临床分子生物学检验

绪论

1.20世纪50年代，Waston和Crick提出了DNA双螺旋结构，标志着现代分子生物学的兴起。

2.从广义上来讲，应用到临床的分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物，目前，临床分子生物学检验的靶标主要以核酸（DNA或RNA）为主。

第一章：核酸与分子标志物

1.分子标志物：可以反映机体生理、病理状态的核酸、蛋白质、代谢产物等生物分子，是生物标志物的一种类型。

核酸分子标志物是分子生物学检验的主要内容，包括基因突变、DNA多态性、基因组DNA 片段、RNA和循环核酸等多种形式。

2.DNA的组成：是一种高分子化合物，其基本单位是脱氧核苷酸，每个核苷酸由磷酸、脱氧核糖和含氮碱基3部分组成。

3.DNA与RNA的区别：2位脱氢。

4.DNA的结构：①DNA一级结构：各种核苷酸单体沿多核苷酸链排列的顺序，表明该DNA 分子的化学构成。②DNA二级结构：双螺旋结构，DNA双螺旋的直径为2nm,一圈螺旋含10个碱基对，每一圈螺距为3.4nm，每个碱基的旋转角度为36度。维持DNA结构稳定的力量主要是碱基对之间的堆积力，碱基对之间的氢键也起着重要的作用。③DNA三级结构：DNA 双螺旋进一步盘曲形成的更加复杂的结构。

5.核小体的形成（真核生物染色体包装过程）：在核小体中,DNA盘绕组蛋白八聚体核心,使DNA缩短为原来的1/7；6个核小体形成螺丝管，缩短为1/6；核小体彼此相连成串珠状染色质细丝，螺旋化形成染色质纤维，进一步折叠成染色单体。

6.DNA双螺旋结构的变异：右手螺旋A-DNA、C-DNA、D-DNA、E-DNA、H-DNA、L-DNA、P-DNA，左手螺旋Z-DNA

7.RNA主要分为三类:tRNA、rRNA、mRNA 还有一些小型RNA：反义RNA、微小RNA （microRNA,miRNA是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA。）

8.真核mRNA与原核mRNA的区别（简答题）

原核mRNA结构简单，为多顺反子，编码序列之间有间隔序列，原核生物mRNA中没有修饰碱基。

真核生物mRNA为单顺反子结构，成熟的mRNA中5’端有帽子结构，3’端有polyA尾巴。

9.原核生物主要的rRNA（占细胞总RNA80%）有三种：5S、16S、23S；真核生物有四种5S、5.8S、18S和28S rRNA

10.基因：能编码有功能的蛋白质多肽链或合成RNA所必需的全部核酸序列，是核酸分子的功能单位。

11.顺式调节：一个基因的调控区和结构基因位于同一DNA分子的相邻部位，其作用是参与基因表达的调控。

12.启动子：一段位于结构基因5’端的上游的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确地结合并具有转录起始的特异性。

操纵序列（操纵元件）可被具有抑制转录作用的阻遏蛋白识别并结合

12.真核生物基因结构包括外显子和内含子，称为断裂基因

13.增强子：可位于基因的上游或下游，也可位于内含子中，它不能启动一个基因的转录，但有增强转录的作用

14:表观遗传：在DNA序列不发生改变的情况下，基因功能出现可逆的、可遗传的变化。包括组蛋白修饰（包括甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化、糖基化）、DNA甲基化、RNA干

扰等。

15.DNA甲基化：生物体在DNA甲基转移酶的催化下，将甲基转移到特定的碱基上的过程。DNA甲基化一般发生在CG双核苷酸的C上面。

16.基因突变类型：点突变、插入缺失、动态突变

17.错义突变：点突变改变了三联体密码子，导致基因产物中某个氨基酸被另一个氨基酸所取代。

18.无义突变（链终止突变）：DNA序列的改变使得编码某一氨基酸的密码子突变终止密码，则导致翻译过程提前终止。

19.基因组：一个细胞或一种生物体的整套遗传物质，包括基因和非编码DNA

20.原核生物基因组特征：

①基因组较小

②没有典型的细胞核结构

③操纵子结构是原核生物基因组的功能单位

④原核生物的结构基因中无内含子成分，不需要经过剪接加工过程

⑤具有编码同工酶的基因

⑥含有可移动DNA序列

21.质粒：指细菌细胞染色体以外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子。

22.转座因子（转座元件）：是一类在细菌染色体、质粒或噬菌体之间自行移动并具有转位特性的独立的DNA序列。

包括插入序列、转座子、Mu噬菌体

23.病毒基因组类型：

24.人类基因组包括：细胞核内的核基因组和细胞质内的线粒体基因组。

25.人类基因组的最大特征：存在大量的非编码序列和重复序列

26.多基因家族：由某一祖先基因经过重复和变异所产生的一组基因。

27.假基因：在多基因家族中，某些成员并不产生有功能的基因产物，这些基因称为假基因。

28.多态性：不同的个体之间，在基因组DNA序列上会存在差异，平均而言，一对同源染色体每1000个碱基就会出现一个碱基的差异(基因组中蛋白质编码区大概是每2500个碱基出现一个差异)。当某种变异相对常见，在群体中的频率高于1%时，则成为多态性。

29.人类基因组多态性形式：

①限制性片段长度多态性

②小卫星和微卫星多态性

③单核苷酸多态性

④拷贝数多态性

30. 单核苷酸多态性：在基因组水平上由单个核苷酸变异所引起的DNA序列多态性

第二章：核酸杂交技术

1.核酸分子杂交：单链的核酸分子在合适的条件下，与具有碱基互补序列的异源核酸形成双链杂交体的过程。

2.核酸分子杂交的基本原理：在一定条件下，双螺旋之间氢键断裂，DNA分子成为单链；将一种核酸单链标记成为探针，再与另一种核酸单链进行碱基互补配对，变性DNA只要消除变性条件，有碱基互补区域的单链又可以重新结合成双链，形成异源核酸分子的双链结构。

3.复性：变性DNA只要消除变性条件，有碱基互补区域的单链又可以重新结合成双链，这一过程称作复性。