放射自显影基本原理与应用
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放射自显影基本原理和应用
（二）显微镜自显影（light microscopic
ARG）：又称光学显微镜自显影，是借助显 微镜进行组织或细胞学观察，分辨能力要求较 高。根据银颗粒来判断示踪剂的分布部位和数 量的多少。适用于组织切片、细胞涂片等标本 的研究。可以对不同细胞进行比较，并根据不 同示踪剂在不同时间的分布，研究细胞水平的 代谢过程。制备一般采用液体乳胶法。
因此适当控制显影时间可只使受照射的结
晶呈现黑色颗粒，定影的作用是洗去未感 光的银盐。
放射自显影基本原理和应用
（二）显影液和定影液
显影和定影是由显影液和定影液来完成的。 常用的显影液为D-19b，定影液为F-5。显 影液和定影液的温度应严格控制在19±1℃， 显影时间2-4min。显影结束后用水充分漂 洗，然后进行定影。定影时间4-8min，经 水充分冲洗后晾干。显影和定影的具体时 间可通过实践选定。
放射自显影基本原理和应用
（二）氚片（tritum film）
由溴化银、碘化银和明胶组成，银晶体颗 粒平均直径1μm，对低能β射线敏感度高， 对暗室的安全光也有相当耐受。乳胶涂在 醋酸纤维素酯片基的单面，乳胶面没有保 护层。使用时要注意保护乳胶层面，该面 直接与标本接触，以获得最佳灵敏度。主 要用于3H标记化合物的宏观自显影或低倍 光镜自显影。
放射自显影基本原理和应用
液体乳胶直接涂在标本或支持物上，多用于 光镜和电镜自显影。将液体核乳胶涂在玻片
上，可抽成核乳胶干板（nuclear emulsion
plate），再于标本接触形成自显影像，多用 于光镜自显影或宏观自显影。也可将干板将
乳胶层从玻片上揭下来，称为揭膜核乳胶
（stripping film emuslon），多用于定量的光 镜自显影。
Ag ……Ag →nAg 潜影经显影液和定影液处理即成为自显影图像。
放射自显影基本原理和应用
Βιβλιοθήκη Baidu
（二）潜影的消退
有潜影形成的结晶在显影液的作用下，溴 被洗去，银原子则留下来成一个黑色颗粒。 潜影如未及时显影，则在水、氧等作用下 还原的银原子会减少，使潜影消退。故曝
光应在干燥、低温、少氧的环境下进行。
核素 半衰期 射线类型 射线平均能量（MeV）
3H 12.33年
14C 5730年 32P 14.28天 35S 87.4天 45Ca 165天 59Fe 44.6天 125I 60.2天
β β β β β β β、γ
0.005 0.05 0.695 0.055 0.10 0.12 0.0037
选择放射性核素应考虑其射线种类、能量和半衰期。
放射自显影基本原理和应用
潜影形成步骤
1、发射电子：核射线与溴化银作用，使其电离，射 出电子，向敏化中心移动形成阴电层。
AgBr+β粒子→Ag++Br-+e2、 Ag+的还原：Ag+向敏化中心移动，与e-结合，还 原成银原子。
e-+Ag+ →Ag 3、潜影形成：还原的银原子起催化作用，致周围的 Ag+被还原，形成潜影。
放射自显影基本原理和应用
三、常用的感光材料
放射自显影常用的感光材料包括各种类型 的原子核乳胶、X线胶片、电影正片、氚片 或幻灯片。
放射自显影基本原理和应用
（一）原子核乳胶
简称核乳胶，由溴化银和明胶组成。常温 上呈半固体，低温为明胶状，温度升至 40℃左右为液态。使用时乳胶涂层厚度可 由乳胶量和稀释度（用去离子水稀释）进 行调节。
放射自显影基本原理和应用
（三）电子显微镜自显影（electron
microscopic ARG)：用于示踪剂在亚细胞结构 中分布情况的研究，能显示出普通显微镜观 察不到的细微结构与放射性核素分布的关系。 适用于细胞超微结构，甚至大分子（DNA 、 RNA）上的精确定位和定量，也可观察动态 过程。此类技术要求标本在100nm以下的超 薄切片，乳胶厚度仅相当银颗粒的直径（约 140nm）。
放射自显影基 本原理和应用
放射自显影基本原理和应用
