中药多糖

1 中药复方多糖的简介

兽医中药复方是中兽医辨证论治理精髓的具体体现，是中兽医治病的主要临床形式。应用现代科学技术阐明兽医中药复方的组方原理、物质基础和作用机制是中兽医药现代化的需要，也是兽医中药复方研究的重点内容。

当前许多研究报道了运用中草药预防与治疗各种畜禽疾病,以促生长为主的中草药饲料添加剂,以及中草药作为免疫佐剂, 与畜禽疫苗(特别是禽用疫苗)同时使用,增强疫苗的免疫效果,提高动物机体抗病能力和生产能力。

多糖是由10个以上单糖通过糖苷键连接而成的聚糖，多糖作为药物始于1943年，到60年代作为广谱免疫促进剂而引起了医药界的广泛关注，而且越来越多的研究证明，多糖能治疗多种免疫缺损疾病、抗肿瘤、抗病毒如慢性病毒性肝炎、治疗诸如风湿病之类的自身免疫疾病等。

多糖是许多中药的主要免疫活性物质，已发现的具有免疫活性的多糖无毒副作用，来源广泛，因而多糖的研究最受重视，可望在未来免疫增效剂中占有一席之地。人们研究最早和最深入的是从微生物来源的多糖类，如香菇多糖、云芝多糖和裂褶菌多糖，已正式应用于临床。从中药中提取的多糖较多，如党参多糖、黄芪多糖、猪苓多糖、淫羊藿多糖和紫菜多糖等等。动物实验和临床实践证明，这些多糖均具有明显的免疫刺激作用。

2 多糖定量和定性检测方法

2.1定量测定

目前广泛采用的是苯酚-硫酸比色法。缺点是苯酚容易被氧化，临用前需对试剂进行纯化处理，否则容易影响测定结果的准确度。

仪器需要紫外-可见分光光度计、微量取液器。试剂需要葡萄糖(A. R)、无水乙醇(A. R)、苯酚(A. R)、浓硫酸(A. R)、碳酸氢钠(A. R)、待测多糖溶液。

苯酚的精制:取苯酚200g ,加铝片0. 2g和碳酸氢钠0. 1g ,蒸馏,收集182℃馏分。置棕色瓶中冰箱保存备用。

葡萄糖标液的配制:精密称取105℃干燥至恒重的葡萄100.0 mg用容量瓶配制成1.000 mg/ ml的标准溶液,精密吸取上述标液5. 00 ml置于50 ml容量瓶中,再加蒸馏水稀释到刻度,得1. 000×10 - 1mg/ ml葡萄糖标液。

精密吸取供试液0. 10 ml 或0. 20 ml置于10ml干燥比色管中,加蒸馏水至体积1. 00 ml ,加入苯酚试剂0. 50 ml ,混匀,迅速加入浓硫酸3. 00 ml ,即刻摇匀,放置5 min ,置沸水浴中加热15 min ,取出冷至室温。用紫外-可见分光光度计在420～550 nm波长范围内扫描,绘制零阶和一阶导数吸收光谱。

蒽酮-硫酸法也是常用的多糖定量方法，缺点是蒽酮试剂不稳定，溶液需临用配制，相比之下，本法优于苯酚-硫酸比色法。

2.2定性测定

a-萘酚试液（Molish）反应为普遍采用的多糖定性方法，但专属性差，无法对普通多糖、糖肽、糖蛋白及苷类作出专属鉴定。其他的理化性质包括溶解性、蒽酮-硫酸反应、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）络合反应、比旋光度、特性粘度、电导率和pH值等。

3 多糖的提取

多糖是极性大分子化合物，其分离纯化均是利用多糖溶于水或酸、碱、盐溶液而不溶于醇、醚、丙酮等有机溶剂的特点，先将原料物质脱脂与脱色素，然后用以水为主体的溶液如冷水、热水或冷的0.1-1mol/l氢氧化钠或氢氧化钾、热或冷的1%醋酸和1%苯酚等提取多

糖。也有用超声处理以加速多糖释放的提取方法。提取液经浓缩后以等量或数倍的甲醇或乙醚、丙酮等沉淀析出，所得的多糖经反复溶解与醇析。

提取时要防止降解，稀酸提取时间要短，温度最好不超过5。C。用碱提取时，为防止降解，常在N2气流下提取，或加入硼氢化钾、稀酸。稀碱提取液均应迅速中和或迅速透析，稀碱提取液还可用含酸酒精沉淀。含有糖醛酸或硫酸等基团的多糖，可在盐类或稀酸溶液中直接醇析，而使多糖以盐的形式或游离的形式析出。

得到粗制品后，可先做一些定性试验，以确定是否是多糖。如硫酸-苯酚颜色反应、蒽酮颜色反应、红外光谱测定等。

4 多糖的分离纯化方法

多糖一般采用热水或甲醇、乙醇提取, 脱除蛋白后, 用一定浓度乙醇沉淀, 沉淀物处理后再经过DEA E-纤维素、SenhadxeA 25、SenhadxeG50、DEAC2-Cellulose等柱层析分离纯化。

去小分子杂质：多用透析法，将多糖提取液置于半透膜透析袋中，逆向流水透析1-3d。

去蛋白：结合蛋白质的去除用蛋白酶，游离蛋白质的去除主要有Sevage法，三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法。前两种多用于微生物多糖，后者多用于植物多糖的分离纯化。

去色素等杂质：多糖中常含有一些色素，常用脱色的方法有离子交换法、氧化法、金属络合物法、吸附法，根据其不同性质采取不同方法。DEA E-纤维素是目前最常用的脱色方法，通过离子交换柱不仅达到脱色的目的，而且可以分离。吸附脱色法也常用，如通过活性碳、高岭土、硅藻土柱达到纯化的目的。