细菌内毒素标准品标定

将准备好的鲎试剂取其中 18（管）放在试管架上，排成 5 列，其中 4 列 4 支
（管），1 列 2 支（管），4 支（管）4 列每列每支分别加入 0.1ml 的 2λ、λ、0.5λ
和 0.25λ 的内毒素标准溶液；另 2 支（管）加入 0.1ml 检查用水。加样具体操
作如下表：
国家标准品浓 0.25 度（EU/ml） 平行管 1（ml） 0.1 平行管 2（ml） 0.1 平行管 3（ml） 0.1 平行管 4（ml） 0.1
0.125
0.1 0.1 0.1 0.1
0.0625
0.03
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
细菌内毒素 检查用水 0.1
0.1
将准备好的另外 18（管）鲎试剂放在另一个试管架上，排成 5 列，其中 4 列 4 支（管），1 列 2 支（管），4 支（管）4 列每列每支分别加入 0.1ml 的 640 倍、
Pt =1g－1(∑X/4)×1g－1(∑D/4)
式中 X 为细菌内毒素国家标准品反应终点浓度的对数值 1g
D 为细菌内毒素工作标准品反应终点浓度对应的稀释倍
数的对数值 1g
凝胶或凝胶不能保持完整并从管壁脱者为阴性，记录为（－）。保温或拿取试管
过程应避免受到震动造成假阴性结果。
国 家 标 准 品 0.25
0.125
0.0625
0.03
NC
浓度（EU/ml）
λc
平行管 1
平行管 2
平行管 3
平行管 4
工 作 标 准 640
1280
2560
5120
NC
Pt
品稀释倍
数
平行管 1 平行管 2 平行管 3 平行管 4） 效价计算： 待标工作标准品的标定效价 Pt 按下式进行计算：
1280 倍（0.125 EU/ml）、2560 倍（0.0625 EU/ml）和 5120 倍（ 0.03 EU/ml）备用，每稀释
一步均应在旋涡混合器上混合 30 秒。具体稀释步骤如下：
160 0.2 16 0.5 8 0.2 1 0.5 0.25 1 0.125 1 0.0625 1 0.03
0.1
0.1
0.1
0.1
平行管 4（ml） 0.1
0.1
0.1
0.1
பைடு நூலகம்
加样结束后，将鲎试剂管轻轻振动摇匀，避免产生气泡，放入试管恒温仪中，37℃±1℃
保温 60±2 分钟。
2.3 结果记录
将试管架从水浴中轻轻取出，避免振动，将每管拿出缓缓倒转 180°观察，
管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；未形成
1280 倍、2560 倍、5120 倍的内毒素溶液；另 2 支（管）加入 0.1ml 检查用水。 加样具体操作如下：
工 作 标 准 品 640
1280
2560
5120
细菌内毒素
稀释倍数
检查用水
平行管 1（ml） 0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
平行管 2（ml） 0.1
0.1
0.1
0.1
平行管 3（ml） 0.1
1.试剂和样品 鲎试剂（生产厂家：湛江安度斯生物有限公司，批号：1112202，灵敏度：0.125EU/ml， 规格：0.1 ml/支） 细菌内毒素检查用水（生产厂家：湛江安度斯生物有限公司，批号：1106130， 规格：5 ml/支） 细菌内毒素工作标准品（P=160EU/支，生产厂家：中国药品生物制品检定所 批号：150601-201174） 细菌内毒素国家标准品（10000 EU/支，生产厂家：中国药品生物制品检定所 批号：150600-200707） 2.操作步骤 2.1 细菌内毒素国家标准品稀释、细毒内毒素工作标准品稀释 将细菌内毒素国家标准品用 1ml 细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合仪上混合 15 分钟， 然后制备成 4 个浓度的标准内毒素溶液，即 0.25 EU/ml、0.125 EU/ml、0.0625 EU/ml 和 0.03 EU/ml 备用，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合 30 秒。具体稀释步骤如下：
1.8 0.5 1.4 1.5 1
1
1
以上细菌内毒素国家标准品和细菌内毒素工作标准品需同时进行。
2.2 加样
取规格为 0.1ml/支的鲎试剂 36 支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用砂轮在
瓶颈轻轻划痕，70%异丙醇棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。每支加
入 0.1ml 检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡
10000 0.2 10 0.2 1 0.5 0.25 1 0.1251 0.0625 1 0.03
1.8 1.8 1.5 1
1
1
待复核的细菌内毒素工作标准品标示效价为 160 EU，用 1ml 细菌内毒素检查用水溶解，在
旋涡混合仪上混合 15 分钟，然后制备成 4 个浓度的内毒素溶液，即 640 倍（0.25 EU/ml）、