定义：放射自显影是一种利用放射性核素发 射的射线，使乳胶中的卤化银感光而形成潜 影，经显影和定影，形成图像。借助感光银 颗粒所在的部位和强度，通过影像分析，能 准确地判断放射性示踪剂的分布部位和数量 （半定量），这种技术称为放射自显影术 （autoradiography）。这种技术得到的图像 称为放射自显影像（autoradiogram），以上 两种术语均可简称为放射自显影（ARG）。
放射自显影基本原理和应用
二、放射自显影的类型
（一）宏观自显影（macroscopic ARG）：
又称大体自显影，观察范围较大，分辨力 低，只能供肉眼或放大镜观察，或根据黑 度判断示踪剂的分布及相对数量。此种自 显影适用于小动物的整体标本，大动物的 整个脏器或肢体，以及层析板、免疫沉淀 板、骨骼、牙齿的磨片或剖面等的研究。
放射自显影基本原理和应用
五、照相处理
（一）显影和定影 （二）显影液和定影液 （三）干燥、染色和封固
放射自显影基本原理和应用
（一）显影和定影
感光材料与标本接触后，经射线的作用溴 化银晶体形成潜影，未受核射线作用的溴 化银则不形成潜影。这两种晶体经显影和
定影，才能将其区分。显影的作用是使银 盐还原，有潜影的结晶比无潜影者显影快，
放射自显影基本原理和应用
（三）X线片（X-ray film）
由溴化银、碘化银和明胶组成，银晶体颗粒 直径2.5μm，对射线分辨率较低，对暗室内 的安全光有一定的耐受。乳胶涂在醋酸纤维 素酯两面，外覆保护层。主要用于核素射线 能量较高的宏观自显影或低倍光镜自显影。
放射自显影基本原理和应用
四、常用的放射性核素
放射自显影基本原理和应用
第一节 基本原理
一、潜影的形成和消退 二、类型 三、常用的感光材料 四、常用的放射性核素 五、照相处理 六、放射自显影的分辨力 七、放射自显影的本底、效率
放射自显影基本原理和应用
一、潜影的形成和消退
（一）潜影形成的原理
放射自显影原理与光学摄影原理基本相似。 乳胶中的每颗溴化银晶体都是由Ag+和Br-的 点阵构成。在制作过程中，点阵存在缺陷， 这些缺陷即是潜影形成过程中的敏化中心。 射线与乳胶相互作用，引起电离作用，使 Ag+还原为Ag原子，形成潜影。
（二）显微镜自显影（light microscopic
ARG）：又称光学显微镜自显影，是借助显 微镜进行组织或细胞学观察，分辨能力要求较 高。根据银颗粒来判断示踪剂的分布部位和数 量的多少。适用于组织切片、细胞涂片等标本 的研究。可以对不同细胞进行比较，并根据不 同示踪剂在不同时间的分布，研究细胞水平的 代谢过程。制备一般采用液体乳胶法。
因此适当控制显影时间可只使受照射的结
晶呈现黑色颗粒，定影的作用是洗去未感 光的银盐。
放射自显影基本原理和应用
（二）显影液和定影液
显影和定影是由显影液和定影液来完成的。 常用的显影液为D-19b，定影液为F-5。显 影液和定影液的温度应严格控制在19±1℃， 显影时间2-4min。显影结束后用水充分漂 洗，然后进行定影。定影时间4-8min，经 水充分冲洗后晾干。显影和定影的具体时 间可通过实践选定。
放射自显影基本原理和应用
（二）氚片（tritum film）
由溴化银、碘化银和明胶组成，银晶体颗 粒平均直径1μm，对低能β射线敏感度高， 对暗室的安全光也有相当耐受。乳胶涂在 醋酸纤维素酯片基的单面，乳胶面没有保 护层。使用时要注意保护乳胶层面，该面 直接与标本接触，以获得最佳灵敏度。主 要用于3H标记化合物的宏观自显影或低倍 光镜自显影。
放射自显影基本原理和应用
液体乳胶直接涂在标本或支持物上，多用于 光镜和电镜自显影。将液体核乳胶涂在玻片
上，可抽成核乳胶干板（nuclear emulsion
plate），再于标本接触形成自显影像，多用 于光镜自显影或宏观自显影。也可将干板将
乳胶层从玻片上揭下来，称为揭膜核乳胶
（stripping film emuslon），多用于定量的光 镜自显影。
Ag ……Ag →nAg 潜影经显影液和定影液处理即成为自显影图像。
放射自显影基本原理和应用
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（二）潜影的消退
