细胞说明书
3T3-L1 细胞说明书
小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1说明书目录号：SCSP-5038细胞名称：3T3-L1细胞描述：这株细胞是3T3（Swiss albino）通过克隆分离而得到的能连续传代的亚株，表达insulin受体。
当细胞从快速分裂到汇合和接触抑制状态的过程中，细胞会经历脂肪前向脂肪的转化。
培养基中的高血清含量会增加脂肪的积累。
检测表明鼠痘病毒（ectromelia virus，ECTV）阴性。
小鼠品系：Swiss albino细胞来源：2018年引进生物安全等级：BSL-1完全培养液配方：见下方备注批次/冻存日期：详见冻存管/培养瓶标识参考传代周期：3天左右参考传代比例：1:2-1:4参考换液频率：每周2次冻存液：完全培养液95%，DMSO5%细胞状态：成纤维细胞，贴壁生长。
支原体检测结果：阴性STR鉴定结果：①该株细胞DNA进行小鼠细胞STR分型结果显示，扩增后图谱清晰，分型结果良好：1-1：10,15；1-2：13；2-1：9；3-2：14；4-2：19.3；5-5：13,15；6-4：15.3；6-7：12, 15；7-1：25.2,29；8-1：15,16；11-2：15；12-1：19；13-1：15.1；15-3：20.3；17-2：12,15；18-3：17,21；19-2：12；X-1：26。
②该株细胞确为小鼠细胞，没有人源细胞污染。
小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1细胞照片参考文献：备注：1.小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1完全培养液配方（100ml）：DMEM(Invitrogen11960044)87mlNewborn calf serum(Ausbian)10mlGlutamax（invitrogen35050061）1mlNon-essential Amino Acids,100⨯(Invitrogen11140050)1mlSodium pyruvate100mM Solution（invitrogen11360070）1ml不可使用胎牛血清（FBS）2.该细胞起始接种密度应在3⨯103/cm2，并且在细胞达到80%融合或者密度介于5⨯104-6⨯104/cm2时传代，避免细胞完全融合。
TOP10 感受态细胞使用说明书
全国免费电话：400-818-1148TOP10 感受态细胞Cat. No. JH0102-3保存：-80℃组分说明产品简介本产品是大肠杆菌 TOP10 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于 DNA 的热击转化。
TOP10 是一种常用于质粒克隆的菌株，其 φ80lacZΔM15 基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。
使用 pUC19质粒检测，转化效率可达 108，适用于高效的质粒 DNA 克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。
注意事项1.转化所有步骤均在无菌条件下操作。
2.感受态细胞应在-80℃下保存，不可多次冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
3.包装中有0.1 ng/μl 的pUC19DNA ，供对照试验使用。
操作步骤1.取感受态细胞置于冰浴中。
一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl ，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100 μl 感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA （根据实际情况加入适量的DNA ，通常100 μl 感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA 所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3.42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4.向每个离心管中加入900 μl 无菌的SOC 或LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150 rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5.取100 μl 已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC 或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，直至干燥，倒置平板，37℃培养12-16小时。
