植物可溶性糖的测定

植物组织可溶性总糖的测定

2015-8-16

一、目的：测定植物组织中总糖（可溶性碳水化合物），用以研究体内能量储藏和渗透物质积累情况，检测范围为10-100ug/ml。因淀粉在超过45度可能糊化

水解，如果已知样品含淀粉较多，应考虑70%乙醇提取或冷水提取（不包括淀粉）或1:4盐酸水解（包括淀粉）。

二、样品前处理：鲜样要称重后105度烘干，称干重，计算含水量，粉碎。

三、可溶性总糖的提取：

干样测定完含水量后，称取样品0.25g，或鲜样2.50g，放入250ml 消煮管中，加水100ml，调整消煮炉温度约150-160度，煮沸30分钟，冷却，加水定容，

取上清液过滤，滤液或离心上清液以水稀释适当倍数（5-10倍左右）待测。 注：西红柿总糖：取1ml匀浆，用水稀释1000倍，取2ml测定。

四、测定

4.5.1试剂配制：

4.5.1.1 80%硫酸：200ml水加入到1000ml烧杯中，在搅拌和水冷条件下，缓慢加入800ml浓硫酸，冷却备用。

4.5.1.2 蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到1000ml 80%（V/V）硫酸中，搅拌均匀，冷却后备用。蒽酮试剂当日配制使用。

4.5.1.3 100μg/ml 葡萄糖标准液制作：称取0.0100g无水葡萄糖（分子量180.16）或者1水葡萄糖（分子量198.18）0.0110g溶于水中，加0.5ml浓硫酸，定容100ml。

4.5.2标准曲线

浓度μg/ml(ppm) 0 20 40 60 80 100 样品ml

葡萄糖标准液（ml） 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2

2 水 2 1.6 1.2 0.8 0.4 0

蒽酮试剂ml 8

4.5.3 总糖测定：取2ml提取液于试管中，在冷水浴中加8ml蒽酮试剂，沸水浴5分钟，取出迅速冷却，于625nm测定含糖量。同时取上表标准液2ml加8ml蒽酮同样测定。如果含糖量太低，可适当减低稀释倍数，如果糖含量太，可适当增加稀释倍数。此方法适于含糖量1-10%样品的测定，如果超过此含量，需稀释后测定，低于此含量，需增加称量样品。

4.5.4计算：糖%（干重）=测定浓度（ppm）*稀释倍数*提取体积ml/10000/w（g） 注意事项：

1、本方法能够测定所有可溶性碳水化合物，包括淀粉、纤维素等，不能有残渣进入分析系统。

2、加热时间对测定结果有影响。少量样品测定可以使用浓硫酸配制蒽酮试剂，加入样品后直接水浴，但如果样品量大，操作时间较长，需用80%硫酸配制蒽酮试剂，以减少发热，但要保证硫酸终浓度。