250mL烧杯2个、 100mL烧杯2个、酒精灯2个、石棉网1个、接种针（环）2个。
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LUOYANG NORMAL UNIVERSITY2015届毕业论文乳酸菌的分离纯化及抑菌实验院（系）名称生命科学学院专业名称生物技术学生姓名勾倩倩学号111344045指导老师易力副教授完成时间2015年5月7日乳酸菌的分离纯化及抑菌实验勾倩倩生命科学学院生物技术专业学号：111344045指导教师：易立副教授摘要：本文对乳酸菌的分离纯化，革兰氏染色以及抑菌实验进行阐述，从市售酸菜中分离纯化得到乳酸菌，革兰氏染色进行鉴定，最后进行金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌实验！实验主要是分离纯化，革兰氏染色，最后用抑菌实验比较单菌株的抑菌能力。
关键词：乳酸菌：分离纯化；革兰氏染色；抑菌乳酸菌 (LA B ，Lactic acid bacteria)是指能使碳水化合物(主要为葡萄糖)发酵产生大量乳酸的细菌的通称，这类细菌生长在矿物质和有机营养丰富的微酸性环境中[1,2]。
在自然界中比较常见，用途广泛，它可以改善食物的风味，并延长食品的货架期，作为保健食品和药品，可以改善和提高人的健康水平，延年益寿，还可以作为微生物学和微生态学领域研究的模式生物[3]。
酸菜是世界性大众化蔬菜腌制品,在我国历史悠久[4]，其自然发酵的主要菌群是乳酸菌[5]。
人体在摄人发酵酸菜时，也同时摄入了大量的乳酸菌体及其代谢产物[6]。
乳酸菌是酸菜发酵过程中的有益菌，在发酵速度以及发酵产品品质等方面都起到至关重要的作用。
因此在微生物学和食品科学的研究中，对酸菜中乳酸菌进行鉴定是必要的[7]。
本实验从酸菜中分离纯化得到6株乳酸菌（1,2,3,4,5,6），进行革兰氏染色，为紫色杆状，最后进行抑菌实验，比较6株乳酸菌的抑菌能力。
1 材料与仪器1.1 菌种乳酸菌1.2 样品来源市售新鲜酸菜1.3 培养基（1）乳酸菌分离培养基（固体MRS培养基）：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖10g，磷酸氢二钾1g，柠檬酸铵1g，乙酸钠2.5g，硫酸镁0.29g，硫酸锰0.125g，吐温80 0.5 mL，琼脂8.5g，蒸馏水500mL，pH7.0（2）乳酸菌纯化培养基：MRS培养基+1%的碳酸钙溶液（碳酸钙1g，蒸馏水100mL）（3）乳酸菌富集培养培养基（液体MRS培养基）：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖10g，磷酸氢二钾1g，柠檬酸铵1g，乙酸钠2.5g，硫酸镁0.29g，硫酸锰0.125g，吐温80 0.5 mL，蒸馏水500mL，pH7.0（4）抑菌实验培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）：牛肉膏1.5g，蛋白胨5g，NaCl 2.5g，琼脂粉7.5g，水500mL，pH7.21.4 仪器及用具恒温培养箱，高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，培养皿，锥形瓶，移液枪，涂布棒，接种针2 方法与过程2.1 酸菜中菌种的分离培养（平板涂布法）吸取汤汁0.1ml，加入9ml无菌水中进行100倍稀释，依次做5个梯度，每个梯度分别取0.2ml涂布于灭好菌MRS培养基中，并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀，然后用封口膜封住培养皿，平放于试验台上20 min，然后倒置于37℃恒温箱中培养48h。
2.2 酸菜中菌种的纯化培养（平板划线法）48h无菌条件下，从培养基中挑选不同的菌落，放入1.5ml无菌水中稀释，用接种环挑取菌液，用平板划线法接入含有1%碳酸钙的MRS培养基，用封口膜密封培养皿，倒置放在37℃恒温培养箱中培养48小时。
2.3 革兰氏染色在洁净的载玻片上加蒸馏水一滴，然后用接种环分别挑选取少量培养基透明圈中的单菌落与水滴混匀，涂开，而后将此玻片在酒精灯火焰上通过3—4次，使细菌固定在载玻片上。
然后，加草酸铵结晶紫液，染1—2min，水洗并除尽水滴。
然后在涂片上滴加碘液，染1—2min除尽水滴。
而后在涂片上，滴加复红乙醇溶液，维持1min，水洗，用吸水纸轻轻吸干，最后进行油镜镜检。
2.4 抑菌实验首先用打孔器制作药敏片并高温灭菌。
然后把培养在液体培养基里的乳酸菌倒在灭过菌的培养皿上，做好的药敏片放在里边浸泡20分钟左右，拿出来沥干（药敏片仍然是湿的，但是没有水珠）。
其次，倒平板，分别涂布金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。
最后，每个培养皿放4个药敏片。
用封口膜密封培养皿，倒置放在37℃恒温培养箱中培养24小时。
2.5 保种甘油和乳酸菌菌液1:1放在冻存管中，放在冰箱—20℃保存。
3 实验结果3.1 分离培养结果乳酸菌菌落大约1-3 mm，圆形隆起，表面光滑，呈乳白色、灰白色或暗黄色。
3.2 纯化培养结果分离纯化放在一起，是一个统一的过程，需要看到的是单菌落照片，这几张照片没任何体现。