注意：1） 涂布用量可根据具体实验调整。
若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300 μl 转化产物涂布平板。
若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm ，2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
人单核细胞THP-1说明书
人单核细胞THP-1说明书目录号：SCSP-567细胞名称：THP-1细胞描述：人单核细胞，急性髓细胞白血病。
该细胞来源于一岁男孩的外周血，对乳胶微粒和致敏红细胞有吞噬作用，可在佛波酯（TPA，也称为PMA，全名12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate）诱导下分化成为巨噬细胞。
物种：人，男性，1岁组织：外周血细胞来源：2014年引进生物安全等级：BSL-1完全培养液配方：见下方备注批次/冻存日期：详见冻存管/培养瓶标识参考传代比例：传代时控制细胞密度在2-4⨯105cell/mL，并在细胞生长至8-10⨯105cell/mL时进行传代参考传代周期：传代时控制细胞密度在2-4⨯105cell/mL，并在细胞生长至8-10⨯105cell/mL时进行传代参考换液频率：传代时换液冻存液配方：完全培养液95%，DMSO5%细胞形态：悬浮生长支原体检测结果：阴性STR鉴定结果：D5S818:11,12D13S317:13,13D7S820:10,10D16S539:11,12vWA:16,16THO1:8,9.3Amelogenin:X,YTPOX:8,11CSF1PO:11,13THP-1细胞照片参考文献：备注：1.人单核细胞THP-1完全培养液配方（100ml）：RPMI Medium1640(Invitrogen,11875-093)90mlFBS10mlβ-Mer(Invitrogen21985)0.05mM2.注意事项：a)该细胞为悬浮细胞，根据培养经验以及客户的反馈，传代时使用【半换液法】对细胞状态较为有利，因此我库建议您使用【半换液法】进行传代。
同时，您在收到细胞后，请不要通过离心的方式收集细胞，可以直接向培养瓶中添加等体积的新鲜培养液，然后将细胞吹打均匀后移入两个新的T25培养瓶中继续培养即可。
b)细胞对血清质量较为敏感，我库建议您使用进口大品牌优质血清进行培养。
C43(DE3)感受态细胞使用说明书
C43(DE3)感受态细胞使用说明书OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 产品说明书产品规格OverExpress C43(DE3) ： 10×100μlpUC19（control vector）：10pg/μl 10μl保存条件：-80℃基因型F–ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)产品说明OverExpress C43(DE3) 、OverExpress C41(DE3) 两个菌株均起源于 BL21(DE3) ，其优点是可以高效表达毒性蛋白或疏水性蛋白。
OverExpress C41(DE3) 跟BL21(DE3) 的区别在于其基因组含有至少一个未知突变，这个未知突变使其获得了高效表达毒性蛋白（1-5）的能力，此突变位点参与大肠杆菌表达毒性蛋白时的细胞死亡途径；OverExpressC43(DE3) 来源于OverExpress C41(DE3) ，是通过筛选OverExpress C41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株获得。
OverExpress C43(DE3) 菌株具有比OverExpress C41(DE3)更强的表达毒性蛋白和疏水性蛋白的能力，所以说OverExpress C43(DE3)菌株与BL21(DE3)相比拥有至少两个未知突变，正是这两个未知突变使其获得了更广泛的表达毒性蛋白或疏水性蛋白的能力。
