比色分析的基本原理

（朗伯-比尔定律,吸光度，消光度，吸光系数）

（关键词：比色分析，吸光光度法，光电比色法，分光光度法，朗伯-比尔定律，吸光度，消光度，吸光系数）比色分析是基于溶液对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法，又称吸光光度法。

有色物质溶液的颜色与其浓度有关。溶液的浓度越大，颜色越深。利用光学比较溶液颜色的深度，可以测定溶液的浓度。

根据吸收光的波长范围不同以及所使用的仪器精密程度，可分为光电比色法和分光光度法等。

比色分析具有简单、快速、灵敏度高等特点，广泛应用于微量组分的测定。通常中测定含量在10-1〜10-4mg-L-1的痕量组分。比色分析如同其他仪器分析一样，也具有相对误差较大（一般为1%- 5%的缺点。但对于微量组分测定来说，由于绝对误差很小，测定结果也是令人满意的。在现代仪器分析中，有60%

左右采用或部分采用了这种分析方法。在医学学科中，比色分析也被广泛应用于药物分析、卫生分析、生化分析等方面。

一、物质的颜色和光的关系

光是一种电磁波。自然是由不同波长（400~ 700nm）的电磁波按一定比例组成的混合光，通过棱镜可

分解成红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种颜色相连续的可见光谱。如把两种光以适当比例混合而产生白光感觉时，则这两种光的颜色互为补色。图8-1中处于同一直线关系的两种色光（如绿与紫、黄与蓝）互

为补色。

当白光通过溶液时，如果溶液对各种波长的光都不吸收，溶液就没有颜色。如果溶液吸收了其中一部

分波长的光，则溶液就蜈现透过溶液后剩余部分光的颜色。例如，我们看到KMn0溶液在白光下呈紫红色，

就是因为白光透过溶液时，绿色光大部分被吸收，而其他各色都能透过。在透过的光中除紫红色外都能两两互补成白色，所以KMnO4溶液呈现紫红色。

同理，CuS04溶液能吸收黄色光，所以溶液呈蓝色。由此可见，有色溶液的颜色是被吸收光颜色的补色。吸收越多，则补色的颜色越深。比较溶液颜色的深度，实质上就是比较溶液对它所吸收光的吸收程度。表8-1列岀了溶液的颜色与吸收光颜色的关系。

表8-1 溶液的颜色与吸收光颜色的关系

、朗伯-比尔（Lambert-Beer ）定律

当一束平行单色光（只有一种波长的光）照射有色溶液时，光的一部分被吸收，一部分透过溶液（图

8-2 ）。

图8-2 光吸收示意图

设入射光的强度为10,溶液的浓度为c,液层的厚度为b,透射光强度为I，则

（8-1）

式中lgI o/I表示光线透过溶液时被吸收的程度，一般称为吸光度（A）或消光度（E）。因此，上式又

可写为：

A=Kcb（8-2）

上式为朗伯-比尔定律的数学表示式。它表示一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。

式中，K为吸光系数，当溶液浓度c和液层厚度b的数值均为1时，A=K,即吸光系数在数值上等于 c 和b均为1时溶液的吸光度。对于同一物质和一定波长的入射光而言，它是一个常数。

比色法中常把称为透光度，用T 表示，透光度和吸光度的关

系如下：

（8-3 ）

当c以mol・L -1为单位时，吸光系数称为摩尔吸光系数，用e表示，其单位是L - mol-1- cm-1。当c

以质量体积浓度（g • ml -1）表示时，吸光系数称为百分吸光系数，用E1%1cn表示，单位是ml・g-" cm1。

吸光系数越大，表示溶液对入射光越容易吸收，当c有微小变化时就可使A有较大的改变，故测定的灵敏

度较高。一般e 值在103 以上即可进行比色分析。

如果测定某种物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图可得一条曲线，即物质对光的吸收曲线，可准确地描述物质对光的吸收情况。

图8-3是几种不同浓度的KMnO4溶液的吸收曲线，溶液对波长525nm附近的绿光吸收量最强，而对其他波长的光吸收较弱。光吸收程度最大处的波长叫做吸收波长，用入max表示。不同浓度的KMnO4溶液所得的吸收曲线，最大吸收波长都一致，只是相应的光被吸收的程度不同。

吸收曲线可作为比色分析中波长选定的依据，测定时一般选择入max的单色光作为入射光。这样即使

被测物质含量较低也可得到较大的吸光度，因而可使分析的灵每度较高。

若所测定的溶液无色，可在测定前加入适当的显色剂，通过与待测成分的化学反应使溶液晱色即可测定此待测成分。

例如，已知在525nm处KnQ溶液的£=2235L・ mol -1• cm-1，若用2cm比色皿，为使所测得的透光率介于

20%-65%之间，溶液的浓度范围应是多少？

图8-3 KMnO液的吸收光谱曲线解：若T=20%

则

则c=-lg65%/2235*=*10 -5(mol •L-1)