有潜影形成的结晶在显影液的作用下，溴 被洗去，银原子则留下来成一个黑色颗粒。 潜影如未及时显影，则在水、氧等作用下 还原的银原子会减少，使潜影消退。故曝
光应在干燥、低温、少氧的环境下进行。
核素 半衰期 射线类型 射线平均能量（MeV）
3H 12.33年
14C 5730年 32P 14.28天 35S 87.4天 45Ca 165天 59Fe 44.6天 125I 60.2天
β β β β β β β、γ
0.005 0.05 0.695 0.055 0.10 0.12 0.0037
选择放射性核素应考虑其射线种类、能量和半衰期。
放射自显影基本原理和应用
潜影形成步骤
1、发射电子：核射线与溴化银作用，使其电离，射 出电子，向敏化中心移动形成阴电层。
AgBr+β粒子→Ag++Br-+e2、 Ag+的还原：Ag+向敏化中心移动，与e-结合，还 原成银原子。
e-+Ag+ →Ag 3、潜影形成：还原的银原子起催化作用，致周围的 Ag+被还原，形成潜影。
放射自显影基本原理和应用
三、常用的感光材料
放射自显影常用的感光材料包括各种类型 的原子核乳胶、X线胶片、电影正片、氚片 或幻灯片。
放射自显影基本原理和应用
（一）原子核乳胶
简称核乳胶，由溴化银和明胶组成。常温 上呈半固体，低温为明胶状，温度升至 40℃左右为液态。使用时乳胶涂层厚度可 由乳胶量和稀释度（用去离子水稀释）进 行调节。
放射自显影基本原理和应用
（三）电子显微镜自显影（electron
microscopic ARG)：用于示踪剂在亚细胞结构 中分布情况的研究，能显示出普通显微镜观 察不到的细微结构与放射性核素分布的关系。 适用于细胞超微结构，甚至大分子（DNA 、 RNA）上的精确定位和定量，也可观察动态 过程。此类技术要求标本在100nm以下的超 薄切片，乳胶厚度仅相当银颗粒的直径（约 140nm）。
放射自显影基 本原理和应用
放射自显影基本原理和应用
定义：放射自显影是一种利用放射性核素发 射的射线，使乳胶中的卤化银感光而形成潜 影，经显影和定影，形成图像。借助感光银 颗粒所在的部位和强度，通过影像分析，能 准确地判断放射性示踪剂的分布部位和数量 （半定量），这种技术称为放射自显影术 （autoradiography）。这种技术得到的图像 称为放射自显影像（autoradiogram），以上 两种术语均可简称为放射自显影（ARG）。
放射自显影基本原理和应用
二、放射自显影的类型
（一）宏观自显影（macroscopic ARG）：
又称大体自显影，观察范围较大，分辨力 低，只能供肉眼或放大镜观察，或根据黑 度判断示踪剂的分布及相对数量。此种自 显影适用于小动物的整体标本，大动物的 整个脏器或肢体，以及层析板、免疫沉淀 板、骨骼、牙齿的磨片或剖面等的研究。
放射自显影基本原理和应用
五、照相处理
（一）显影和定影 （二）显影液和定影液 （三）干燥、染色和封固
放射自显影基本原理和应用
（一）显影和定影
感光材料与标本接触后，经射线的作用溴 化银晶体形成潜影，未受核射线作用的溴 化银则不形成潜影。这两种晶体经显影和
定影，才能将其区分。显影的作用是使银 盐还原，有潜影的结晶比无潜影者显影快，
放射自显影基本原理和应用
（三）X线片（X-ray film）
由溴化银、碘化银和明胶组成，银晶体颗粒 直径2.5μm，对射线分辨率较低，对暗室内 的安全光有一定的耐受。乳胶涂在醋酸纤维 素酯两面，外覆保护层。主要用于核素射线 能量较高的宏观自显影或低倍光镜自显影。
放射自显影基本原理和应用
四、常用的放射性核素
放射自显影基本原理和应用
第一节 基本原理
一、潜影的形成和消退 二、类型 三、常用的感光材料 四、常用的放射性核素 五、照相处理 六、放射自显影的分辨力 七、放射自显影的本底、效率
放射自显影基本原理和应用
一、潜影的形成和消退
（一）潜影形成的原理
放射自显影原理与光学摄影原理基本相似。 乳胶中的每颗溴化银晶体都是由Ag+和Br-的 点阵构成。在制作过程中，点阵存在缺陷， 这些缺陷即是潜影形成过程中的敏化中心。 射线与乳胶相互作用，引起电离作用，使 Ag+还原为Ag原子，形成潜影。