此菌株含有DE3区，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。
High5TM系列OverExpress C43(DE3) 感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率可达5×108 cfu/μg DNA。
操作方法1. 取100 μl冰上融化的OverExpress C43(DE3)感受态细胞，加入目的DNA并用指尖轻轻拨打管底混匀(避免用枪吸打)，冰上静置25分钟。
hACE2-293T 细胞系说明书
hACE2-293T细胞系说明书
hACE2-293T细胞系说明书
货号RM02851
一、产品信息
【制备过程】hACE2高表达293T细胞系是用Lenti-hACE2预制病毒液感染293T细胞，加入抗生素blasticidin筛选后获得的单克隆293T细胞株。
【培养条件】高糖DMEM培养基+10%胎牛血清（推荐使用Gibco公司胎牛血清，货号10019-141c），37℃，5%CO2孵箱中培养。
【产品用途】与SARS-CoV-2假病毒液配合使用，通过评估假病毒携带的报告基因表达水平，来检测不同条件下（如添加新冠治疗药物或中和抗体情况下）假病毒对hACE2高表达293T细胞系的感染水平。
二、产品运输及保存
1.细胞系使用干冰运输。
2.细胞系需放置液氮中保存。
3.应避免反复冻融，以免造成细胞活性大幅降低。
三、安全须知：
工作人员应注意自身安全，须穿戴实验衣及手套并选择适当等级的无菌操作台(至少生物安全二级)后才能进行实验。
所有的操作、储存以及生物废料的处理均需依照公共发布的和所处机构制定的规范条例。
Vero细胞使用说明书
Vero细胞使用说明书产品基本信息产品货号YC-A001细胞名称Vero中文名称非洲绿猴肾细胞细胞形态上皮样,贴壁细胞传代比例1:3~1:6培养体系90%DMEM+10%FBS冻存液体系50%DMEM+40%FBS+10%DMSO特殊备注细胞接收1)冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮储存或短暂（24H)放至-80℃冰箱保存，或直接进行细胞复苏。
2)活细胞：如果是T25瓶活细胞运输，收到后用75%的酒精对T25瓶外表面进行消毒，之后放在5%CO2、37℃的细胞培养箱静置2h，静置后取出细胞瓶在显微镜下观察细胞贴壁情况和细胞汇合度，分别在100X和40X下各拍2个不同视野的细胞拍照记录。
如果汇合度达到80%以上的传代密度，可以进行传代操作，如果细胞汇合度没有达80%以上不够传代，弃掉瓶内培养基，更换新鲜完全培养基。
(灌满细胞培养基不能正常用来培养细胞。
)注意：收到细胞后，活细胞首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否漏液、浑浊等现象。
冻存细胞若发现干冰已挥发完、冻存管瓶盖脱落、破损等异常情况，请务必拍照保留，并于收货24h内与我们联系（电话：400-688-9033；https://）。
细胞复苏1)准备工作：将完全培养液置37℃水浴锅预热30分钟，随后将冻存的细胞从液氮中取出，转移到-80℃冰箱，放置数分钟让残余液氮挥发；2)在超净台内用吸管吸取6-7mL完全培养液至15mL离心管中；3)将细胞从-80℃冰箱取出暂时放置于干冰里，复苏时稍稍甩动，去除残留的干冰和液氮，再迅速用镊子夹住盖子放入37℃水浴中快速晃动（注意：水不能没过盖子），使其在1分钟左右完全融化；4)在超净台内，用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，稍稍晾干。
用单道移液器将所有融化的细胞悬液转至提前准备好的完全培养液中，盖上盖子，1100rpm室温离心4分钟收集细胞；5)超净台内小心吸弃上清，用单道移液器吸取1mL新鲜完全培养液重悬细胞至单细胞悬液，再转移至装有4mL完全培养液的T25cm2培养瓶(或者6cm的皿)中，写上细胞名称、复苏日期、代次，放置37℃、5%CO2饱和湿度培养箱内培养。
CD3CD56 nk细胞分选说明书
CD3CD56 nk细胞分选说明书
NK细胞全称自然杀伤细胞（Natural Killer Cell），具有细胞毒性和免疫调节双重功能。
NK细胞源自骨髓造血干细胞，通过识别自体MHC1分子的训练后获得区分“敌我”的能力。
NK细胞来源于CD34+共淋巴祖细胞。
据估计，NK细胞的半衰期大约为7~10天，它占人类外周血淋巴细胞总数的10-15%，也存在于脾脏、肝脏、肺、骨髓和淋巴结中，它们通过与DC细胞（树突状细胞）的相互作用发挥关键的免疫调节功能。