3.3 革兰氏染色结果紫色棒状乳酸菌，证乳酸菌为革兰氏阳性菌3.4 抑菌实验结果分离得到的6株乳酸菌金黄色葡萄球菌抑菌效果大肠杆菌抑菌效果4 数据分析表1 金黄色葡萄球菌抑菌圈直径长度分组 1 2 3 4 5 6 直径长度（cm）17 22 19 15 19 1614 15 18 14 18 1615 15 15 10 15 1318 14 13 12 11 15 平均值（cm）16 16.5 16.25 12.75 15.75 15表2 大肠杆菌抑菌圈直径长度分组 1 2 3 4 5 6 直径长度15 18 11 11 14 14 （cm）10 20 15 12 15 1311 16 13 12 14 1310 18 10 9 10 14 平均值11.5 18 12.25 11 13.25 13.5 （cm）表3 两种菌抑菌圈直径长度平均值比较1 2 3 4 5 616 16.5 16.25 12.75 15.75 15金黄色葡萄球菌抑菌圈平均值(cm)11.5 18 12.25 11 13.25 13.5大肠杆菌抑菌圈平均值(cm)13.75 17.25 14.25 11.875 14.5 14.25平均值（cm）通过表格可以看出抑菌效果有高到低依次排序为：2>5>3=6>1>45 讨论乳酸菌(LAB)及发酵产物数千年的利用历史及无毒副作用的优良品质使其被认为是GRAS(generally recognized as safe 公认安全) 菌[8]。
其发酵产物也是安全物质，特别是乳酸菌产生的细菌素具有光谱抑菌的作用，在将来能够替代化学防腐剂保藏食品，故乳酸菌及其发酵产物在食品工业上有极好的应用前景[9]。
近年来乳酸菌分离成为一个热门研究方向。
本文从市售酸菜中分离出来6株具有抑菌效果的乳酸菌，在实验过程中，要注意整个过程无菌操作，防止杂菌污染。
乳酸菌需要厌氧环境，需要用保鲜膜包裹。
参考文献：[1 ] 杨洁彬．乳酸菌一生物学基础及应用 [M ]．北京：中国轻工业出版社，1996：235—214．[2 ] 刘爱民．微生物资源与应用 [M ]．南京：东南大学出版社，2008（6）：19—27．[3] 张刚．乳酸细菌一基础、技术和应用[M ]．北京：化学工业出版，2006（10）：129—134．[4] 赵佳锐，杨虹．益生菌降解胆固醇的作用及机理研究进展[J]．微生物学报，2005，315—318．[5] R Martin，N Sober6n，F V 6zquez，eta1．La microbiota vaginal：com—Posici6n，papel protector，patologia asociada y perspectivas terap6u—ticas [J] ．Enfermedades Infecciosas y M icrobiologia Clinica，2008，26：160—167．[6] 燕平梅，薛文通，畅晓晖等．自然发酵和接种发酵方法对白菜品质的影响[J]．农业工程学报，2008，24(3 )：286—290．[7] 孙庆申，王艺，杨丽娟，吴桐，韩德权，曹相辉，李晓娣等．复合酸菜发酵剂乳酸菌的优选及鉴定[J]．黑龙江大学工程学报，2013，4（4）：35—40．[8] BURDOCKGA，CARABIN I G．Generally recognized as safe (GRAS)：history and description[J]．Toxicology letters，2004，150 (1)：3-18．[9] 胡美忠，张新卓，刘芸等．贵州铜仁产广谱抑菌作用细菌素乳酸菌的筛选及鉴定[J]．铜仁学院学报，2014,16（4）:32—36．Isolation and purification of lactic acid bacteria and inhibiting bacteriatestGou qianqianCollege of life sciences biotechnology professional learning: 111344045Supervisor: Associate Professor Yi LiAbstract：This article on separation and purification of lactic acid bacteria, Gram staining and bacteriostatic experiment of elaborate, separation and purification of lactic acid bacteria from the Sauerkraut on the market, Gram staining identification, and finally the bacteriostatic test of Staphylococcus aureus and Escherichia coli! Experiment is to isolate and purify the Gram-staining, and finally with bacteriostatic test compared to the bacteriostatic ability of strain.Key words：Lactic acid bacteria; isolation; purification and Gram staining; bacteriostatic Author：Gou qianqianStudent number：111344045Tutor：Yi li读书的好处1、行万里路，读万卷书。
2、书山有路勤为径，学海无涯苦作舟。
3、读书破万卷，下笔如有神。
4、我所学到的任何有价值的知识都是由自学中得来的。
——达尔文5、少壮不努力，老大徒悲伤。
6、黑发不知勤学早，白首方悔读书迟。