QCB细菌内毒素工作标准品标定操作规程

QCB细菌内毒素工作标准品标定操作规程

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标题：

1.目的

2.范围

3.职责

4.参考资

料

5.定义

6.细菌内

毒素工

作标准

品效价

的标定标题：正文

规范细菌内毒素工作标准品效价的标定程序，确保细菌内毒素检查结果的可靠性。

适用于质监处药理室对细菌内毒素工作标准品效价的标定。

质监处药理室分析人员负责本规程的实施和完成相关记录。

USP版附录85；

CP版附录Ⅺ E 。

细菌内毒素检查法：本法系利用从鲎的变形细胞中提取的试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的含量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。

鲎试剂：是鲎变形细胞的溶出物经提取而成。

鲎试剂灵敏度：在本检查法规定的条件下能检测出内毒素标准溶液或供试品溶液中的最低内毒素浓度，用EU/ml表示。

细菌内毒素检查用水(BET水)：系指与灵敏度为0.03EU/ml 或更高灵敏度的鲎试剂在37±1 ︒C 条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。

细菌内毒素参考标准品(RSE)：RSE 是USP细菌内毒素参考标准品，每瓶有10,000个USP 内毒素单位。

细菌内毒素工作标准品(CSE)：是除RSE 之外的内毒素标准品。

反应终点浓度：是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈现阳性结果的浓度。

一、试剂、材料与仪器设备

试剂：

鲎试剂批号、灵敏度、规格、生产商。

细菌内毒素检查用水(BET水) 批号、规格、生产商。

细菌内毒素工作标准品(CSE) 批号、效价、生产商。

细菌内毒素参考标准品(RSE) 批号、效价、生产商。

材料及仪器设备：

电热恒温水箱型号、设备编号。

电热鼓风干燥箱型号、设备编号。

正文

漩涡混合器型号。

无热原试管规格：10⨯75mm。

无热原玻璃瓶规格：25ml。

无热原玻璃吸管规格：1ml、2ml、5ml、10ml。

标题：

试管架、无热原封口膜、洗耳球、酒精棉球、砂轮片。

二、试验准备

试验所用的容器、用具都必须经过处理，250︒C以上干烤至少1小时，以去除外源性内毒素。试验操作过程应避免微生物的污染。

三、内毒素溶液配制

USP细菌内毒素参考标准品(RSE)系列溶液配制取RSE 1瓶，加入5ml细菌内毒素检查用水溶解并用漩涡混合器间歇混匀30分钟，然后用细菌内毒素检查用水进一步稀释至 2.0λ、λ、 0.5λ、 0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每一步稀释应混匀至少30秒钟。

细菌内毒素工作标准品(CSE)系列溶液配制取待测CSE 1支，以eu为单位(避免和参考标准品的效价EU混肴，而采用eu)，按使用说明书要求用细菌内毒素检查用水溶解并用漩涡混合器间歇混匀30分钟，然后用细菌内毒素检查用水进一步稀释成至

2.0λ、λ、 0.5λ、 0.25λ四个浓度的内毒素溶液，每一步稀释应混匀至少30秒钟。

四、试验过程

取同一批号的鲎试剂原安瓿34支，分别用0.1ml细菌内毒素检查用水复溶。其中16支加入0.1ml USP细菌内毒素系列标准溶液，每浓度溶液平行做4支；16支加入0.1ml 细菌内毒素工作标准品系列溶液，每浓度溶液平行做4支。另外2支加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。将安瓿中的溶液轻轻混匀后，用封口膜封闭管口，垂直放入37±1℃电热恒温水箱中，保温60±2分钟。反应结果记录在细菌内毒素工作标准品标定试验记录中。

五、试验结果观察和有效性

结果观察将安瓿从电热恒温水箱中轻轻取出，缓缓倒转180°时，管内凝胶不变正文

形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为(+)；凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为(–)。保温和拿取安瓿过程应避免受到振动造成假阴性结果。

有效性对于参考标准品内毒素系列和被标定的工作标准品内毒素系列，如果最大浓度2.0λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管均为阴性，试验方为有效。

六、细菌内毒素工作标准品标定结果的计算

计算公式为：

-1

-1

lg(/4)

lg(/4)

RSE

CSE

CSE

E

P CSE

E

∑

=⨯

∑

标示效价

7.细菌内

毒素工

作标准

品的有

效期8.细菌内

毒素工

作标准

品的保

存

9.需标定

的情况10.相关记

录

式中 E

RSE

为USP 细菌内毒素参考标准品反应终点浓度(EU/ml)，

E

CSE

为细菌内毒素工作标准品反应终点浓度(eu/ml)，

P

CSE

为细菌内毒素工作标准品的标定效价，其单位为EU/瓶。

七、结论

细菌内毒素工作标准品必须经标定后，方可用于鲎试剂灵敏度的复核及细菌内毒

素检查，并以计算结果P

CSE

作为该批细菌内毒素工作标准品的效价。

细菌内毒素工作标准品有效期按厂家规定执行；若厂家未规定有效期，至标定后两年，到期后需重新标定方可以新标定效价继续使用。

细菌内毒素工作标准品应在4～8℃条件下保存。

当细菌内毒素参考标准品(RSE)批号改变时。

当细菌内毒素工作标准品批号改变时。

细菌内毒素工作标准品标定记录(表格编号：QCFP04-06)