NK细胞是第一组固有淋巴样细胞的典型成员，聚集在一起，以获得分泌IFN-y的能力。
终末分化的NK细胞缺乏B淋巴细胞（CD19-）和T淋巴细胞（CD3-）的表型标记，CD56是NK细胞特征的标志。
通常，它们被区别出来从其大小，以及含有穿孔素和颗粒酶的细胞质颗粒，这是NK细胞杀伤活性的重要效应。
NK细胞根据CD56的表达水平被进一步区分：dim和bright。
CD56dim是一种完全成熟的NK细胞，占外周血NK细胞的90%，主要起介导细胞毒性的作用；另一方面，CD56 Bright是一种不成熟的细胞因子产生的细胞。
NK细胞缺乏基因重排抗原受体，但仍能识别和直接裂解异常细胞，无需事先致敏。
这是通过在NK细胞表面表达的一组成熟而独特的受体来实现的，这些受体通过与被感染和恶变的细胞上的配体相互作用而激活。
虽然配体仍未完全表征，但NK细胞受体的分类依据其作用：激活、抑制和混合功能。
它们还表达细胞因子受体，包括IL-2R、IL-4R、IL-10R、IL-12R、IL-15R、IL-18R和IL-21R
等，以及TGFβR。
Hela-EGFP稳转细胞株说明书
干冰运输细胞： 1、 37℃水浴融化细胞冻存液，间或摇动冻存管以加速融化
过程。待细胞冻存液完全融化后，用 70%乙醇消毒细胞 冻存管外壁。 2、 室温 200g 离心 5 分钟收集细胞。吸去上清。 3、 用 1ml 培养基重悬细胞。 4、 将细胞接种到 6mm 培养皿或 25cm 培养瓶中，补加 5ml 培养基，37℃ 5%CO2 培养。
细胞冻存： 1、 将细胞培养液、PBS 和胰蛋白酶和冻存液温浴到 37℃。 2、 冻存的细胞应为状态好，生长旺盛的细胞。 3、 按细胞传代方法消化细胞，用适量细胞培养液终止消化，
重悬细胞。 4、 室温 200g 离心 10 分钟收集细胞，用冻存液重悬细胞，
并调节浓度至大约 1×10^6 个细胞/ml。分装到细胞冻 存管。 5、 将细胞冻存管放入程序降温盒，‐80℃过夜。 6、 将冻存的细胞转入液氮中。
5、 第二天观察细胞贴壁情况，换液去除未贴壁细胞，继续 培养。
6、 细胞生长后及时消化传代，尽早冻存 1~2 支。
细胞传代： 1、 传代前将细胞培养液、PBS 和胰蛋白酶温浴到 37℃。 2、 吸去细胞培养液。 3、 用 PBS 漂洗一次。 4、 加入适量胰蛋白酶，轻轻晃动细胞瓶，使胰蛋白酶均匀
覆盖细胞。吸去胰蛋白酶，将培养瓶放置在细胞培养箱 中，37 摄氏度消化。在倒置显微镜下观察，看到细胞分 开及稍微变圆即可，过度消化可能导致细胞贴壁困难。 5、 加入 5ml 细胞培养基，用吸管轻柔吹打分散细胞。 6、 按 1:3 到 1:5 接种细胞。
培养基：DMEM 高糖培养基+10%胎牛血清 消化液：0.25%胰蛋白酶，0.53mM EDTA 冻存液：50%胎牛血清，40%DMEM，10%DMSO 培养条件：37℃，5% CO2
THP-1 (人急性单核白血病细胞) 产品说明书
THP -1 (人急性单核白血病细胞)产品编号 产品名称包装 C6960THP-1 (人急性单核白血病细胞)1支/瓶产品简介：Organism Tissue Morphology Culture Properties Homo sapiens (Human)Peripheral bloodRoundSuspension本细胞株详细信息如下:General Information Cell Line Name THP -1 (Human Acute Monocytic Leukemia Cells) Synonyms THP1; THP 1; THPI; THP -1(ATCC); Tohoku Hospital Pediatrics -1 Organism Homo sapiens (Human) Tissue Peripheral blood Cell Type Monocyte Morphology Round Disease Acute monocytic leukemia Strain － Biosafety Level* 1 Age at Sampling 1 year infantGender Male Genetics Fc,C3b receptor.HLA -A2,-A9,-B5,-DRW1,-DRW2. Ethnicity － Applications These cells are suitable as a transfection host. Category Cancer cell line* Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.CharacteristicsKaryotype － Virus Susceptibility－Derivation － Clinical Data－Antigen Expression HLA A2, A9, B5, DRw1, DRw2 Receptor ExpressionComplement (C3), expressed Oncogene －Genes Expressed Lysozyme,HLA A2, A9, B5, DRw1, DRw2Gene expression databases ArrayExpress: E-MTAB-2706; E-MTAB-2770; E-MTAB-3610; GEO: GSM236807; GSM236843; GSM482495; GSM887706; GSM888799; GSM1374962; GSM1446742; GSM1670543 Metastasis No Tumorigenic － Effects－CommentsThe cells are phagocytic (for both latex beads and sensitized erythrocytes) and lack surface and cytoplasmic immunoglobulin.Monocytic differentiation can be induced with the phorbol ester 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA).Culture Method Doubling Time26~70 hrsBeyotime Biotechnology 400-1683301800-8283301 e -mail *********************************** Methods for Passages Split cells to new flask with fresh medium. No need to treat them enzymatically to detach them from the surface of the culture vessel.Medium RPMI-1640+10% FBSSpecial Remarks－Medium Renewal Every 2 to 3 daysSubcultivation Ratio－Growth Condition95% air+ 5% CO2, 37ºCFreeze medium RPMI-1640+20% FBS+10% DMSO本细胞株经过支原体检测(Mycoplasma Test)，检测结果为阴性。
293ftm细胞培养说明书
293ftm细胞培养说明书293FT细胞培养说明书一、简介293FT细胞是一种常用的真核细胞系，常用于瞬时转染和稳定转染实验。
它们是源于人类胚胎肾上皮细胞系293的贴壁细胞，在培养过程中易于扩增和传代。
二、细胞特性1. 形态：293FT细胞呈圆形或椭圆形，直径约为10-20微米。
2. 生长特性：293FT细胞是贴壁生长的细胞，需要附着在培养瓶或培养板表面才能生长。
3. 生长温度：适宜温度为37°C，需在恒温培养箱中进行培养。
4. 培养基：需要使用含有适量血清（如胎牛血清）和抗生素的培养基。
三、培养条件1. 培养基：使用DMEM（高糖）培养基，添加10%胎牛血清、1% L-谷氨酰胺和1%青霉素/链霉素。
2. 培养环境：37°C、5% CO2和95%空气（细胞代谢必需的O2）。
3. 细胞传代：当细胞密度达到约80%时，进行传代。
用胰蛋白酶消化细胞，按合适的比例进行分瓶扩增。
4. 注意事项：避免频繁传代，以保持细胞的特性。
同时，应定期检查细胞培养物，确保无污染。
四、瞬时转染1. 准备转染试剂：按照转染试剂说明书进行准备。
2. 转染DNA：将目的DNA与转染试剂混合，加入到待转染的293FT细胞中。
3. 转染后处理：转染后的细胞需要在CO2培养箱中继续培养，并观察其生长状态和荧光表达情况。
4. 注意事项：瞬时转染的细胞一般只表达短暂的几天，因此需要定期观察和检测。
五、稳定转染1. 准备转染试剂：同瞬时转染。
2. 转染DNA：将带有目的基因的质粒DNA与转染试剂混合，加入到待转染的293FT细胞中。
3. 筛选稳定克隆：转染后，使用适当的筛选药物（如G418）筛选稳定表达目的基因的克隆。
4. 克隆扩增与保存：对筛选出的克隆进行扩增培养，并定期冻存以备后用。
5. 注意事项：稳定转染的细胞需要定期进行基因表达检测和克隆筛选。
六、常见问题与解决措施1. 细胞生长缓慢或死亡：检查培养基是否新鲜、无污染，确保血清的质量和浓度适宜。
CIK细胞使用说明书
CIK细胞使用说明书
1.物品准备：输血器、棉棒、碘伏；
2.CIK细胞在室温下（18-22℃）运输；
3.打开运输箱，取出小瓶 (细胞悬液体积约50ml/瓶)，共2瓶；
4.检查小瓶外观，注意观察有无漏液、破损。
用腕力震荡小瓶10次，使细胞充分混匀（注：因细胞悬液含有人血白蛋白，若震荡后细胞悬液泡沫增多为正常现象）；
5.CIK细胞回输前20分钟遵医嘱给予异丙嗪（非那根）25mg肌肉注射或地塞米松5mg静脉注射（次选）；
6.CIK细胞回输前应用输血器建立良好静脉通道，0.9％氯化钠溶液充分冲管；
7.CIK细胞回输时前15分钟滴注速度为30滴/min，15-30分钟滴注速度可增加为45滴/min，如患者无不适可逐渐提高滴速，最高不超过70滴/min，在1小时内输完；
8.滴注过程中每5～10 min轻轻晃动输液瓶，避免细胞沉降堆积，为了防止CIK细胞堵塞输血器的管腔或黏附管壁，应轻弹输血器的管壁并保持输液通畅，直至滴完，输注后再用生理盐水冲洗容器及管路，避免浪费制剂内的免疫细胞。
回输结束拔针后按压穿刺点10 min以上；
9.CIK细胞回输时加强巡视，注意倾听患者主诉，密切观察有无寒战、发热、心慌、胸闷及皮肤黏膜有无皮疹瘙痒等症状；
10.CIK细胞回输后2-6小时，患者可能出现发热，指导患者多饮水，松开被服等，一般持续3～6 h，自然减退，若体温高于39℃，可口服布洛芬、消炎痛或配合物理降温，若回输过程中病人出现休克、喉头痉挛可立即静脉注射激素；
11.CIK细胞治疗期间禁用免疫抑制剂；
12.CIK细胞治疗期间避免使用易引起过敏的药物，同时尽量少食易引起过敏的食物。
E.coli Competent Cells stbl3感受态细胞使用说明书
GeneCopoeia TMExpressway to DiscoveryGeneCopoeia Inc.9620 Medical Center Drive, Suite 101Rockville, MD20850, USATel: +1(301)762-0888;To l l f r e e:+1(301)762-3888Fax:+1(301)762-3888Web: E.coli Competent Cells stbl3™产品套装编号：CC003产品内容产品编号包装规格Competent Cells stbl3 CC001-01 100 μl×10Control DNA（pUC19，10 pg/μl） CC003-02 50 μl×1储存条件：-80℃保存 保存时间： 12 个月■ 产品概述：常规质粒制备的宿主菌，可进行蓝白斑筛选；复制慢病毒载体系统推荐使用的菌株，对慢病毒载体等较大的质粒转 化的效果好，有效减低错误重组的可能性。
■ Genotype：F- mcrB mrr hsdS20 (rB-, mB- ) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 (Strr ) xyl -5 - leu mtl-1.■ 细胞种类：大肠杆菌Stbl3™菌株能有效地抑制长片段末端重复区的重组，非常适合于含有同向重复序列的慢病毒和其他反转录 病毒载体的复制。
此外，细胞非常稳定，能提高慢病毒载体或其他不稳定载体的克隆效率。
■ 转化效率：我们提供的感受态的转化效率>1 X 108 transformants/1 μg PUC19 Plasmid也就是，当您以100 μl Competent Cells Stbl3/ 10 pg pUC19 Plasmid 进行转化,产生的菌落数＞1000 trans formants■ 使用步骤：1. 把感受态细胞置于冰中解冻；2. 把50-100 µl的感受态细胞移至灭菌处理的试管内；3. 加入用于转化的DNA或反应产物（10 ng以下）；4. 冰中放置30分钟；5. 42℃ 放置30～60秒；6. 冰中放置2～3分钟；7. 加入37℃预温好的SOC培养基，使终体积为1 ml；8. 37℃振荡培养1小时（160～225 rpm）；9. 取适量涂布琼脂平板培养基；10. 37℃过夜培养。
感受态细胞说明书
● 细胞浓度
1-2×109 cells/ml
●保 存
-80℃ 注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化降低将会降低。请使用附带的 pUC19 对
照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。
● 参考文献
Hanahan, D. (1983) J.Mol.Biol. 166, 557.
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
● 使用方法
质粒载体转化 1. E.coli DH5α Competent Cells 使用前在冰上融化。 2. 轻微混匀，取 100 μl 装入 14 ml 圆底 tube 中（BD Falcon 352059 或 352057）。
注意：不能剧烈震荡混合细胞。 3. 加入 DNA 样品（建议≤10 ng）。 4. 冰中放置 30 分钟。 5. 42℃放置 45 秒。 6. 冰中放置 1-2 分钟。 7. 添加 SOC 培养基（预先在 37℃保温）至终体积 1 ml。 8. 37℃振荡培养 1 小时（160-225 rpm）。 9. 取适量涂布于选择培养基*。 10. 37℃过夜培养。
● β-半乳糖苷酶的α-互补性
当使用 pUC19 plasmid 进行转化时，含有 100 μg/ml Ampicillin 和 60 μg/ml X-Gal 的 L-agar plate 出 现蓝色菌落。
● Genotype
E.coli DH5α : F−, φ 80dlacZ ΔM15, Δ(lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK−, mK+), phoA, supE44 , λ−, thi -1, gyrA96 , relA1
新景生物 DH5α 感受态细胞 说明书
产品组成DH5α感受态细胞Cat.No.10支830101020支8301020DH5α感受态细胞100µl×10支100µl×20支Control DNA（pUC19，0.1ng/μl）10μl×1支20μl×1支说明书1份1份产品运输与储存1.感受态细胞必须用干冰运输，融化后的感受态细胞不能再冻结储存。
如果用户收到感受态细胞后发现泡沫箱中的干冰已经挥发殆尽，应予以拒收。
2.收到感受态细胞后应立即储存于-70℃或更低温度的冰箱中，在6个月内使用不影响转化效率；感受态细胞不可反复冻融，不要与限制性内切酶等经常使用的分子生物学试剂放在一起，避免因温度的波动而影响的效率。
技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：，电话：400-0099-857。
产品介绍本公司生产的DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。
经pUC19质粒检测，转化效率可达108cfu/μg。
每支感受态可以酌情分装使用，以降低实验的成本。
DH5α菌株介绍基因型：F-，φ80，lacZ△M15，△(lacZYA-argF)U169，endA1，recA1，hsdR17(rk-,mk+)，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1，phoA。
特点：本菌株是一种常用于质粒克隆的菌株。
其φ80、lacZ△M15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，用于蓝白斑筛选。
recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
质量标准1.使用1ng pUC19Plasmid质粒DNA转化100µl Competent Cells DH5α测试，产生的菌落数＞1×108transformants/1µg pUC19Plasmid。
2.β-半乳糖苷酶、α-互补性的确认：对E.coli Competent Cells DH5α使用pUC19DNA进行转化后，在含有100µg/ml的Ampicillin、40µg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上，产生蓝色菌落。
细胞说明书（huvec）
细胞说明书（HUVEC）
细胞名称：HUVEC（中文名称：人脐静脉内皮细胞）
细胞简介：HUVEC细胞为人脐静脉内皮细胞，来源于人脐静脉，中文名为人脐静脉内皮细胞，正常的细胞形态为上皮样，贴壁生长。
培养方法：
冻存方法：
For research use only
T25瓶细胞处理方法
收到细胞后，检查外包装是否完整，细胞培养瓶是否完好。
如有破损漏液等问题，请即时联系
我们。
1.75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。
2.肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（40
×,100×,200×各一张）。
3.将细胞放入37度培养箱中预温1-2小时后再做处理，以稳定细胞状态。
4.预热培养基（含10%胎牛血清，1%双抗）。
5.若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。
每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。
放
到37度培养箱培养。
待细胞密度达到80%以上，进行传代。
6.若细胞密度较大，达到80%以上，将细胞传到10cm培养皿培养。
7.传代时，T25瓶里保留部分细胞，同步培养，直到能确保10cm培养皿中的细胞状态良
好。
293f细胞培养说明书
293f细胞培养说明书一、引言293f细胞是一种广泛应用于生物学研究的细胞系。
它是293细胞的改良版本，具有更高的细胞密度和更好的生长性能。
本说明书旨在介绍293f细胞的培养方法及注意事项，帮助研究人员正确并高效地进行293f细胞的培养。
二、培养基与培养条件1. 培养基选择293f细胞适用于常规细胞培养基，如DMEM、RPMI-1640等。
添加10%胎牛血清（FBS）或者5%去胎牛血清（FCS）可提供细胞所需的营养物质和生长因子。
2. 培养条件293f细胞的生长温度为37℃，CO2浓度为5%。
维持适当的温度和CO2浓度有助于细胞的正常生长和增殖。
三、293f细胞的传代与分裂比1. 传代方法当细胞密度达到80%～90%时，可进行细胞传代。
将细胞培养液抽取至离心管中，进行离心，去除上清，用PBS洗涤细胞，加入适量的消化液（如胰蛋白酶/EDTA溶液），在37℃下消化一段时间。
观察细胞的解聚情况，停止消化，并用培养基中和消化液。
离心沉淀，去除上清，用PBS洗涤细胞，将细胞悬浮于新鲜的培养基中，按比例重新分装。
2. 分裂比293f细胞的分裂比一般为1:5至1:10，取决于细胞的生长状态和实验需求。
合理的分裂比有助于维持细胞的正常生长和稳定的细胞株。
四、细胞的凝聚与冻存1. 细胞凝聚293f细胞在培养过程中可能会出现凝聚现象，这可能是由于细胞浓度过高或细胞培养条件不合适所致。
可通过调节培养基的成分或细胞密度，以及增加培养器具的表面涂层等方式来减少细胞的凝聚。
2. 细胞冻存为了长期保存293f细胞，可以进行细胞的冻存。
首先，将细胞培养至80%～90%的密度，用PBS洗涤细胞，加入适量的冻存液（如10% DMSO和90% FBS混合液），将细胞悬浮于冻存液中，分装至冻存管中，迅速放入液氮中保存。
五、细胞培养中的注意事项1. 无菌操作在细胞培养过程中，保持无菌操作是非常重要的。
使用无菌器具、培养基和试剂，并在洁净的操作台上进行操作，以防止细胞受到污染。
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细胞说明书
一、细胞名称：HaCaT
二、货号：BNCC101683
三、生长特性：■贴壁□悬浮□半悬浮半贴壁
四、细胞生长条件：
五、组成：
六、细胞接收后的操作流程与注意事项
1. 细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度，换液培养或传代。
2. 如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞及时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基，培养2-3天。
若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡，请及时联系实验室，技术人员会跟进解决。
3. 贴壁细胞生长缓慢：适当提高血清浓度（最高不超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养。
4. 生长不均：贴壁细胞若出现生长不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重新打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。
七、细胞常规培养传代流程（请严格遵守无菌操作）
1. 吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加1~2 ml 0.25% EDTA的胰酶消化（注意把握消化时间，通常控制在1~2min）。
2. 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁运动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml 完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散。
3. 取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，于培养箱中培养。
4. 注意培养基PH值变化情况，定期换液，待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。
特别注意：（如使用公共实验室或初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）
1. 收到细胞后请尽快更换为含10% FBS的新鲜培养基，不建议使用原瓶中运输用培养基。
2. 如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时拍照并联系实验室。
3. 细胞任何售后问题，均需拍照存档并及时联系客服。
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